Object : In conditions of brain infarction, irreversible axon damage occurs in the central nerve system (CNS), because gliosis makes physical and mechanical barriers. If gliosis formation could be suppressed, irreversible axon damage would be reduced. This could mean that an injured CNS could be regenerated. CD81 and GFAP have close relationships to gliosis. The increase in glial cells at CNS injury gives rise to the expression of CD81 and GFAP. CD81 was postulated to play a central role in the process of CNS scar formation. Method : In this study, the author investigated the effect of the water extract of the Moutan Radicis Cortex on regulation of CD81 and GFAP expression in injured CNS cells. MTT assay was used to examine cell viability, while RT-PCR and ELISA methods were carried out to measure the expression of CD81 and GFAP in the astrocyte. Results : We observed that water extract of the Moutan Radicis Cortex increased cell viability under hypoxia induced by $CoCl_2$ and suppressed the expression of CD81 and GFAP up-regulated by hypoxia. Conclusion : These results suggest that the Moutan Redicis Cortex could promote neural regeneration as a consequence of protecting CNS cells from hypoxia and suppressing the reactive gliosis following CNS injury.
중추신경계는 신경원(neuron)과 이를 지지해주는 신경아교세포(neuroglia)로 이루어져 있다. 발생과정중 신경원의 발달은 NGF(neruv growht factor)에 의해 관찰이 가능하고, 아교세포들중 별모양아교세포는 GFAP(Glial fibrillary acidic protein)항체로 밝혀낼 수 있다. CNTF(Cillary neurotrophic factor)는 이전에는 운동신경원의 발생 및 유지에 있어 중요한 역할을 하는 인자로 알려져 왔으며, 최근에는 발생과정 중 NGF와 GFAP의 역할에 도움을 주는 것으로 알려졌다. 본 연구에서는 이러한 NGF, GFAP, CNTF를 발생과정 중(임신 15,17,19,21일, 출생 1,2,3,일, 1,2,3주)의 몽골리안 저빌의 전뇌에서 시간에 따른 분포를 광학현미경, 형광염색을 통한 공초점현미경 및 전자현미경을 통해 알아보고자 하였다. 전뇌에서 NGF는 발생 19일령에서부터 대뇌피질에서 관찰되기 시작해서 후각망울, 해마체 및 diagonal band에 관찰되었고, 출생 3일령에서 가장 강한 염색성을 보였으며 그 반응은 출생 3주까지도 관찰되었다. GFAP는 출생17일령에서 뇌실로부터 아교세포가 관찰되는 형태가 보였으며, 외측뇌실과 제3뇌실에서부터 피질로 이동하는 형태로 관찰되었다. 또한 후각망울의 과립층, 대뇌피질 및 해마체에서 관찰되었으며, 출생 2일령에서 가장 강한 반응을 나타내었다. CNTF는 신경원과 신경아교세포에서 관찰되었으며, NGF와 GFAP와는 달리 출생 전에서는 관찰되지 않다가 출생 1일령부터 후각망울 및 대뇌피질에서 약하게 관찰되기 시작되었으며, 이러한 반응은 출생 2주령에서 잘 관찰되었다. 전자현미경상에서는 신경원과 신경아교세포에서 특징적인 구조는 관찰되지 않았으나, 각각의 항체에 대한 반응이 나타난 세포에서는 사립체와 형질내세망과 같은 세포소기관들이 많이 관찰되었다. 이러한 Mongolian gerbil 전뇌에서의 NGF, GFAP 및 CNTF의 분포는 비슷한 임신일령의 설치류와 거의 유사하게 관찰되었으며, 배아과정 및 출생 후 발달에 따른 전뇌에서의 신경원과 신경아교세포에서의 분포를 볼 수 있었다.
Diverse neurotoxic insults result in proliferation and hypertrophy of astrocytes, a subtype of glia in central nervous system. The hallmark of this response, often terms "reactive gliosis", is the enhanced expression of the major intermediate filament protein of castrocytes, glial fibrillary acidic protein (GFAP). These changes in the astrocytes suggest that GFAP may be a useful biochemical indicator of neurotoxicity. To investigate this possibility, we administered intra-peritoneally prototype nerotoxicants, metharnphetamine (MAP, 5 mg/kg), cocaine (30 mg/kg), N-buthyl benzenesulfonamide (NBBS, 300 mg/kg) and trimethytin (TMT, 8 mg/kg) to Wistar Rats and then assessed the effects of these agents on content of GFAP, which were determined by Sandwish ELISA and evaluated with neurotoxic symptoms, and quantitative changes of imrnunoreactivity of GFAP by light microscopic image analysis in specific regions. We found that assay of GFAP revealed time- and region-dependant patterns of neurotoxicity. The GFAP immunoreactivity of rat brain was increased in substantia nigra and hippocampus by MAP, NBBS and TMT; in roedial septal nucleus and nucleus accurnbens, it was also increased by RrBBS. Sandwich ELISA showed that GFAP levels of cerebrum in all groups on days 3 and 7 and that of brainstem(including cerebellum) in MAP, NBBS groups on day 1 and 3 were increased. A review of the background, design and results of these experiments are presented in this paper. Our findings indicate that GFAP is a sensitive and specific biomarker of neurotoxicity.otoxicity.
본 연구는 전침자극이 일과성 뇌허혈이 유발된 흰쥐 대뇌피질에서 GFAP으로 표지되는 반응성 별아교세포증에 미치는 효과를 동정하기위해서 시행되었다. 실험동물은 전침자극군과 대조군으로 구분하였고, 다시 각 집단을 1일, 3일, 7일 군으로 나누어 각기 15마리씩 무작위 배분하여 실험에 사용하였다. 전침은 인체의 족삼리, 곡지, 음릉선에 상응하는 부위에 자침하고 2 Hz의 근육수축이 현저히 보일 때까지 고강도 (1mA)를 자극하였으며, 전침은 연속파, 직각파, 0.2 ms duration으로 매일 1회 오전 10~12시에 10 분 씩 총 10 회 시행한 뒤, 뇌의 조직절편을 제작하여 GFAP에 대한 면역조직화학염색을 실시해 다음과 같은 결과를 산출 하였다. GFAP의 발현은 뇌허혈로 인해 손상이 유발된 대뇌피질의 혈관주위 및 대뇌피질에서 현저하게 높은 수준으로 관찰되었다. 실험군에서 면역조직화학적으로 표지된 별아교세포들을 계수한 바, 대조군에 비해 뇌허혈이 유발된 1 일 군에서 전침자극군이 약간 감소하였고, 3 일 후에는 현저히 감소하였으며, 7 일 후에는 그 감소정도가 둔화되는 양상을 나타냈다. 대조군에 비해 전침자극군에서 GFAP으로 표지된 별모양아교세포의 수가 모두 감소한 것은 전침자극에 의해 손상의 정도가 감소하여, 전침자극이 신경가소성을 유발시키고 있다는 것으로 관찰되었다.
Object : Gliosis becomes a physical and mechanical barrier to axonal regeneration. Reactive gliosis induced by hypoxic brain injury is involved with up-regulation of CD81 and GFAP. The current study was to examine the effect of the Angelica Sinens on CD81 and GFAP regulation after hypoxic brain injury in the astrocyte. Methods : MTT assay was performed to examine cell viability, and cell based ELISA, western blot and PCR were used to detect the expression of CD81 and GFAP. Results : The following results were obtained: 1. Using ELISA, western blot and PCR from the astrocyte after hypoxic injury, CD81 and GFAP expression was seen to have increased. 2. After the administration of Angelica Sinens extract to astrocyte following hypoxic injury, CD81 and GFAP expression was down regulated significantly. The water extract of Angelica Sinens prevented cell destruction by hypoxic induced with $CoCl_2$. Conclusion : These results indicate that Angelica Sinens could suppress reactive gliosis, which disturbs astrocyte regeneration after hypoxic brain injury by controlling the expression of CD81 and GFAP.
뇌로 전이한 악성 섬유성 조직구종 1례를 문헌 고찰과 함께 보고하고자 한다. 환자는 62세 남자로 다발성 전이성 뇌종양 의증하에 개두술 및 종양 제거술을 시행받았다. 술전 검사상 두개강외 원발 부위를 의심할만한 병변은 발견하지 못하였다. 수술과 전뇌 방사선 치료후 6개월째에 성장하는 우측 견부 종양이 발견되어 적출술을 시행하였다. 뇌와 견부 조직 표본에서 악성 섬유성 조직 세포종에 부합되는 일치된 병리 소견을 보였으나 GFAP-양성 세포들은 뇌병변의 조직 표본에서만 발견되었다. 이후에 발생한 척추 등의 골격계 전이성 병변에 대하여서는 고식적 방사선 치료를 행하였다. 최초 진단 후 12개월째 우측 견부 종양이 재발하여 항암 화학 치료 중이다. 이 증례에서 특이한 점은 원발 부위 발견전 전이성 뇌종양이 진단된 것인데, 악성 섬유성 조직구종으로부터 뇌로 전이한 경우가 드물거니와 특히 원발부위가 확인되기 전에 뇌로 전이한 병변이 먼저 발견된 경우는 보고된 바가 없다. 또 하나의 중요한 소견은 GFAP 발현이 뇌병변에서만 나타나며 원발부위인 견부 종양에서는 관찰되지 않은 점이다. 원발성 두개강내 악성 섬유성 조직구종에서 GFAP-양성 세포의 존재는 중요한 조직학적 특성의 하나로 알려져 있으나, 본 증례의 소견은 원발성 두개강내 악성 섬유성 조직구종에 존재하는 GFAP-양성 세포들도 악성 섬유성 조직구종에 의해 이차적으로 생성된 비종양성 성상 세포들이라는 가설을 뒷받침하고 있다.
Background: Immunohistochemical markers are considered as important factors in diagnosis of malignant astrocytomas. The aim of the current study was to investigate the frequency of the immunohistochemical markers neurofilament protein (NFP) and glial fibrillary acidic protein (GFAP) in malignant astrocytoma tumors in Firoozgar and Rasool-Akram hospitals from 2005 to 2010. Materials and Methods: In this cross-sectional study, immunohistochemical analysis of NFP and GFAP was performed on 79 tissue samples of patients with the diagnosis of anaplastic and glioblastoma multiform (GBM) astrocytomas. Results: The obtained results demonstrated that all patients were positive for GFAP and only 3.8% were positive for NFP. There was no significant association between these markers and clinical, demographic, and prognostic features of patients (p>0.05). Conclusions: NFP was expressed only in GBMs and not in anaplastic astrocytomas. It would be crucial to confirm the present findings in a larger number of tumors, especially in high grade gliomas.
뇌실을 감싸는 뇌실막층은 대부분이 일반적인 뇌실막 세포로 이루어졌으나, 이들 세포 사이에 간혹 띠뇌실막 세포(tanycyte)가 분포하고 있다. 띠뇌실막세포는 일반적인 뇌실막세포와는 달리 뇌의 실질로 뻗은 매우 긴 기저돌기를 갖고 있다. 특히 제3뇌실의 뇌실막층에서 주로 연구된 띠뇌실막세포는 뇌실과 뇌실질의 혈관 혹은 신경세포와의 사이에 물질교환을 담당하는 것으로 추측되고 있으며, 띠뇌실막세포는 일반적인 뇌실막세포와는 달리 glial fibrillary acidic protein(GFAP)항체에 대해 양성반응을 보이는 것으로 알려져 있다. 본 연구는 면역조직화학 및 면역금표지법을 이용하여 박쥐 맨아래구역을 감싸는 뇌실막층에서 GFAP 항체에 대해 양성반응을 보이는 세포의 분포여부 및 이의 미세 구조를 확인하고자 시행하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 세로 절단한 절편을 대상으로 GFAP 항체를 이용하여 면역염색한 후 광학현미경으로 확인한 결과 맨아래구역을 감싸는 뇌실막층에 GFAP 양성반응을 보이는 세포가 관찰되었으며, 특히 맨아래구역의 목부분에서 양성반응 세포가 많이 모여 있었다. GFAP양성반응을 보이는 세포들은 매우 긴 기저돌기를 갖고 있었으며, 기저돌기에서도 매우 강한 GFAP 양성반응을 보였다. 세포체에서는 주변부에서 양성반응을 보였다. 전자현미경하에서 맨아래구역 띠뇌실막세포는 주로 ependymal tanycytes였으며, 자유면에 소수의 미세융모 및 세포질돌기가 관찰되었으나, 섬모는 관찰되지 않았다. 기저부에 특징적으로 긴 기저돌기를 갖고 있었으며 이 돌기에는 중간세사 및 세로로 길게 달리는 사립체가 발달되어 있었고, 세포체와 돌기에 지방방울이 산재되어 있었다. 금입자를 표지한 GFAP항체를 사용하여 면역 염색한 후 전자현미경으로 관찰한 결과 세포체에서 핵을 둘러싸는 중간세사에서 금입자를 관찰할 수 있었으며, 나머지 핵을 비롯한 다른 세포소기관이나 세포질에서는 관찰되지 많았다. 또한 기저돌기에서도 중간세사에서만 금입자를 관찰할 수 있었다. 이와 같은 본 실험의 결과는 박쥐 맨아래구역 뇌실막층에도 띠뇌실막세포가 존재하고 있으며, 이 세포의 발달된 긴 기저돌기는 띠뇌실막세포가 일반적인 뇌실막세포와는 다른 기능을 동면동물인 박쥐의 맨아래구역에서도 수행하고 있음을 암시하고 있으나 이를 확인하기 위해서 더욱 자세한 연구가 필요한 것으로 사료된다.
Objective : Following central nervous system(CNS) injury, inhibitory influences at the site of axonal damage occur. Glial cells become reactive and form a glial scar, gliosis. Also myelin debris such as MAG inhibits axonal regeneration. Astrocyte-rich gliosis relates with up-regulation of GFAP and CD81, and eventually becomes physical and mechanical barrier to axonal regeneration. MAG is one of several endogenous axon regeneration inhibitors that limit recovery from CNS injury and disease. It was reported that molecules that block such inhibitors enhanced axon regeneration and functional recovery. Recently it was reported that treatment with anti-CD81 antibodies enhanced functional recovery in the rat with spinal cord injury. So in this current study, the author investigated the effect of the water extract of Uncariae Ramulus et Uncus on the regulation of CD81, GFAP and MAG that increase when gliosis occurs. Methods : MTT assay was performed to examine cell viability, and cell-based ELISA, western blot and PCR were used to detect the expression of CD81, GFAP and MAG. Then also immunohistochemistry was performed to confirm in vivo. Results : Water extract of Uncariae Ramulus et Uncus showed relatively high cell viability at the concentration of 0.05%, 0.1% and 0.5%. The expression of CD81, GFAP and MAG in astrocytes was decreased after the administration of Uncariae Ramulus et Uncus water extract. These results was confirmed in the brain sections following cortical stab injury by immunohistochemistry. Conclusion : The authors observed that Uncariae Ramulus et Uncus significantly down-regulates the expression of CD81, GFAP and MAG. These results suggest that Uncariae Ramulus et Uncus can be a candidate to regenerate CNS injury.
홍역이환개의 중추신경계에서 발생한 수초탈락을 수반하는 뇌척수염을 병리조직학적으로 관찰하고 조직반응과 수축탈락의 과정을 알아보기 위하여 중추신경계 조직을 파라핀 포매, 절편을 만들고 병소가 빈발하는 소뇌와 시신경로는 수초의 주요 구성단백인 MBP와 MAG 그리고 별아교세포의 Marker인 GFAP의 항혈청을 반응시켜 면역세포학적으로 관찰하였다. 조직학적으로는 대뇌에서 신경세포의 일부괴사, 신경아교세포의 결절형성, 소뇌에서는 4뇌실에 인접하여 백질부에서 수초의 공포변성, 수초탈락과 염증세포의 침윤이 현저하였고 피질부의 과립층에 인접한 부위와 시신경로에서도 수초탈락이 인정되었다. MBP와 MAG를 면역반응시킨 결과 수초의 공포화와 수초탈락이 현저한 부위에서는 MBP와 MAG가 동시에 소실되었고 부위에 따라서는 MBP또는 MAG가 먼저 소실되기도 하였다. 동시에 별아교세포의 반응은 수초탈락 초기에는 GFAP양성의 섬유와 세포가 크게 증가한 반면 수초탈락이 심하게 진행된 부위에서는 오히려 소실되는 경향이었다. 따라서 홍역이환 개에서 발생되는 수초탈락은 일차적으로 수초가 공격을 받아 파괴됨을 알 수 있었고 동시에 부위에 따라 다른 소견을 요인별로 비교하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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