본 연구에서는 택칠에서 분리된 CRN(corilagin)이 류마티스성 관절염 치료제로 사용될 수 있는가능성을 조사하기 위하여 류마티스성 관절염의 동물 모델인 CIA(collagen induced arthritis) 생쥐에 CRN을 복강 투여하여 CIA의 발병률 및 관절염 지수 등에 대한 효과를 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 택칠에서 분리한 corilagin을 관절염 유발 생쥐에게 투여한 결과, 관절염의 발병진행이 억제되고 관절염 지수가 감소되는 것을 확인하였다. 세포 조직학적 관찰을 통하여 염증성 세포들이 현저하게 줄어들고, 관절강이 잘 확보되었으며, pannus의 형성이 보이지않고 연골 또한 잘 보호되어져 있음을 확인하였다. 관절염 유발 생쥐의 형광유세포 분석결과 각 조직에 침윤되는 염증세포가 감소하였다.
양배추 F$_1$ 종자 그린 챌린저 배축으로부터 분리된 원형질체로부터 재분화된 protoclone들에 대한 형태적 특성, 배수성, 동위효소, RAPD 분석으로 변이 양상을 살펴보았다. 형태적 특성은 초자, 엽형, 엽색, 엽결각, savoy, wave등을 조사한 결과 대부분이 형태적으로 원식물체와 같았으나 3개체는 잎의 결각이 뚜렷하고 1개체는 savoy와 wave가 심하게 나타났다. Flow cytometry system으로 종자에서 정상적으로 발아한 배축, 자엽과 잎의 배수성을 측정한 결과 배측과 자엽에서는 2배체와 4배체 세포가 혼합되어 있었으나 잎에서는 일정하게 정상적인 2배체로 측정되었다. 잎을 재료로 하여 125개체 protoclone들의 배수성을 본 결과 2배체 91개체(72.8%), 4배체 32개체(25.6%), 혼합배수체 2개체(1.6%)로 나타났다. 또한 4배체를 나타내는 R$_{0}$ protoclone 개체를 자가수분시켜 얻은 종자를 발아시켜 배축, 자엽과 잎의 배수성을 측정한 결과 잎에서 4배체, 배축과 자엽에서는 4배체, 8배체 세포가 혼합되어 있었다. PGM과 MDH 동위효소 분석 결과 R$_{0}$ 정상개체 그리고 변이를 나타낸 개체, 배수성이 다른 개체들간의 밴드양상은 같았으며 15종류의 random primer를 사용한 RAPD에서도 차이는 없었다.없었다.
The purported four hybrid origins of Asplenium in Korea were tested based on morphological, cytological and DNA sequence data. Asplenium castaneo-viride, A. ${\times}$ uiryeongse, A. ${\times}$ montanus, and A. ${\times}$ kitazawae share several morphological characteristics with the Asian walking fern A. ruprechtii and related taxa as parents and show a sympatric distribution with the putative parents, raising the possibility of hybrid origins: A. castaneo-viride (A. ruprechtii and A. incisum), A. ${\times}$ uiryeongse (A. ruprechtii and A. pekinense), A. ${\times}$ montanus (A. ruprechtii, A. trichomanes, and A. incisum), and A. ${\times}$ kitazawae (A. ruprechtii and A. sarelii). We investigated flow cytometry and chloroplast DNA sequence data (rbcL, rps4-trnS, and rps4-trnS intergenic spacer) to clarify the hybridization and origin of each hybrid. In the flow cytometry analyses, A. ruprechtii shows diploid (2x) only, whereas A. castaneo-viride (3x, 4x), A. ${\times}$ uiryeongse (3x), A. ${\times}$ montanus (3x, 4x), and A. ${\times}$ kitazawae (2x, 4x) exhibit polyploidy, suggesting hybrid events along speciation. The rbcL and rps4-trnS and rps4-trnS intergenic spacer data suggest that A. ruprechtii is one the maternal ancestors of all four hybrids. In addition, the rps4-trnS and rps4-trnS intergenic spacer data indicate that A. incisum is also the maternal ancestor of A. ${\times}$ kitazawae and A. ${\times}$ montanus, proposing multiple hybridization events for these two hybrids. In A. ${\times}$ montanus, morphological features such as the leaf forms and sympatric distributions of the species also support the multimaternal hypothesis, but the morphological features of A. ${\times}$ kitazawae must be examined with consideration of hybrid events. To clarify the complex hybrid evolutionary lineages of the four Asplenium hybrids, further research with taxon sampling and molecular markers should be conducted.
유동 세포 분석법은 세포나 입자에 대하여 정밀하고 다양한 광학적 특성을 제공해주는 전기적 탐지 기술이다. 형광 처리된 세포나 미립자에 특정한 파장의 빛을 가함으로써 발생 되는 광 산란과 형광 방출을 통해 세포의 크기와 입상도를 포함한 다차원적인 정보를 제공해주는 유동 세포 분석법은 생체 의학 분야 또는 생물 물리학 분야에서 중요한 역할을 수행한다. 그러나 유동 세포 분석법은 고가이며 장비 설치에 있어 적절한 공간이 필요하고 형광 염료 선택에 제한적이라는 단점을 가지고 있다. 따라서 본 논문에서는, 상용화된 유동 세포 분석에 사용되는 고가의 레이저와 운영시스템 대신 발광 다이오드, 마이크로 컨트롤러와 광 검출기를 사용한 저가의 형광세포 측정 시스템을 개발하여 사용자가 원하는 형광 염료에 대한 자유도를 높였다. 또한, 3D 프린터를 사용하여 모듈별 소형화 및 경량화를 통한 사용자 맞춤형 제작이 가능하도록 하였다. 그 결과, 형광처리 한 세포의 양에 변화를 주어 발광도를 측정하였을 때, 높은 선형성이 보임을 확인할 수 있었다.
남해의 광양만과 진해만에 서식하는 자연산 참굴의 건강성 평가를 위해 세포성 면역을 담당하는 혈구의 기능들을 유세포 분석기와 Neutral Red Retention(NRR) assay를 이용하여 신속, 정확하게 측정하였다. 광양만과 진해만의 안쪽과 바깥쪽에 서식하는 자연산 참굴의 혈구를 유세포 분석기를 이용하여 형태학적 특성에 따라 혈구의 종류를 분류하고, 혈구 종류별 수, 사멸률, DNA 손상도, 식세포능을 측정하였다. 또한 NRR assay를 이용하여 혈구의 lysosomal membrane stability를 측정하였다. 참굴의 혈구는 granulocytes, hyalinocytes, blast-like cells의 세 가지 종류로 분류되었다. 조사 지역 간의 혈구의 수, 사멸률, DNA 손상도는 유의적 차이가 없었지만, 식세포율과 lysosomal membrane stability와 같은 면역 관련 기능들은 유의적 차이가 있었다. 진해만은 내만과 외만 지역에 서식하는 참굴의 혈구 면역인자들 간에는 유의적 차이가 관찰되지 않았다. 이에 반해, 광양만에 서식하는 참굴은 내만 지역의 섬진대교가 외만 지역의 평산리 지역에 서식하는 참굴보다 낮은 식세포율과 낮은 lysosomal membrane stability를 보여 면역력이 저하되어 있는 것으로 추정된다. 하지만, 해양환경 변화와 시료의 면역력과의 상관관계를 이해하기 위해서는 조사지역의 환경적 특성이나 오염정도, 그리고 시료 내의 오염물질 축적량 등의 객관적인 분석 결과와의 종합적인 고찰이 필요할 것이다. 유세포 분석기와 NRR assay를 이용한 참굴 혈구 집단의 형태 변화 및 면역능 측정 기술은 시료의 전처리 없이 빠른 시간 내에 세포의 특성을 분석할 수 있는 유용한 분석 tool로 활용될 수 있음을 확인하였다.
본 연구에서는 ursolic acid의 위의 보호효과를 위한 실험을 실시하였다. 위장 질병에 대한 ursolic acid의 효과를 확인하기 위해서 급성, 만성위염은 각각의 HCl ethanol과 indomethacin에 의해 유도된 위염 동물 모델을 사용하여 관찰하였다. 대표적인 공격인자인 위산에 관해서는 PPI activity를 통해서 확인하였고, 위의 손상에 대한 보호인자에 관해서는, $PGE_2$를 정량적으로 분석하였다. 항균활성 실험은 만성위염, 위궤양, 위암에 원인인자로 잘 알려진 H. pylori로 실험하였다. AGS cell를 이용하여 DAPI 염색, Flow cytometry assay를 통하여 ursolic acid가 위암세포의 apoptosis에 관여하는지를 확인하였다. 그 결과 ursolic acid는 HCl ethanol과 indomethacin에 의해 유도된 급성, 만성에 대한 위손상을 억제하였다. Ursolic acid는 위산분비의 마지막 단계인 위염분비효소인 proton pump를 억제시킴으로써 산의 분비를 억제하였다. 그리고 ursolic acid는 위 점막의 보호인자인 $PGE_2$의 농도가 증가함으로써 위 점막 보호 효과를 확인하였다. 또한 ursolic acid는 공격인자인 H. pylori colonization을 억제하였다. DAPI를 이용한 핵 염색에서, 대조군과는 달리, 핵 형상의 변형과 함께 수축 된 세포 또는 염색질의 응축현상이 관찰되었다. Flow cytometry assay에서 ursolic acid에 의해 apoptosis가 증가하는 것을 확인 하였다. 이를 통하여 ursolic acid는 위 손상에 대한 방어 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
Purpose : To observe and evaluate the effects of Simvastatin-induced osteogenesis on the wound healing of defective bone. Materials and Methods : 64 defective bones were created in the parietal bone of 32 New Zealand White rabbits. The defects were grafted with collagen matrix carriers mixed with Simvastatin solution in the experimental group of 16 rabbits and with collagen matrix carriers mixed with water in the controlled group. The rabbits were terminated at an interval of 3, 5, 7, and 9 days, 2, 4, 6, and 8 weeks after the formation of defective bone. The wound healing was evaluated by soft X-ray radiography. The tissues within defective bones were evaluated through the analysis of flow cytometry for the manifestation of Runx2 and Osteocalcin, and observed histopathologically by using H-E stain and Masson's trichrome stain. Results : 1. In the experimental group, flow cytometry revealed more manifestation of Runx2 at 5, 7, and 9 days and Osteocalcin at 2 weeks than in the controlled groups, but there was few difference in comparison with the controlled group. 2. In the experimental group, flow cytometry revealed considerably more cells and erythrocytes at 5, 7, and 9 days in comparison with the controlled group. 3. In the experimental group, soft x-ray radiography revealed the extended formation of trabeculation at 2, 4, 6, and 8 weeks. 4. Histopathological features of the experimental group showed more fibroblasts and newly formed vessels at 5 and 7 days, and the formation of osteoid tissues at 9 days, and the newly formed trabeculations at 4 and 6 weeks. Conclusion : As the induced osteogenesis by Simvastatin, there was few contrast of the manifestation between Runx2 and Osteocalcin based on the differentiation of osteoblasts. But it was considered that the more formation of cells and erythrocytes depending on newly formed vessels in the experimental group obviously had an effect on the bone regeneration.
한 생물체의 전체 유전체 크기는 계통학, 육종학, 집단유전학, 진화학과 같은 많은 분야에 활용될 수 있는 기본적인 정보이다. 최근에는 전체 유전체 결정 연구에서 특히 강조되고 있는데, 이는 최소 유전체 크기를 갖는 분류군의 선택은 유전체 결정사업의 효율성과 직접적으로 연관되어 있기 때문이다. 그러므로 유전체 연구의 선행 단계로서 연구 대상 종 및 연관된 분류군들의 유전체 양의 파악은 필수적이다. 본 연구에서는 쉽고 빠르면서도 신뢰성 있는 방법으로 알려져 있는 flow cytometry를 이용하여 한반도에 자생하는 꿀풀과의 9속 15 분류군에 대한 유전체 크기를 측정하였다. 본 연구에서 유전체 양이 측정된 15 분류군들은 모두 최초로 그 유전체 양이 조사된 분류군들로서 Plant DNA C-value Database (http://data.kew.org/cvalues/)에 수록된 바 없는데, 특히 Agastache, Clinopodium, Elsholtzia, Isodon에 속하는 분류군들은 속 수준에서의 최초의 보고이다. 골무꽃(Scutellaria indica L.)은 0.37 pg (1C)의 유전체 크기를 갖는 것으로 측정되었는데, 이는 현재까지 보고된 꿀풀과 98 분류군의 유전체 양들 중 네 번째로 유전체의 크기가 작은 분류군이다. 이에 골무꽃은 향후 유전체 연구를 위해 꿀풀과를 대표할 한국 자생종으로서 우선적으로 선택하여 분석할 수 있는 종일 것이다. 조사된 분류군들 중 가장 유전체 크기가 큰 분류군은 속단(Phlomis umbrosa Turcz.; 1C=2.6 pg)으로서 이는 다배체 형성에 의한 본 종의 기원 가능성을 제시하고 있다.
Objective : In this study, we investigated the relationship between the histologic grading of meningiomas and proliferative potentials determined by the Ki-67, proliferating cell nuclear antigen(PCNA) and flow cytometry (FCM) with the aim of determining whether these potentials can be used as a parameter to the proliferative activity, in particular of atypical and malignant meningiomas. Methods : This study consisted of 47 meningiomas(6 malignant, 14 atypical, and random sampled 27 benign meningiomas). By immunohistochemical staining of Ki-67 and PCNA on formalin-fixed, paraffin-embedded sections, the anti-human rabbit polyclonal antibody against Ki-67 antigen and anti-PCNA monoclonal antibody(PC10) scores were counted. FCM was also performed on paraffin-embedded tissue using a selective staining technique for DNA. DNA ploidy, S-phase fraction, and proliferative index(PI)) were determined. Results : The results are summarized as follows ; 1) Proliferation rates as assessed by Ki-67 and PCNA closely correlated with the degree of anaplastic histologic features. 2) Proliferative potentials determined by FCM(S-phase fraction and PI) were not able to distinguish between benign and atypical/malignant meningiomas. 3) DNA ploidy was not a useful indicator of histologic grade in these tumors. 4) Proliferative potentials such as Ki-67 staining index(SI) and PCNA SI did not correlate with the ploidy pattern. 5) There was a linear correlation between Ki-67 SI and PCNA SI, but we could not find a correlation between Ki-67 SI and S-phase fraction or PI. Our results also did not show a statistically signficant correlation between PCNA SI and S-phse fraction or PI. Conclusions : We conclude that evaluation of the proliferative potentials with Ki-67 and PCNA is important as an additional factor for the prediction of malignancy in meningiomas. A dual study of Ki-67 and PCNA SIs on the same tissue might improve the accuracy with which the proliferative potential of a tumor can be predicted. We demonstrated that FCM in meningiomas is not valuable in predicting the behavior of these neoplasms, but we did observe a trend toward more malignancy with higher percent S-phase fraction and higher PI. Analysis of the S-phase fraction and PI might therefore be a useful tool to discriminate among histologic grades of meningiomas.
Allium 속 근연종인 파와 양파간 종간교잡을 이용하여 양파로부터 새로운 형질을 도입하는 과정에서 유래되는 종간교잡 F1과 여교잡 세대들의 게놈크기의 변화를 flow cytometry를 이용하여 측정한 결과 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 양파와 파의 종간교잡 F1의 식물학적 특성은 양친의 중간형을 보였으나 여교잡이 진전됨에 따라 반복친인 파의 표현형이 우세하였다. flow cytometry를 이용하여 2C nuclear DNA content을 측정한 결과 $F_1$은 양친에 비해 오히려 증가하였으나 여교잡이 진행됨에 따라 급속히 감소하여 $BC_2F_1$에서는 반복친과 비슷한 수준으로 감소하였다. 여교잡세대의 자식인 $BC_1F_2$은 반복친과 비슷한 $23.1{\pm}1.0pg$으로 측정되었으나 $BC_2F_2$는 $22.9{\pm}0.4pg$으로 반복친의 2C nuclear DNA content인 $23.2{\pm}0.2pg$ 보다 오히려 감소하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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