• BMB Reports
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• 제40권5호
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• pp.649-655
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• 2007

The nsp14 protein is an exoribonuclease that is encoded by severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV). We have cloned and expressed the nsp14 protein in Escherichia coli, and characterized the nature and the role(s) of the metal ions in the reaction chemistry. The purified recombinant nsp14 protein digested a 5'-labeled RNA molecule, but failed to digest the RNA substrate that is modified with fluorescein group at the 3'-hydroxyl group, suggesting a 3'-to-5' exoribonuclease activity. The exoribonuclease activity requires $Mg^{2+}$ as a cofactor. Isothermal titration calorimetry (ITC) analysis indicated a two-metal binding mode for divalent cations by nsp14. Endogenous tryptophan fluorescence and circular dichroism (CD) spectra measurements showed that there was a structural change of nsp14 when binding with metal ions. We propose that the conformational change induced by metal ions may be a prerequisite for catalytic activity by correctly positioning the side chains of the residues located in the active site of the enzyme.

• 미생물학회지
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• 제43권1호
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• pp.72-75
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• 2007

Escherichia coli에서 RNA 분해와 가공에 있어서 중심적인 역할을 하는 RNase E의 동족체 단백질인 Streptomyces coelicolor RNase ES의 결합 단백질을 항체침전을 이용하여 탐색하였다. 무기인산을 이용하는 polyphosphate kinase와 리보핵산외부분해효소인 polynucleotide phophorylase의 동족체인 GPSI가 RNase ES와 함께 침전되는 것을 확인하였으며, 이는S. coelicolor에도 E. coli RNase E를 매개로 구성되는 다단백질복합체인 degradosome이 RNase ES에 의해 형성될 수 있음을 암시한다. 계통적으로 멀리 떨어진 이 두 세균에서 정제된 polynucleotide phosphorylase 동족체는 시험관에서의 RNA 분해 특성이 서로 유사함을 보였다. 이러한 실험 결과는 RNase ES가 E. coli degradosome과 유사한 기능과 구조를 가진 단백질 복합체를 형성함을 시사한다.