• 대한의생명과학회지
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• 제4권1호
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• pp.43-56
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• 1998

최근 전세계적으로 문제가 되고 있는 장출형성 대장균 O157:H7을 분리배양 및 동정 없이 바로 시료를 분석하여 신속하게 검출하기 위한 다중 중합효소 연쇄반응 (multiplex PCR) 기법을 확립하고, 이 기법을 이용하여 국내 분리 균주 중에서 SLT-I.II, eaeA, 60-MDa plasmid gene을 가지고 있는 대장균을 유전자 수준에서 검출하고자 하였다. 장출혈성 대장균 O157:H7이 가진 SLT-I.II, 60-MDa plasmid 유전자들에 대한 특이 oligonucleotide primers (MK1'-MK2', NAE19-NAE20, MFSIF-MFSIR)를 함께 동시에 반응 완충액에 넣어 다중 중합효소 연쇄반응을 시행한 결과 317bp (eaeA), 228bp (SLT-I.II), 167bp (60-MDa plasmid)의 PCR 증폭 DNA생성물을 표준균주 (E. coli ATCC 35150)에서는 확인할 수 있었지만, 기타 다른 병원성 장내세균 13세균 13균주에서는 band를 확인할 수 없었다. 한편 다중 중합효소 연쇄반응의 template DNA 추출 방법에 따른 PCR 결과를 비교하였다. 각각의 DNA 추출 방법 중 boiling lysis 방법이 신속하고 간편하여 장출혈성 대장균 O157:H7에 의한 식중독의 임상진단에 다중 중합효소 연쇄반응 (multiplex PCR) 적용하는 데에는 boiling lysis법을 이용하는 것이 가장 적합한 방법으로 확인되었다.

• 대한의생명과학회지
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• 제8권3호
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• pp.107-113
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• 2002

Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) strains of serotype O157:H7 have been shown to colonize the intestinal epithelial cell by the attaching and effacing (AE) mechanism. The AE lesion is mediated by an intimin, of which production and expression are controlled by a 3-Kb eaeA gene located EHEC chromosomal DNA. If the eaeA gene is mutated, EHEC O157:H7 strains lose capacity of adhesion to intestinal epithelial cells. In this study, a 891 bp of the 3'-end region of a gamma intimin was amplified by polymerase chain reaction (PCR). The PCR product was inserted into pSTBlue-1 cloning vector and transformed into DE3 (BL21) competent cell. After plasmid mini-preparation and restriction enzyme digestion of eaeA/891-pSTBlue-1 vector, target eaeA gene was re-inserted into pET-28a expression vector and was transformed. Then the expression of recombinant eaeA/891 (891 bp) gene was induced by isopropyl-$\beta$-D-thiogalactopyranoside (IPTG). The expression of the 40-KDa recombinant protein was identified in SDS-PAGE and confirmed by immunoblotting using the His.Tag$^{\circledR}$ and T$_{7}$.Tag$^{\circledR}$ monoclonal antibody. This recombinant protein expressed by eaeA gene could be applied in further studies on the mechanisms of E. coli O157:H7 infection and the development of recombinant vaccine.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제24권3호
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• pp.401-407
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• 2014

Quorum sensing and the stringent response are well-known regulation systems for the expression of virulence genes in enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC). However, how these two systems interact is not well known. E. coli strains with mutations in two regulation systems, ${\Delta}luxS$ (ECM101) and ${\Delta}luxS{\Delta}relA{\Delta}spoT$ (ECM201), and the ${\Delta}luxS$ complement strain to ECM201 (ECM202) were created from EHEC O157:H7 EDL933 to investigate how the regulatory systems interact. The phenotypic changes of the mutant strains were characterized and compared with the wild type. The mutant strains exhibited no obvious growth defects, although acid resistance and cellular cytotoxicity were decreased significantly in all the mutant strains. Phenotypic characterization revealed that mutations in the stringent response system (ECM201 and ECM202) influenced the metabolic (defective utilization of arabinose and L-sorbose) and enzymatic activities (decreased trypsin activity, and increased ${\alpha}$-glucosidase activity). In contrast, the quorum sensing system mutant (ECM101) did not display these phenotypes. The motility of the quorum sensing system mutant (ECM101) was unchanged, but mutation in the stringent response system influenced the motility. Our results suggest that quorum sensing interacts with the stringent response regulation system.

• 한국축산식품학회지
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• 제24권1호
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• pp.86-91
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• 2004

최근 들어 건강에 대한 관심이 증대되면서 건강증진과 관련된 많은 probiotics 균주들의 선별에 대한 연구가 계속해서 진행되고 있다. L. acidophilus를 포함하는 probiotics 중 장 상피세포에 부착력이 우수한 균종들이 보고되고 있으며 이들은 병원성 미생물을 예방하는데 중요한 역할을 할 수 있을 것으로 생각된다. 본 실험에서는 HT-29 cell을 대상으로 다양한 근원으로부터 분리된 L. acidophilus의 부착능력을 측정하였다. 부착능이 우수하다고 보고된 LGG를 대조구로 부착능력을 평가하였을 때 5종의 L. acidophilus 모두 LGG와 유사한 부착능력을 나타내었으며 L. acidophilus A4의 경우 가장 높은 1.2${\times}$$10^{7}$ cfu/ml의 부착능력을 보였다. 따라서 장 상피세포에 대한 부착능력이 host에 대한 특이성과는 높은 상관관계가 없는 것으로 생각된다. 또한 부착된 유산균을 3분씩 3회 연속 wash-out을 실시하였을 때 모두 $10^{5}$ cfu/mL 이상의 부착능력을 유지하였다. 그러나 이러한 probiotics의 부착능력과 세포표면 소수성의 상관관계를 관찰하였을 때 어떠한 유의성도 나타나지 않았다. 따라서 본 실험에서 사용된 5종의 L. acidophilus의 경우 세포표면 소수성에 의해 부착능력이 나타나는 것이 아니라 다른 기작에 의해 부착능력이 나타나는 것으로 생각된다. 그리고 5종의 L. acidophilus를 대상으로 EHEC ATCC 43889의 장 상피세포 부착억제능력을 측정하였을 때 5종 모두 대조구와 비교했을 때 EHEC의 부착을 2 log 수준으로 억제하는 것으로 나타났다. 명확하지는 않지만 이는 일부 유산균주의 부착능력과 관계가 있는 것으로 생각되며 또한 유산균이 생성하는 발효산물이나 세포표면 단백질에 의해 영향을 받는 것으로 생각된다.다.

• Clinical and Experimental Pediatrics
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• 제57권2호
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• pp.96-99
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• 2014

Hemolytic uremic syndrome (HUS) is one of the most common causes of acute renal failure in childhood and is primarily diagnosed in up to 4.5% of children who undergo chronic renal replacement therapy. Escherichia coli serotype O157:H7 is the predominant bacterial strain identified in patients with HUS; more than 100 types of Shiga toxin-producing enterohemorrhagic E. coli (EHEC) subtypes have also been isolated. The typical HUS manifestations are microangiopathic hemolytic anemia, thrombocytopenia, and renal insufficiency. In typical HUS cases, more serious EHEC manifestations include severe hemorrhagic colitis, bowel necrosis and perforation, rectal prolapse, peritonitis, and intussusceptions. Colonic perforation, which has an incidence of 1%-2%, can be a fatal complication. In this study, we report a typical Shiga toxin-associated HUS case complicated by small intestinal perforation with refractory peritonitis that was possibly because of ischemic enteritis. Although the degree of renal damage is the main concern in HUS, extrarenal complications should also be considered in severe cases, as presented in our case.