Yoon Jae-Ho;Song Won-Seob;Lee Mee Sook;Yang Deok Chun
Korean Journal of Plant Resources
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v.18
no.1
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pp.57-63
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2005
In order to develop the mass production method of anticancer compound-polyacetylene from tissue culture of Panax ginseng C.A. Mayor, these studies were carried out for the effects of various chemicals used as precursor and elicitor in viかo. Ginseng callus cultured on the growth medium containing 5mg/l L-phenylalanine was well grown and detected polyacetylene compounds as well as panaxydol and panxynol. But same media containing $\alpha-methyl-D.L.methionine$ and D.L.-norleucine was not detected any polyacetylene. Panaxydol, one of polyacetylene and active anticancer compound, was detected in calli cultured on media with upper 1mg/l chitosan used as elicitor, but panaxynol was not detected. Nigeran used as active elicitor, caused to decrease the growth of ginseng callus, and don't work as elictor on the biosynthesis of polyacetylene from ginseng callus.
Cell cultures of Camptotheca acuminata, which is known to produce the anticancer indole alkaloid camptothecin and its dervatives, were made to enhance the productivity of camptothecin. In suspension cultures, the maximum cell growth rate in exponential growth phase was $0.269day^{-1}$ which was correlated to 2.58days of cell doubling time. The production of camptothecin was non-growth associated. The camptothecin production was the highest at 11th day form inoculation and then it decreased. Various elicitors were applied to enhance the production of camptothecin. Both of jasmonic acid and cellulase increased the production of camptothecin. The optimal dosing time of elicitor was the beginning of the cultures. The combination of two elicitors was more effective to produce camptothecin than single applications. $20.42{\times}10^{-3}mg/\ell$ of camptothecin was obtained with combined application of two elicitors in two days.
Hairy root culture of Daucus carota was investigated for anthocyanin production in a fluidized-bed bioreactor. The growth of hairy roots in this bioreactor increased 2.5 fold while anthocyanin production was lower. However, the anthocyanin production of hairy roots in a fluidized-bed bioreactor was enhanced 2.3 fold in response to the treatment of the fungal elicitor.
Large and rapid increases in benzophenanthridine alkaloid production occured in suspension cultures of Eschscholtzia californica cells treated with elicitors. Response to different biotic elicitors showed that elicitors prepared from yeast extract, Collectotrichum lindemuthianum and Verticillium dahliae induced alkaloid formation. Highest alkaloid accumulation was obtained with $60\;\mu\textrm{g}$ of yeast extract elicitor per gram of fresh cell weight. In time course performance after elicitor addition, more than 40 hours were required to obtain saturated alkaloid accumulation. Compounded silicone fluid, an ideal accumulation phase for two-phase culture of E. californica, accumulated a large amount of alkaloids produced in a specific manner. Elicitation in two-phase culture clearly increased net alkaloid production as well as their concentrations in the accumulation phase.
Camptothecin productoin was increased with elicitors, methyl jasmonate, jasmonic acid, yeast extract elicitor, and ferulic acid in suspension cultures of Camptotheca acuminata. Jasmonic acid was found to be the most efficient elicitor. Camptothecin production increased 11 times by using the optimum dosing concentration of jasmonic acid which was 50 ${\mu}$M. The kinetics of camptothecin accumulation in response to the treatment with jasmocin acid showed that the comptothecin accumulation reached the maximum value at 4 days after jasmonic acid dosing and then a rapid decrease in camptothecin accumulation was observed.
To investigate the characteristics of growth and oil production of peppermint cells during a batch culture, cells derived from peppermint callus was cultivated in an air bubble reactor. During the batch culture, effects of inoculum size, abiotic stress, yeast elicitor, and two stage culture on the cell growth, the productivity of oleolesin, and the formation of flavor components were determined and also the sugar concentrations and kinetics of cell growth were analyzed. Among the various sizes of inoculum, the culture with 2.0% packed cell volume inoculum showed the optimum condition for cell growth in the proposed bioreactor, and the cell yield and essential oil production reached to 5.7g/1 and 0.109g/1, respectively. When the abiotic stress of daily 8hr dark and $10^{\circ}C$ cold treatments were given to the culture cell growth decreased but essential oil production increased to 0.546g/l. In a modified Lin-Staba medium in which 100mg/l yeast extract as an elicitor was added to the culture, the cell growth and oil production increased, and menthol content was 22.5% of oil. In the two stage culture, in which the basic culture conditions of 27$^{\circ}C$, light, and without elicitor were employed during the first six days followed by the second stage with daily 8hr treatment of cold and dark condition, and also with yeast extract as an elicitor, cell growth decreased after eight days, essential oil production was not increased, and menthol was not detected. Dry cell yield was 0.38g dry cell/g sugar and specific growth rate was 0.25 day-1. The major terpenoid in the oil was not the menthol but pulegone and piperitone, precursors of menthol were accumulated. However, when yeast elicitor was added, menthol was produced to the level of 22.5% which was the highest value in the peppermint cell culture reported so far.
In order to study disease resistance mechanisms in rice against the rice blast fungus Magnaporthe grisea, we screened fungal elicitor-responsive genes from rice suspension-cultured cells treated with fungal elicitors employing differential hybridization (DH). By DH screening, 31 distinct rice clones were isolated and a majority of them were full-length cDNAs encoding pathogenesisrelated (PR) genes. Sixteen of the 31 genes were upregulated at 4, 8, and 12 h following fungal elicitor treatment. To elucidate the effect of signal molecules and biotic elicitors on the regulation of rice defense genes, we further characterized the transcriptional expression patterns of representative isolated PR genes; OsGlu1, OsGlu2, OsTLP, OsRLK, and OsPR-10, following treatment with fungal elicitor, phytohormones, cycloheximide, and inhibitors of protein phosphorylation. Jasmonic acid (JA) induced transcriptional expression of OsGlu1, OsTLP, and OsRLK, but not of OsGlu2 and OsPR-10 at any of the tested time points. Salicylic acid (SA) and abscisic acid weakly induced the expression of OsTLP and OsRLK. SA showed an antagonistic effect with fungal elicitor and JA. Cycloheximide suppressed all these genes upon elicitor treatment, except for OsGlu2. Staurosporine only induced the expression of OsRLK. Application of calyculin A strongly induced OsRLK expression, but suppressed the expression of OsGlu2. Our study yielded a number of PR genes that play a role in defense mechanisms against the rice blast fungus, as well as contribute towards the elucidation of crosstalk between phytohormones and other modifications during defense signaling.
This study was examined to investigate the time course behaviors of cell growth and sucrose consumption, and effects of various elicitors on ginsenoside production in batch suspension cultures of Panax ginseng Meyer. Suspended cells reached to the stationary phase at 12 days after innoculation. The maximum cell concentration was 14.7 g-DCW/L at 17 days. The highest cell growth rate was 0.59 g-DCW/L d. The sucrose used as a sole carbon source was hydrolysed to glucose and fructose in 4 days, then quickly utilized until the middle-log phase and consumpted completely at 16 days. Various elicitors were app1ied at 8 days from inoculation which is the middle-log phase. Among the elicitors tested, jasmonic acid was the most efficient to increase the ginseneside production, which was 1.5 times higher than control.
The effects of media and elicitors on betalain, phytolaccoside G and D2 production were examined in the hairy roots of Phytolacca esculenta van Houtte induced by Agrobacterium tumefaciens $A_4$T. Phytolaccoside G and D2 from Phytolacca hairy roots PEH2 were identified by TLC, HPLC, IR, Mass, $^1$H-NMR, and ^(13)C-NMR. Among the culture media tested, SH medium was the best for hairy root growth of hairy roots. White medium was the most suitable medium for betalain production, while MS medium was for phytolaccoside G and D2 production. Although the growth of hairy roots was supped by light (1,000 Lux), the production of betalain, phytolaccoside G and D2 was enhanced by the same light treatment. Addition of elicitors such as NaF, chitosan, and yeast extract to the culture medium increased the content of betalain, phytolaccoside G and D2, suggesting the importance of culture condition for the production of those componds.
BACK, Kyoungwhan;SHIN, Dong Hyun;KIM, Kil Ung;De HAAS Cynthia R.;CHAPPELL Joseph;CURTIS Wayne R.
Korean Journal of Plant Tissue Culture
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v.24
no.5
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pp.279-284
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1997
The extracellular sesquiterpenoids were accumulated in cell and hairy root cultures of Hyoscyamus muticus by elicitation using extracts of Rhizoctonia solani. The vetispiradiene synthase (VS) which is the first committed step in biosynthetic pathway leading to formation of solavetivone, lubimin, and rishitin from isoprenoid intermediate farnesyl pyrophosphate was induced upon elicitation, whereas no sesquiterpenoids and VS activity were detected in both control cell and hairy root cultures. VS activity increased rapidly and reached its maximum 12 h in both cell and hairy root cultures upon elicitor treatment. VS activities were paralleled with the absolute levels of VS polypeptide(s). Interestingly, the profiles of sesquiterpenoid accumulation in hairy root cultures were different from those in cell cultures. The hairy root culture seemed to fail to metabolize solavetivone further to lubimin.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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