Seo, Eun-Yeong;Son, Gwang-Hui;Sin, Dong-Ha;Kim, Gi-Deok;Park, Du-Sang;Park, Ho-Yong
한국생물공학회:학술대회논문집
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2002.04a
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pp.469-472
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2002
Solid state fermentation was performed for the production of entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae HY-2 using wheat bran media containing rice bran. Fungal growth in a solid state fermentation system was estimated by viable cell count, spore count, and mycelial biomass. It was used chemical method measuring N-acetyl-glucosamine (chitin) content for estimating of mycelial biomass. In static flask culture, viable cell reached 2.40 ${\times}$$10^8$ cfu/g at 23 days of culture at $27^{\circ}C$ and then mycelial biomass was 41.59 mg/g. Specific growth rate(${\mu}$ max) was 0.0418 $h^{-1}$ between 3 and 9 days when estimated by viable cell count and was 0.00976 $h^{-1}$ between 9 and 17 days when N-acetylglucosamine content was measured. Viable cells reached 1.12 ${\times}$$10^8$ cfu/g in polypropylene-bag at 28 days of culture at $27^{\circ}C$. Formulated microbial pesticide containing M. anisopliae HY-2 were tested their bio-activity against Chestnut Brown Chafer (Adoretus tenuimaculatus). The protection rate of the liquid culture showed 13 ${\sim}$ 26 % with 1st to 3rd instar, and spore suspension of M. anisopliae HY-2 showed 56 ${\sim}$ 64%. Conidia produced by large scale solid-state fermentation showed 20 ${\sim}$ 27 % activity 60 ${\sim}$ 64 % with M. anisopliae HY-2.
The unstructured model was tested to describe mycelial growth, exopolysaccharide formation, and substrate consumption in submerged mycelial culture of Paeeiliomyees tenuipes C240. The Logistic equation for mycelial growth, the Luedeking-Piret equation for exopolysaccharide formation, and LuedekingPiret-like equations for glucose consumptions were successfully incorporated into the model. The value of the key kinetic constants were: maximum specific growth rate ${\mu}m,\;0.7281\;h^{-1};$ growthassociated constant for exopolysaccharide production $(\alpha),\;0.1743g(g\;cells)^{-1}$; non-growth associated constant for exopolysaccharide production $(\beta),\;0.0019g(g\;cells)^{-1}\;;$ maintenance coefficient $(m_s),\;0.0572g\;(g\;cells)^{-1}$. When compared with batch experimental data, the model successfully provided a reasonable description for each parameter during the entire growth phase. The model showed that the production of exopolysaccharide in P. tenuipes C240 was growth-associated. The model tested in the present study can be applied to the design, scale-up, and control of fermentation process for other kinds of basidiomycetes or ascomycetes.
For Trametes sp. CJ-105, a kind of white-rot fungi which was collected from the mountain of Korea and was proven to be effective in decolorizing a wide range of structurally different synthetic dyes, the optimum conditions for mycelial growth and laccase(E.C. 1.10.3.2) production were investigated. Among various carbon sources, glucose showed the highest potential for the mycelial growth and laccase production, the optimum concentration being 2% glucose. For the nitrogen source, asparagine was good for the mycelial growth, while ammonium tartrate for laccase production(optimum concentration: 0.04%). The addition of thiamine and biotin increased both th emycelial growth and laccase production. When 2,5-xylidine was added as an inducer after the first day of culture, the production of alccase was seven-times higher than that in the absence of the inducer. The optimum pH and temperature conditions for laccase production by Trametes sp. CJ-105 were pH 5.0 and $25^{\circ}C$, respectively. In the 5L fermentation, the production of laccase reached a maximum of 340U/ml at the time when the ammonium ion was being rapidly depleted.
By UV-irradiation of Eremothecium ashbyii DTl, a higWy flavinogenic mutant (UV-18-57) and a nonflavinogenic mutant (UV -85) were obtained. The physio-morphological characteristics of these three strains were studied on glucose medium in submerged fermentation. Glucose utilization and mycelial growth occurred in 0 - 2 days of fermentation. By the third day, the biomass had declined. Extracellular riboflavin excretion was distinct from the second day, reaching a maximum rate by the fourth day. The hyphae of the highly flavinogenic mutant UV-18-57 were broader than DTl, while the nonflavinogenic UV-85 hyphae were very thin. Riboflavin accumulation was high in UV-18-57 (extracellular riboflavin,$825\mu\textrm{g}/ml$ , and intracellular, $490\mu\textrm{g}/ml$) and caused the mycelia to swell into bulbous forms. Riboflavin accumulation was less in DTl ($108\mu\textrm{g}/ml$ extracellular and $24\mu\textrm{g}/ml$ intracellular) and correspondingly its hyphae were thinner than those of UV-18-57 and swollen bulbous mycelia were not prominent. UV-85 was nonflavinogenic and, accordingly, its mOlphological characteristics included long thin filaments with no intracellular riboflavin accumulation. A large number of greenish fluorescence spores were seen in UV-18-57, whereas DTI had less spores and UV-85 was nonsporulating. Sporulation is correlated with riboflavin production. UV-18-57 had better mycelial integrity and lysis started only by the seventh day, whereas DTI and UV -85 started to lyze earlier by 4 -5 days. By the late stage of fermentation (eighth day), DTl had a few long, thin filaments indicating some secondary growth, whereas UV -85 showed a compact pellet form of mycelia. Most mycelia of UV-18-57 still appeared intact.
The effects of agitaion and aeration on mycelial growth, exo-polysaccharide (EPS) production, and substrate consumption upon the submerged cultivation of G. lucidum were investigated, and the batch kinetics of the EPS fermentation of G. lucidum were interpreted as function of agitation speed and aeration rate. In a 2.6 L jar fermenter system, the optimum agitation speed and aeration rate for EPS production were determined to be 400 rpm and 1.0 vvm, respectively. The maximum production of EPS obtained was 15 g/L. The logistic model for mycelial growth fitted the experimental data better than that determined by the Monod and the two-thirds power models. The Luedeking-Piret equation adequately modelled the kinetic data obtained for product and substrate.
The effects of various carbon sources on mycelial growth and polysaccharide synthesis of the medicinal fungus Inonotus obliquus in liquid fermentation were investigated. After 12-d fermentation, mycelial biomass, polysaccharide yield, and polysaccharide content were significantly higher in Glc+Lac group (glucose and lactose used as combined carbon source) than in other groups. Crude polysaccharides (CIOPs) and the derivative neutral polysaccharides (NIOPs) were obtained from mycelia fermented using Glc, fructose (Fru), Lac, or Glc+Lac as carbon source. Molecular weights of four NIOPs (termed as NIOPG, NIOPF, NIOPL, and NIOPGL) were respectively 780.90, 1105.00, 25.32, and 10.28 kDa. Monosaccharide composition analyses revealed that NIOPs were composed of Glc, Man, and Gal at different molar ratios. The NIOPs were classified as α-type heteropolysaccharides with 1→2, 1→3, 1→4, 1→6 linkages in differing proportions. In in vitro cell proliferation assays, viability of RAW264.7 macrophages was more strongly enhanced by NIOPL or NIOPGL than by NIOPG or NIOPF, and proliferation of HeLa or S180 tumor cells was more strongly inhibited by NIOPG or NIOPGL than by NIOPF or NIOPL, indicating that immune-enhancing and anti-tumor activities of NIOPs were substantially affected by carbon source. qRT-PCR analysis revealed that expression levels of phosphoglucose isomerase (PGI) and UDP-Glc 4-epimerase (UGE), two key genes involved in polysaccharide synthesis, varied depending on carbon source. Our findings, taken together, clearly demonstrate that carbon source plays an essential role in determining structure and activities of I. obliquus polysaccharides by regulating expression of key genes in polysaccharide biosynthetic pathway.
To obtain microorganisms for the microbial conversion of ginsenosides in red ginseng extract (RGE), mushroom mycelia were used for the fermentation of RGE. After fermentation, total sugar contents and polyohenol contents of the RGEs fermented with various mushrooms were not a significant increase between RGE and the ferments. But uronic acid content was relatively higher in the fermented RGEs cultured with Lentus edodes (2155.6 ${\mu}g/mL$), Phelllinus linteus (1690.9 ${\mu}g/mL$) and Inonotus obliquus 26137 and 26147 (1549.5 and 1670.7 ${\mu}g/mL$) compared to the RGE (1307.1 ${\mu}g/mL$). The RGEs fermented by Ph. linteus, Cordyceps militaris, and Grifola frondosa showed particularly high levels of total ginsenosides (20018.1, 17501.6, and 16267.0 ${\mu}g/mL$, respectively). The ferments with C. militaris (6974.2 ${\mu}g/mL$), Ph. linteus (9109.2 ${\mu}g/mL$), and G. frondosa (7023.0 ${\mu}g/mL$) also showed high levels of metabolites (sum of compound K, $Rh_1$, $Rg_5$, $Rk_1$, $Rg_3$, and $Rg_2$) compared to RGE (3615.9 ${\mu}g/mL$). Among four different RGE concentrations examined, a 20 brix concentration of RGE was favorable for the fermentation of Ph. linteus. Maximum biotransformation of ginsneoside metabolites (9395.5 ${\mu}g/mL$) was obtained after 5 days fermentation with Ph. linteus. Maximum mycelial growth of 2.6 mg/mL was achieved at 9 days, in which growth was not significantly different during 5 to 9 days fermentation. During fermentation of RGE by Ph. linteus in a 7 L fermenter, $Rg_3$, $Rg_5$, and $Rk_1$ contents showed maximum concentrations after 5 days similar to flask fermentation. These results confirm that fermentation with Ph. linteus is very useful for preparing minor ginsenoside metabolites while being safe for foods.
The mycelial growth of Pleurotus ostreatus in compost is strongly stimulated by solid-state fermentation with thermophilic fungi which were isolated from oyster mushroom compost. The biochemical characteristics of these thermophilic fungi were investigated. Cellulase and ligninase activities were not detected by clear zone effect on CMC and lignin media. All of thermophilic fungi grew well with high mycelial density on xylan media and the growing rate of Sepedonium sp. S-2 observed very high. In results of MUF-test, extracellular enzyme activity of Sepedonium sp. S-2, and S-5 measured very high. On the compost after high temperature fermentation with Sepedonium sp. S-2 and S-5, the mycelial growing rate of Pleurotus ostreatus was increased about 50% and it also showed the inhibiting effect on mycelial growth of Trichoderma sp. SJG-51. Isolated thermophilic fungi, Sepedonium sp. S-2 and S-5 were expected as very useful organism for making oyster mushroom compost.
Enhanced application of solid-state fermentation (SSF) in industrial production and the influence of SSF of Rhizopus K1 on glucoamylase productivity were analyzed using the flat band method. A growth model was implemented through SSF of Rhizopus K1 in this experiment, and spectrophotometric method was used to determine glucoamylase activity. Results showed that in bran and potato culture medium with 70% moisture in a loose state, ${\mu}$ of mycelium reached to $0.15h^{-1}$ after 45 h of culture in a thermostatic water bath incubator at $30^{\circ}C$. Under a low-magnification microscope, mycelial cells appeared uniform, bulky with numerous branches, and were not easily ruptured. The generated glucoamylase activity reached to 55 U/g (dry basis). This study has good utilization value for glucoamylase production by Rhizopus in SSF.
To investigate nutritive values of a feed fermented with basidiomycetes, among the isolated strains, Lyophyllum decastes (Fr.) Sing. was found with the greatest enzyme productivity and rapid mycelial growth in rice straw medium. Optimum temperature, pH and moisture content for mycelial growth and enzyme production of the strain were $25{\sim}30^{\circ}C,\;pH\;4.0{\sim}7.0\;and\;70{\sim}75\;%$, respectively. Fifteen days of culture were required for the highest enzyme productivity. Among the sub-materials added, $30{\sim}40\;%$ of rice bran and $10{\sim}20\;%$ of defatted perilla seeds were effective for the enzyme production, but caused a reduced mycelial growth. The greatest effect of an addition of inorganic salts was obtained with $0.36{\sim}0.72\;%\;of\;(NH_4)_2HPO_4$. When 40 mesh or smaller rice straw and steam treatment at $0.5\;kg/cm^2$ were used, the mycelial growth decreased, whereas the enzyme production increased. The mycelial growth and enzyme production increased when $Ca(OH)_2$ was used as the alkali treatment, but decreased with increasing concentration of NaOH. As the fermentation proceeded, the amounts of ash, reducing sugar and total nitrogen increased, but cellulose, lignin and pentosan decreased. When the rice straw was treated with alkali, the amounts of ash, total nitrogen and lignin decreased, but reducing sugar and cellulose increased. At higher NaOH concentration, the variation become greater. The in vitro dry matter digestibility of the products increased from 55.03 % at the beginning of the fermentation to 62.72 % at 45 days after fermentation. The most effective alkali treatment on the digestibility of rice straw was KOH followed by NaOH. However, the digestibility increased with increasing concentration of NaOH. The digestibility of pretreated with alkali increased after fermentation as well.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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