Human neuronal growth inhibitory factor (GIF), a metalloprotein classified as metallothionein-3, is specifically expressed in mammal central nervous system (CNS). In these Studies the specific antibody to human GIF was prepared and used to search the epitope of human GIF by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and sequence comparison. The result of ELISA showed the epitope of human GIF may locate on a octapeptide (EAAEAEAE) in the $\alpha$-domain of human GIF, and the result of nerve cell culture indicated that the biological activity of GIF may be affected by the specific antibody.
The coat protein (CP) of Papaya ringspot virus (PRSV) was analyzed for presentation of the antigenic peptide of animal virus, Canine parvovirus (CPV), in Escherichia coli (E. coli). The 45 nucleotides fragment coding for the 15-aa peptide epitope of the CPV-VP2 protein was either inserted into the PRSV-cp gene at the 5', 3' ends, both 5' and 3' ends or substituted into the 3' end of the PRSV cp gene. Each of the chimeric PRSV cp genes was cloned into the pRSET B vector under the control of the T7 promoter and transformed into E. coli. The recombinant coat proteins expressed from different chimeric PRSV-cp genes were purified and intraperitoneally injected into mice. All of the recombinant coat proteins showed strong immunogenicity and stimulate mice immune response. The recombinant coat proteins containing the CPV epitope insertion at the C terminus and at both N and C termini elicited ten times higher specific antisera in immunized mice compared with the other two recombinant coat proteins which contain the CPV epitope insertion at the N terminus and substitution at the C terminus.
Seo, Seung Hwan;Jo, Si Hyang;Lee, Jihoo;Kim, Hak Yong
Proceedings of the Korea Contents Association Conference
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2015.05a
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pp.223-224
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2015
구제역은 소, 돼지 등 발굽이 두 개로 갈라진 가축들에게 감염을 유발하는 전염성이 매우 높은 바이러스성 질병이다. 구제역 감염 시 입 주변, 구강 내, 코, 발굽사이 등에 수포가 생기며 고열과 식욕이 저하되어 심하게 앓거나 죽게 되는데, 강한 감염 전파력을 가졌음에도 치료제가 없고, 감염확인 즉시 확산 방지를 위한 살 처분만이 이루어지고 있다. 따라서 무엇보다도 빠른 감염여부 진단이 중요하다. 현재까지 구제역을 진단하는 방법으로는 감염 된 가축의 혈액에서 구제역 항원 단백질에 대한 항체형성 여부를 확인하는 항체진단법과 수포액과 같은 체액을 채취하여 세포배양을 통한 구제역 바이러스 분리방법이 있지만 두 가지 모두 짧은 잠복기를 갖는 구제역 바이러스를 빠른 시간 내 진단하기는 어렵다. 따라서 본 연구에서는 보다 빠른 구제역 진단 키트개발을 위해 NCBI Pubmed를 이용하여 구제역바이러스가 가지는 6개의 주요 단백질을 확인하였고, NCBI BLAST를 이용하여 6개의 단백질 중 구제역 바이러스에 특이적인 항원 단백질 peptidase C28을 선정하였다. 선정된 단백질의 아미노산 서열을 이용하여 IEDB analysis resource를 통해 peptidase C28의 epitope 부위를 예측하였다. 예측 된 부위의 아미노산 서열을 NCBI BLAST에서 정상 동물과 비교하여 구제역바이러스 특이 항원 단백질 epitope peptide를 최종 선정하였다. 이를 이용한 구제역 바이러스 진단키트 제작은 보다 빠른 진단을 통해 감염 확산을 조기에 차단하고 경제적 손실과 피해를 최소화 할 수 있다.
Since periodontal infections are suggested as risk factors for the development of cardiovascular diseases, the present study was performed to evaluate the T cell immune responses specific to Pophylomonas gingivalis(P. gingivalis) heat shock protein(hsp) 60 and T-cell and B-cell epitope specificities for P. gingivalis hsp60 in atherosclerosis. Anti-P, gingivalis IgG antibody titers were elevated in all patients. We could establish P. gingivalis hsp-specific T cell lines from the atheroma lesions, a mixture of $CD4^+$ and $CD8^+$ cells producing the cytokines characteristic of both Th1 and Th2 subsets. of 108 overlapping synthetic peptides spanning whole P. gingivalis hsp60 molecule, ten peptides with common epitopes specificities for both T-cell and B-cell were identified. it was concluded that P. gingivalis hsp60 might K involved in the immunoregulatory process of atherosclerotic diseases with epitope specificities.
Proceedings of the Korea Contents Association Conference
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2014.11a
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pp.57-58
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2014
인플루엔자 A 바이러스의 아형인 H5N1은 고병원성으로 조류 독감을 일으킨다. H5N1 바이러스는 원래 조류끼리만 감염되는 독감이고, 사람에게는 전염되지 않는다고 알려져 있었으나, 2003년에 베트남과 중국을 시작으로 현재까지 168명의 사망자가 기록되고 있다. 그러나 현재 시판되고 있는 진단키트(Rapid diagnostic kits)들은 H5N1 에 특이적인 것이 아니라 influenza A virus 모두를 진단한다. 따라서 influenza 감염여부는 확인 할 수 있지만, 이것이 H5N1 인지는 확인 할 수가 없다. H5N1은 전염성이 강하기 때문에 빠르게 진단하여 감염조류를 살 처분 하여야 더 많은 경제적 손실을 줄일 수 있다. 따라서 H5N1 에만 특이적인 epitope를 네트워크 기반으로 예측하여 진단제에 응용할 수 있도록 하고자 한다. 각 서열 정보는 Openflu (http://openflu. vital-it.ch/browse.php)에서 얻었다. H5N1은 H1N1에서 유래되었기 때문에 두 subtype의 차이점을 알아보고자 TCOFFEE에서 multiple sequence alignment를 수행한 결과 N-terminal 부분이 상이하였다. 상이한 H5N1의 N-terminal 부분이 H5N1 virus에 감염된 모든 host에서 존재하는지 알아보기 위해 host가 사람인 경우와 조류인 경우를 TCOFFEE에서 alignment 하였다. 그 결과 H5N1의 N-terminal 부분은 사람과 조류에서 보존적이었다. 따라서 H5N1의 N-terminal이 다른 subtype과 유사하지 않고 H5에만 특이적이기 때문에 진단키트 제작을 위한 epitope로 사용할 수 있을 것으로 기대된다.
The HIV-1 p24(202-221) sequence ETINNEEEWDRVHPV HAGP contains a B-cell epitope with the earliest immune response and the highest antibody titer against anti-mouse sera obtained by immunization with p24 antigens. A novel mouse monoclonal antibody (mAb) was generated against the immunodominant B-cell epitope of the HIV-1 p24 capsid protein, p24(202-221). BALB/c mice were immunized with the four branched multiple antigenic peptide (MAP) containing the HIV-1p24(202-221) sequence, and antibody-secreting hybridoma were produced by fusion of mouse splenocytes with P3X63Ag8.653, mouse myeloma cells. One clone which produced the antigen-specific mAb named KI-24 (Isotype IgG1, light chain: ${\kappa}$) was identified. mAb KI-24 was highly specific for both the p24(202-221) and p24 proteins when analyzed by ELISA and Western blotting. Since p24(202-221) also contains a cytotoxic T-lymphocyte epitope, this specfic peptide epitope and the monoclonal antibody with specific reactivity against the p24 protein and p24(202-221) can be used in peptide vaccine development and p24 antigen detection from HIV patients.
Cockroaches have been recognized as a major cause of asthma. Bla g 4 is one of the most important German cockroach allergens. The aim of this study is to investigate IgE reactivity to the recombinant Bla g 4 (rBla g 4) in the sera of allergic patients and identify linear IgE binding epitope. For protein expression, full-length Bla g 4 (EF202172) was divided into 5 overlapping peptide fragments (E1: aa 1-100, E2: aa 34-77, E3: aa 74-117, E4: aa 114-156, and E5: aa 153-182). The full-length and 5 peptide fragments of Bla g 4 was generated by PCR and over-expressed in E. coli BL21 (DE3). The IgE binding reactivities of the full-length and peptide fragments were measured by ELISA using 32 serum samples of cockroach allergy. The sera of 8 patients (25%) reacted with rBla g 4. Four sera (100%) showed IgE-binding reactivity to full-length and peptide fragment 4, and 2 sera (50%) reacted with peptide fragment 2. One (20%) serum reacted with peptide fragment 3. The results of ELISA using overlapping recombinant fragments indicated that the epitope region was located at amino acid sequences 34-73 and 78-113, and major IgE epitope of Bla g 4 was located at amino acid sequences 118-152 of C-terminal. B-cell epitope analysis of German cockroach allergen Bla g 4 could contribute to the strategic development of more specific and potentially efficacious immunotherapy.
Proceedings of the Korea Contents Association Conference
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2014.11a
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pp.405-406
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2014
말라리아에 의한 감염 중 95% 이상을 차지하는 것은 열대열 원충과 삼일열 원충에 의한 감염이다. 각 원충들에 의한 감염은 초기증상이 유사하지만 각각의 치료방법이 다르게 적용되기 때문에 어떤 원충에 의한 발병인지 정확하고 빠른 진단이 필요하다. 본 연구에서는 생명정보학을 기반으로 각 원충에 특이적으로 발현되는 단백질 정보를 중심으로 epitope를 예측하고자 하였다. 먼저 NCBI에서 문헌조사 및 서열정보를 얻었으며, 두 원충에 대한 서열을 multiple alignment를 통해서 비교한 결과 90.2%의 유사성을 보였다. 확보된 특이 부위를 ProtScale Tool 프로그램을 이용하여 hydrophilicity를 분석하고 진단키트 제작에 사용할 수 있는 epitope를 예측하였다.
Proceedings of the Korea Contents Association Conference
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2014.11a
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pp.55-56
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2014
치쿤구니아열은 치쿤구니아 바이러스(chikungu- nya virus)에 감염된 매개 모기(열대숲모기 및 흰줄숲모기)에 물려 감염되는 급성 열성 질환으로 잠복기가 짧고 치료제가 없기 때문에 조기 진단이 매우 중요한 급성전염병이다. 아열대기후로 진입하는 우리나라에서도 흰줄숲모기가 자주 발견되기 때문에 이 질병으로부터 결코 자유롭지가 않다. 치쿤구니아 바이러스 감염을 진단하기 위한 진단키트를 개발하기 위해 먼저 타깃 유전자 부위 선정이 매우 중요하다. 본 연구에서는 생명정보학을 기반으로 이 바이러스 만을 검출할 수 있는 epitope를 예측하고자 한다. 이 바이러스의 capsid 유전자를 찾고 유사한 바이러스의 유전자들과 multiple alignment를 수행하여 이 바이러스만이 가지고 있는 독특한 부위를 추출하였다. 이후 ProtScale Tool 프로그램으로 선택한 단백질의 친수성(hydrophilicity), 접근성(accessi- bility), 유연성(flexibility), 회전(${\beta}$-turns) 등의 특성을 모두 만족하는 부위를 선별하여 진단키트 제작을 위한 epitope를 제시하고자 한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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