The objective of this study was to produce calves derived from in vitro fertilization of in vitro matured follicular oocytes. Oocytes aspirated from small antral folicles of ovaries obtained at a local slaughter house were matured and fertilized in vitro. At l8hrs after insemination with Korean native cattle semen, oocytes were co-cultured for 6~7 days by utilizing co-culture system with bovine oviduct epithelial cell. After co-culture, good or excellent quality late morulae or early blastocysts were selected by morphological criteria under stereo microscope. Selected embryos were transferred to recipients on day 6 or 7 (estrus = day 0). Recipients were monitored by observation for estrus and rectal palpation after 60 days from embryo transfer. One of them went to term with the birth of a calf. This case is the first production of calf derived from in vitro fertilization in Korea.
Six adult female Murrah buffaloes of about 12 years were exposed to solar radiation during summer when minimum and maximum ambient temperatures were 27.1 and $44.1^{\circ}C$, respectively. The skin surface temperature at forehead, middle pinna, neck, rump, foreleg, hind legs were recorded using non-contact temperature measuring instrument and respiration rate and rectal temperature were measured throughout the 24 hours starting from 6:30 AM. The diurnal fluctuations and temperature gradients have been reported for buffaloes. During summer when ambient temperature and solar radiation was maximum, adult buffaloes were not able to maintain their thermal balance even after increasing the pulmonary frequency 5 - 6 times. The changes in skin temperature at various sites indicate that the temperature of skin surface not only varies in relation to exposure but also due to water diffusion and evaporation.
Transgenic rats and mice are useful experimental animal models for medical research including human disease model studies. Somatic cell nuclear transfer (SCNT) technology is successfully applied in most mammalian species including cattle, sheep, pig and mouse. SCNT is also considered to increase the efficacy of transgenic/knockout mouse and rat production. However, in the area of reproductive biotechnology, the rodent model is inadequate because of technical obstacles in manipulating the oocytes including intracytoplasmic sperm injection and SCNT. In particular, success of rat SCNT is very limited so far. In this review, the history of rodent cloning is described.
The aim of the present study was to determine the effect of paternal sex chromosome on early development of buffalo embryos fertilized and cultured in vitro. Embryos were produced in vitro from abattoir derived buffalo oocytes. The cleaved embryos were cocultured with buffalo oviductal epithelial cells and evaluated on day 7 under the phase contrast microscope to classify development. The embryos which reached the morula/blastocyst stage were fast developing, the embryos which were at 16-32 cell stage were medium developing and the embryos below 16 cell stage were slow developing. The embryos which showed some fragmentation in the blastomeres or degenerated blastomeres, were degenerating. Sex of emberyos (n=159) was determined using PCR for amplification of a male specific BRY. 1 (301 bp) and a buffalo specific satellite DNA (216 bp) fragments. The results thus obtained show that 1) X and Y chromosome bearing sperms fertilize oocytes to give almost equal numbers of cleaved XX and XY embryos, 2) male embryos develop faster than female embryos to reach advanced stage and 3) degeneration of buffalo embryos is not linked with the paternal sex chromosome. We suggest that faster development of males is due to differential processing of X and Y chromosome within the zygote for its activation and / or differential expression of genes on paternal sex chromosome sex chromosome during development of buffalo embryos fertilized and cultured in vitro which may be attributed to a combination of genetic and environmental factors.
Animal in dustry in Korea urgently needs the domestic introduction and the industrial a, pp.ication of embryo transfer technique. Namely, this technique can be utilized effectively, as means of the improvement of livestocks, as means of the increase of meat production, as means of substitute for the livestock import, and dissemination of new breed. However, as this technique avaliable in our country is remaining initial stage, we can not make use of the technique industrially unless we make much improvement as follows; induction of superovulation, non-surgical recovery of embryos, synchronization between the estrus such cycles of donor and recipient, non-surgical transfer of embryos, etc. Simultaneously, the basic studies such as harvesting oocytes from ovary, in vitro culture of oocytes, in vitro capacitation of spermatozoa, cloning by culture of blastomeres and transfer of nuclei, sexing embryo, etc. should not be neglected in order to make the technique of embryo transfer more simple and convenient. For the success of these studies, universities, national and public institutes, large scale cattle farms, and small scale cattle farms should cooperate each other. For instance, universities undertake basic researches, and the national and public institutes a, pp.y the results of the researches to animal industry along with cooperation by large scale cattle farms. By the help of the cooperative organizations, the technique relevant to our environment and farm condition may be able to be finalized, and to be a, pp.ied to samll scale cattle farm. Consequently, being served to stimulate animal productivity, this technique can be contributed to the development of livestock industry in Korea.
The early embryos are obtained in different time after the former egg had been laid, and the aim of the present study was to observe the development law of chicken early embryo.The embryo development has been divided into the two periods according to morphology of blastodisc. Cleavage period, from 5.5 h (0 h uterine age) to 15.5 h (10-10.5 h uterine age) after the former egg had laid, formation blastodisc of 6-7 layers cell. Later blastocyst period, from 17.5 h (12-12.5 h uterine age) to area pellucida formation after the former egg had been laid. The first division took place at 5 h (0 h uterine age), morular at 11.5 h (6-6.5 h uterine age), and blastocyst at 15.5 h (10-10.5 h uterine age) after the former egg had been laid.
Observations were recorded regarding various fertility parameters on 26 Jersey donor cows following superovulation under tropical conditions. These cows, in their mid-luteal phase were treated with 2,500-3,000 i.u. PMSG or 28-40 mg FSH followed by $500{\mu}g$$PGF_{2{\alpha}}$ injection 48-60 hours later, to induce oestrus. The cows were bred artificially twelve hours following standing oestrus. Embryo collection was carried out 7 days after oestrus. $PGF_{2{\alpha}}$ was injected to each donor cow after embryo recovery to regress the corpora lutea. Fertility data($PGF_{2{\alpha}}$-Oestrus interval, services per conception, days between embryo collection and successful service and any pathololgical condition) were recorded. $PGF_{2{\alpha}}$-Oestrus interval and correlation (r) between number of corpora lutea and $PGF_{2{\alpha}}$-Oestrus interval were $30.9{\pm}6.3$ and 0.17, respectively. Of 26 treated donors, 19 conceived within a period of $91.7{\pm}18.8$ days after embryo recovery. Average services per conception were $2.3{\pm}0.3$. Only two cows developed metritis which conceived after treatment with antibiotics. These observations indicated no profound adverse effect of superovulation on subsequent reproduction of donor cows, except some effect on services per conception, under tropical conditions.
The possible use of micromanipulative biopsy and PCR of the biopsied embryonic cells was tested to produce sexed bovine embryos in practical terms. By micromanipulation and PCR techniques, higher survival rate and accurate sexing of demi-embryos were btained. Bovine oocytes matured and fertilized in vitro were co-cultured with bovine oviductal epithelial cell (BOEC) monolayer in USU-6 medium supplemented with 15% FBS, and the embryos of 37% (327/885) were developed to blastocysts. Among 111 blastocysts produced by invitro, only 7 (6.3%) embryos were found unable to determine their sex, probably due to the loss of cells, since no PCR product was found from those cells. All the remaining 104 (93.7%) demi-embryos survived micromanipulation and demonstrated male-specific product or bovine-specific product alone suggesting that correct sexing of the sample. Forty-three point one percent(25/58) of manipulated and cryopreserved demi-embryos after thawing were survived. Final verification of the sexed embryos is necessary to make sure the same sex in fetus and newborn calf upon embryo transfer. The established sexing method on a large number of bovine embryos from previous and this study suggests that this a could be used practically in the field.
These studies were conducted to investigate the effect of repreated superovulation on embryo production, the effect of the frozen-thawed embryos transferred on the developmental stage and grade, and donor-recipient synchrony on pregnancy rate in Korean native cattle. The results obtained in these studies were as follows: 1. Repeated superovulations in Korean Native Catile were not affected on the number of corpus luteum (CL), embryos recovered and embryos cleaved (range: 4.8 $\pm$ 4.21 to 9.5 $\pm$ 6.50, 1.8 $\pm$ 2.53 to 8.2 $\pm$ 8.04 and 1.6 $\pm$ 2.32 to 4.0 $\pm$ 4.59, respectively). 2. Blastocyst embryos (38.5%) showed higher pregnancy rate than morula (31.6%). 3. The pregnancyrates of cattle transferred with good and fair embryos were 33.3% and 40.4%, respectively. 4. The pregnancy rate when the donors exhibited estrus 12 hours earlier than the recipients (62.5%) was higher than when the donors and recipients exhibited estrus at the same time (33.3%) or when the donors exhibited estrus 12 hours later than the recipients (20.0%).
Chick embryos from stage 14 to stage 31 were studied by means of serial section and light microscopy in order to learn the relationship between the settlement sites of the primordial germ cells (PGCs) and the forming genital ridge. The results showed that: when embryo hatched for 53-56 h, the PGCs reached the coelomic epithelial tissue where gonad would be formed, meanwhile the epithelial tissue began thicker before the PGCs reached. Before stage 19, the final region the PGCs arrived was the thickened portion of the coelomic epithelium, the glycogen in the PGCs cytoplasm maintenance remained unchanged. However at the 3.5-5th hatching day, the glycogen in the PGCs cytoplasm reduced gradually. On the 6th hatching day, the gonad of the embryo appeared the feature of ovary, and the glycogen in the PGCs cytoplasm reduced further. On the 7th hatching day, the differentiation of ovary or testis was obvious and the glycogen in the PGCs cytoplasm later disappeared.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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