Lee, Sung-Ho;Kim, Cha Young;Lim, Chae Oh;Lee, Soo In;Gal, Sang Wan;Choi, Young Ju
Journal of Applied Biological Chemistry
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제43권1호
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pp.5-11
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2000
Three cDNA clones encoding rice calmodulin (CaM) isoforms (OsCaM-1, OsCaM-2, and OsCaM-3) were isolated from a rice cDNA library constructed from suspension-cultured rice cells treated with fungal elicitor. The coding regions of OsCaM-1 and O.sCaM-2 were 89% homologous at DNA Ievel, whereas the 5' and 3' untranslated regions were highly divergent. The polypeptides encoded by OsCaM-1 and OsCaM-2 was identical except two conservative substitution at position 8 and 75. The coding region of OsCaM-3 was consist of a typical conserved CaM domain and an additional C-terminal extension. The amino acid sequence of conserved CaM domain of OsCaM-3 shared only 86% identity with that OsCaM-1. The OsCaM-3 cDNA is belongs to a novel group of calmodulin gene due to its C-terminal extension of 38 amino acids, a large number of which are positively charged. The extension also contains a C-terminal CaaX-box prenylation site (CVlL). Genomic Southern analysis revealed at least six copies of CaM or CaM-related genes, suggesting that calmodulin may be represented by a small multigene family in the rice geneme. Expression of OsCaM gene was examined through Northern blot analysis. Transcript level of OsCaM-3 was increased by treatment with a fungal elicitor, whereas the OsCaM-1 and OsCaM-2 genes did not respond to the fungal elicitor. The expression of OsCaM-3 gene was remarkable inhibited in the rice cells treated with cyclosporine A, calcinurin inhibitor.
Here, we reported a novel secreted protein elicitor PeBL2 from Brevibacillus laterosporus A60, which can induce hypersensitive response in tobacco (Nicotiana benthamiana). The ion-exchange chromatography, high-performance liquid chromatography (HPLC) and mass spectrometry were performed for identification of protein elicitor. The 471 bp PeBL2 gene produces a 17.22 kDa protein with 156 amino acids containing an 84-residue signal peptide. Consistent with endogenous protein, the recombinant protein expressed in Escherichia coli induced the typical hypersensitive response (HR) and necrosis in tobacco leaves. Additionally, PeBL2 also triggered early defensive response of generation of reactive oxygen species ($H_2O_2$ and $O_2{^-}$) and systemic resistance against of B. cinerea. Our findings shed new light on a novel strategy for biocontrol using B. laterosporus A60.
Taxus brevifolia 현탁세포배양에 서 항암제 taxol의 생산을 향상시키기 위해 5종류의 biotic elicitor 와 5종류의 abiotic elicitor, 2종류의 대사억제 및 8종류의 생장조절제를 세포배양 중에 첨가하여 효과 가 았는 물질을 선별하였다. T. brevifo/ia 현탁세포 배양의 대수증식기 말기인 10일째에 각각의 물질을 첨가하여 배양액 내의 taxol의 함량을 측정한 결과 steroid계 억제제 인 chlorocholine chloride를 처리 하였을 때 taxol의 생성이 현저히 증가되었다. Chloro choline chloride의 처리시기 및 처리농도를 다르게 하여 최적조건을 찾은 결과 9일째에 1mM을 첨가했 을 경우 taxol 생성이 가장 좋았다.
장미(Rosa sp. cv Paul's Scarlet) 현탁 배양체의 배지에서는 정상적인 성장 조건하에서 cationic peroxidase (POD)만 관찰되었으나, 효모 세포벽으로부터 추출한 숙주 특이성이 낮은 elicitor를 10 mg glucan/L의 농도로 투여하여 24시간 정도 배양하였을 때 기존의 POD와 뚜렷하게 구분되는 anionic POD가 유도됨을 관찰하였다. Elicitor에 의해 유도되는 prominent한 anionic POD (pI 6.1)와 대조구로서 pI 8.4의 cationic isozyme을 분리한 후 효소학적 성질을 비교하였다. Ammonium sulfate농축, ion exchange chromatography, gel filtration chroma tography를 통하여 약 200배로 농축된 두 효소를 분리하였으며, 이 두 효소의 몇몇 기질에 대한 kinetic parameter들은 매우 의미있는 차이를 보여 주었다. 그 중에서 ferulic acid에 대한 Km은 anionic POD의 경우 4.6 mM, cationic POD는 1.38 mM로 측정되었으며, $\textrm{H}_2\textrm{O}_2$에 대한 Km은 각각 anionic POD가 0.72 mM, cationic isozyme이 0.45 mM로 나타났다. 특히 NADH 산화 반응의 활성은 anionic POD가 cationic POD에 비하여 약 2배 높은 것으로 측정되었다. 0.1 mM coniferyl alcohol의 첨가에 의한 NADH 산화 반응의 억제는 anionic POD fraction에서 약 60% 정도 일어난 반면에 cationic POD fraction에서는 약 15% 정도 일어났다.
The yeast extract, coconut water, safflower seed oil, arachidonic acid, linolenic acid, jasmonic acid and methyl jasmonate were added to Gamborg's B$_{5}$ medium. The changes on productivity of baccatin III were estimated every 30 minutes and the results were compared using the selected high yielding cell culture system of Taxus cuspidata. In most cases, the peaks of baccatin III productivity occured at 90~120 min after addition of elicitors. Among the compound elicitors, safflower seed oil showed the highest productivity of baccatin III. Also arachidonic acid and linolenic acid increased the baccatin III production.
To develop new elicitors inducing the high productivity of taxane derivatives, plant growth inhibitors, namely, maleic acid hydrazide, N-phosphomethyl glycine and succinic acid 2.2-dimethyl hydrazide, coconut milk and yeast extract were administrated in the cell suspension culture system of Taxus cuspidata, and the production of baccatin III were analysed. The effects of amino acid related with the biosynthesis of baccatin III were also examined in these culture system. As the results, a remarkable enhancement of baccatin III production was observed in the cultivation with coconut water and with maleic acid hydrazide.
본 연구에서는, 최근 관심의 대상이 되어 다방면에서 그 사용의 예가 늘고 있는 CD와 alfalfa 식물세포 현탁액으로부터 발현되는 휘발성 향기성분을 비롯한 대사물질의 포접형성에 대해 관찰하고, 식물 세포배양계에서의 CD의 역할에 대해 확인해보고자 하였다. 실험결과 CD는 alfalfa로부터 발현되는 향기성분과 inclusion complex을 이룬다는 것을 확인하였고, 또한 CD가 alfalfa 식물 세포로부터 대사물질을 더 많이 이끌어 내는 elicitor로서 작용할 수도 있음을 알 수 있었다.
3-hydroxy-3-methyglutaryl coenzyme A reductase (HMGR)는 phytoalexin을 포함하는 수 많은 isoprenoid화합물의 생합성을 조절하는 효소이다. 토마토의 경우 sesquiterpenoid phytoalexin류가 식물방어를 위한 반응산물로서 축적되는 것이 알려져 있다. Verticil-lium albo-atrum이나 Fusarium oxysporum으로부터 추출한 elicitor를 토마토의 배양세포에 처리하는 경우 처리량의 증가에 따른 2.7kb 크기의 HMGR mRNA의 상당한 유도증가가 토마토의 HMG2 DNA를 이용한 northern hybridization에 의해 관찰되었다. 토마토의 잎, 뿌리, 줄기 등에 기계적 상해를 가하는 경우에서도 HMGR mRNA는 2단계를 걸쳐 증가함이 관찰되었다. HMGR mRNA는 양 실험의 경우 모두 9시간에서 12시간 사이에서 최대발현됨이 관찰되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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