The success of embryo cloning depends on numerous factors; interaction between recipient ooplasm and donor nucleus, nuclear reprogramming, oocyte activation, and donor cell cycle and type. In this study, the cell cycle and apoptosis of bovine fetal fibroblast as a donor cell for embryo cloning were evaluated following different activation treatments. (omitted)
Im, Gi-Sun;Yang, Byoung-Chul;Park, Jin-Ki;Kim, Hyun-Ju;Chang, Won-Kyung;R. S. Prather;B. N. Day
Proceedings of the KSAR Conference
/
2001.03a
/
pp.66-66
/
2001
Since the first birth of pig derived from embryonic cells by nuclear transfer, many researches to produce cloned pig have been carried out. Recently, two reports about the birth of somatic cell cloned pigs using in vivo oocytes and also Betthauser et al. (2000) reported the birth of somatic cell cloned pigs using in vitro oocytes. So here we investigated the effect of activation method and culture medium on in vitro development of porcine nuclear transfer embryo using fetal fibroblast. Oocytes derived from slaughter house obtained ovaries were matured for 42 to 44 h in TCM 199. Matured oocytes were denuded using 0.1% hyaluronidase and then Oocytes with the first polar body were used for enucleation by aspirating the first polar body and adjacent cytoplasm in TCM 199 supplemented with 7.5 $\mu\textrm{g}$ cytochalasin B. Petal fibroblast cells were prepared from 35 days old fetus. To be used as donor cells, fetal fibroblast cells were serum starved for 3 to 5 days and then isolated into single co:1 by trypsinization. Nuclear transfer embryos were fused using 2 times 1.25㎸ for 30$mutextrm{s}$. Fused NT embryos were activated with calcium ionophore (CI) and 6-dimethyl-aminopurine (6-DMAP). Activated oocytes were cultured in NCSU 23 or BECM 3 for 6 days. There was no significant difference between chemical activation and no chemical activation for blastocyst development rate(11.6 vs. 14.8%). However, cell number was significantly higher when NT embryos were activated with CI and 6-DMAP (31.2 vs. 22.6). When NT embryos were cultured in NCSU 23 or BECM 3, blastocyst development rate was 16.4 and 13.2%, respectively, and cell number was 31.5 and 24.1, respectively. These results suggest that chemical activation after fusion and culture in NCSU 23 could increase cell number of porcine NT embryos.
Three synthetic chemicals, benzoyl chloride, 2-propyn-l-ol, and 2-phenoxy ethanol were selected for genotoxicity testing, based on production quantity and available genotoxic data. In our previous report, benzoyl chloride induced chromosomal aberrations in Chinese hamster lung (CHL) fibroblast in vitro with and without metabolic activation, while 2-propyn-l-ol and 2-phenoxy ethanol induced only with metabolic activation. To compare the genotoxicity of chromosome aberration assay, the single cell gel electrophoresis (comet) assay subjected using CHL cells. As a result, statistically significant differences of tail moment values of benzoyl chloride, 2-propyn-1-ol, and 2-phenoxy ethanol were observed compared with control values on almost all concentrations with S9 or without S9 metabolic activation system. This results suggest that genotoxic results of the comet assay and the chromosome aberration assay show correlationship of genotoxicity in the CHL fibroblast. In summary, the positive result of chromosome aberration of benzoyl chloride, 2-propyn-l-ol, and 2-phenoxy ethanol was also induced DNA damages in comet assay with same cell line. Consequently, comet assay will be useful and more accurate tool to detect and to confirm the genotoxicity especially DNA damages in CHL fibroblast.
Woo, Min Seok;Park, Jiyoung;Ok, Seong-Ho;Park, Miyeong;Sohn, Ju-Tae;Cho, Man Seok;Shin, Il-Woo;Kim, Yeon A
The Korean Journal of Pain
/
v.34
no.1
/
pp.19-26
/
2021
Background: Prolotherapy is a proliferation therapy as an alternative medicine. A combination of dextrose solution and lidocaine is usually used in prolotherapy. The concentrations of dextrose and lidocaine used in the clinical field are very high (dextrose 10%-25%, lidocaine 0.075%-1%). Several studies show about 1% dextrose and more than 0.2% lidocaine induced cell death in various cell types. We investigated the effects of low concentrations of dextrose and lidocaine in fibroblasts and suggest the optimal range of concentrations of dextrose and lidocaine in prolotherapy. Methods: Various concentrations of dextrose and lidocaine were treated in NIH-3T3. Viability was examined with trypan blue exclusion assay and 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay. Migration assay was performed for measuring the motile activity. Extracellular signal-regulated kinase (Erk) activation and protein expression of collagen I and α-smooth muscle actin (α-SMA) were determined with western blot analysis. Results: The cell viability was decreased in concentrations of more than 5% dextrose and 0.1% lidocaine. However, in the concentrations 1% dextrose (D1) and 0.01% lidocaine (L0.01), fibroblasts proliferated mildly. The ability of migration in fibroblast was increased in the D1, L0.01, and D1 + L0.01 groups sequentially. D1 and L0.01 increased Erk activation and the expression of collagen I and α-SMA and D1 + L0.01 further increased. The inhibition of Erk activation suppressed fibroblast proliferation and the synthesis of collagen I. Conclusions: D1, L0.01, and the combination of D1 and L0.01 induced fibroblast proliferation and increased collagen I synthesis via Erk activation.
To investigate the effects of protein kinases on endothelin-1-induced phospholipase C activation and $Ca^{2+}$ mobilization in Rat-2 fibroblast, we measured the formation of inositol phosphates and intracellular $Ca^{2+}$ concentration with [$^3$H]inositol and Fura-2/AM, respectively. Endothelin-1 dose-dependently activated phospholipase C and increased intracellular $Ca^{2+}$ concentration. Protein kinase C activator PMA, significantly inhibited both phospholipase C activity and $Ca^{2+}$ mobilization induced by endothelin-1. Tyrosine kinase inhibitor, genistein, inhibited both. On the other hand, cyclic nucleotide (cAMP and cGMP) did not have any influence on the signaling pathway of phospholipase C-Ca$^{2+}$ mobilization induced by endothelin-1. These results suggest that protein kinase C and tyrosine kinase counteract on the signaling pathway of phospholipase C-Ca$^{2+}$ mobilization induced by endothelin-1 in Rat-2 fibroblast. fibroblast.
This study was conducted to investigate nuclear remodeling and developmental rate following nuclear transfer of fetal fibroblast cells, ear skin cells and oviduct epithelial cells into porcine recipient oocytes. To test par-thenogenetic activation, oocytes were treated with a 6-dimethylaminopurine (6-DMAP), a single DC-pulse (DC), calcium ionomycin (ionomycin), DC+6-DMAP and ionomycin + 6-DMAP after in vitro maturation. For nuclear transfer, in vitro matured oocytes were enucleated, and donor cells were transferred into oocytes. Cloned embryos were fused and stimulated with 6-DMAP for 4 h and cultured in vitro for 6 days. Among treatments for parthenogenesis, the activation rate of DC +6-DMAP treatment was significantly higher than that of single treatment roups (p<0.01), except for DC treatment group. However, the difference was not significant in activation rate compared to other complex treatment groups. Nuclear swelling of the cloned embryos was initiated at 60 min after stimulation and increased afterwards. Fusion rates were not different among different donor cells. Cleavage rates of DC treatment groups were significantly higher than those of DC+6-DMAP treatment groups (p<0.05) in case that fetal fibroblast and ear cells were used for nuclear donor. The cloned embryos from developed to blastocysts in oviduct epithelial cell nuclear transfer with DC+6-DMAP treatment was significantly higher compared to those with DC only treatment (p<0.05). However, no blastocyst was developed from nuclear transfer of fetal fibroblast and ear cells regardless of activation treatments. Based on these results, a proper activation stimulation may be necessary to increase the activation rate and the development to blastocyst in cloned porcine embryos.
Acetylcholine receptors (AChR) including muscarinic and nicotinic AChR are widely expressed and mediate a variety of physiological cellular responses in neuronal and non-neuronal cells. Notably, a functional cholinergic system exists in oral epithelial cells, and nicotinic AChR (nAChR) mediates cholinergic anti-inflammatory responses. However, the pathophysiological roles of AChR in periodontitis are unclear. Here, we show that activation of AChR elicits increased cytosolic $Ca^{2+}([Ca^{2+}]_i)$, transient cytotoxicity, and induction of receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand (RANKL) expression. Intracellular $Ca^{2+}$ mobilization in human gingival fibroblast-1 (hGF-1) cells was measured using the fluorescent $Ca^{2+}$ indicator, fura-2/AM. Cytotoxicity and induction of gene expression were evaluated by measuring the release of glucose-6-phosphate dehydrogenase and RT-PCR. Activation of AChR in hGF-1 cells by carbachol (Cch) induced $[Ca^{2+}]_i$ increase in a dose-dependent manner. Treatment with a high concentration of Cch on hGF-1 cells caused transient cytotoxicity. Notably, treatment of hGF-1 cells with Cch resulted in upregulated RANKL expression. The findings may indicate potential roles of AChR in gingival fibroblast cells in bone remodeling.
Allergic inflammation is thought to be a Th2 cell-dominant immune response during which tissue-resident fibroblasts produce chemokines which contribute to the recruitment of migratory leukocytes to sites of tissue injury. Thymus and activation-regulated chemokine (TARC; CCL17) is a potent member of the CC chemokine family and a selective chemoattractant for Th2 cells. In order to study the regulatory profiles of TARC production by $TNF-{\alpha}$, $IFN-{\gamma}$, and Il-4 in human normal skin fibroblast, CCD-986sk cell line was used. The expression of TARC protein was measured using ELISA, and mRNA level was detected by RT-PCR. The combination of $TNF-{\alpha}$ and IL-4 induced a time-and dose-dependent synergistic increase in the expression of TARC at both protein and mRNA levels in the cultured human skin fibroblasts. Exposure of the cells to single cytokine had no effect on TARC expression. The high concentration (100 ng/ml) and long incubation time (72 h) of $IFN-{\gamma}$ further enhanced the TARC production induced by $TNF-{\alpha}$/lL-4 in the skin fibroblast. This synergistic effect of Th1 and Th2 type cytokines on TARC production by skin fibroblasts may contribute to the inflammatory cell infiltration and tissue damage with allergic inflammation.
Lee, Ki Man;Shim, Hong;Lee, Geum Seon;Park, Il Ho;Lee, Ok Sang;Lim, Sung Cil;Kang, Tae Jin
Biomolecules & Therapeutics
/
v.21
no.3
/
pp.246-250
/
2013
We previously reported that the extract from cuttlebone (CB) has wound healing effect in burned lesion of rat. In present study, the main component of CB extract was analyzed and its wound healing activity was evaluated by using in vitro acute inflammation model. The extract of CB stimulated macrophages to increase the production of TNF-${\alpha}$. The extract also enhanced the production of TGF-${\beta}$ and VEGF, which were involved in angiogenesis and fibroblast activation. The treatment with CB extract enhanced proliferation of murine fibroblast. CB extract also induced the activation of fibroblast to increase the secretion of matrix metalloproteases 1 (MMP1). The constituent of CB extract which has wound healing activity was identified as chitin by HPLC analysis. The mechanism that the CB extract helps to promote healing of burned lesion is associated with that chitin in CB extracts stimulated wound skins to induce acute inflammation and to promoted cell proliferation and MMP expression in fibroblast. Our results suggest that CB or chitin can be a new candidate material for the treatment of skin wound such as ulcer and burn.
Fetal bovine serum (FBS), which contains various nutrients, comprises 20% of the growth medium for cell-cultivated meat. However, ethical, cost, and scientific issues, necesitates identification of alternatives. In this study, we investigated commercially manufactured serum-free media capable of culturing Hanwoo satellite cells (HWSCs) to identify constituent proliferation enhancing factors. Six different serum-free media were selected, and the HWSC proliferation rates in these serum-free media were compared with that of control medium supplemented with 20% FBS. Among the six media, cell proliferation rates were higher only in StemFlexTM Medium (SF) and Mesenchymal Stem Cell Growth Medium DXF (MS) than in the control medium. SF and MS contain high fibroblast growth factor 2 (FGF2) concentrations, and we found upregulated FGF2 protein expression in cells cultured in SF or MS. Activation of the fibroblast growth factor receptor 1 (FGFR1)-mediated signaling pathway and stimulation of muscle satellite cell proliferation-related factors were confirmed by the presence of related biomarkers (FGFR1, FRS2, Raf1, ERK, p38, Pax7, and MyoD) as indicated by quantitative polymerase chain reaction, western blotting, and immunocytochemistry. Moreover, PD173074, an FGFR1 inhibitor suppressed cell proliferation in SF and MS and downregulated related biomarkers (FGFR1, FRS2, Raf1, and ERK). The promotion of cell proliferation in SF and MS was therefore attributed to FGF2, which indicates that FGFR1 activation in muscle satellite cells may be a target for improving the efficiency of cell-cultivated meat production.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.