대구 부화자어 대량방류를 위한 기초 연구로서 대용량 부화기를 이용한 대구 수정란 부화 방법을 검토하였다. 기존의 용량 15L와 시험용 42L인 부화기에 수정란을 수용한 결과 9일째 생존율이 48.3%와 50.4%로 나타나 부화기 용량차이에 따른 생존율은 유의한 차이가 없었다. 제작한 실험 부화기와 기존의 원형수조에서 수정란 생존율을 비교한 결과 40.0~71.2%로 부화기에서 높아 대구 수정란 부화에 실험 부화기가 효율적인 것으로 사료된다. 또한 42 L 부화기에 수정란 5,000 mL (약 825만 개)를 수용하여도 높은 부화율을 유지하였다. 결과적으로 대구 수정란 부화 시 대용량 부화기를 이용할 경우, 고밀도로 수용하여도 높은 수정란 생존율 유지가 가능하고 사육 공간과 인력 및 경비를 절감할 수 있을 것으로 생각된다. 또한 원형수조에 비하여 사육수 절약 (6,700 mL/min)과 수정란 그룹별 수용이 가능하다는 장점이 있다.
This experimental study was performed to investigate the antitumor effect of Egg white combined-Chalcanthite (InSan 4, IS4) in xenografted nude mice with NCI-H460 human lung cancer cell. We cultured NCI-H460 cell lines and xenografted them on nude mice. These mice were divided into 3 groups; group with dose of 45 mg/kg IS4 orally, group with dose of 90 mg/kg IS4 orally, and the control group. They had been raised and treated for 28 days. We checked their body weight, tumor weight and volume twice a week, and their absolute organ weight, microhistological observation and biochemical blood analysis at the final day by sacrificing them. We also calculated their tumor inhibition rate (IR), mean survival time and percent increase in life span (% ILS). In this study, we observed that all of the IS4 treated mice have tumor regression, dosage-dependently, compared to the control group. Tumor weight and volume of high dose treated mice were smallest. IR increased in IS4 in a dose-dependent manner. Mean survival time and percent increase in life span (% ILS) in high-dose IS4 treatment group were the highest of the three groups. There was no significant difference in biochemical blood analysis, alanine phopsphatase (ALP), Calcium, creatinine (CRE), alanine transferase (ALT), and aspartate transaminase (AST) levels. The urea nitrogen (UN) level results significantly decreased by IS4 45 and 90 mg/kg (IS4 45 mg/kg, IS4 90 mg/kg, p<0.01). IS4 may have potential anti-tumor effect in a solid tumor induced by NCI-H460 without remarkable side effects.
본 연구는 세포막의 구성성분으로서 인체의 신진대사에 관여하는 물질인 인지질을 정량하기 위하여 인지질의 주요성분인 포스파티딜콜린에 대해 HPLC/ELSD를 이용한 신속, 정확한 분석법을 확립하였다. HPLC의 조건은 silica column을 사용하고 헥산:이소프로판올:물-30:60:8을 유속 0.5 ml/min으로 포스파티딜콜린을 분리하였고 ELSD 검출기를 사용하여 nebulizer온도는 $60^{\circ}C$. drift tube온도는 $75^{\circ}C$, carrier gas 30 psi로 하여 20 min내에 분리하였으며 검량선은 250 ppm$\∼$1,000 ppm으로 하여 정량하였다. 시료의 회수율은 $80\%$이상으로 높게 나타났으며 정량한계는 0.15 ppm이였다. 또한 이 분석법을 이용하여 실제 유통되고 있는 레시틴제품(난황레시틴 2종, 대두레시틴8종)에 대해 인지질의 함량과 포스파티딜함량을 조사한 결과, 인지질의 함량은 각각 81.5$\∼$83.3$\%$, $66.0\∼88.0\%$로 나타났으며 포스파티딜콜린의 함량은 각각 74.8$\∼$ 8.6$\%$및 $18.7\∼62.3\%$로 난황레시틴의 함량이 높게 나타났다.
한우의 유전자원을 보존하기 위하여 정액동결 시험을 수행하였으며 고급육계통은 육질에 대한 육종가 상위 10% 이내의 자손에서 선발하였고 다 유계통은 어미의 이유시 체중에 대한 육종가 상위 10%이내의 자손에서 선발하였으며 2개 계통에서 종모우 총 13두를 선발하여 공시하였다. 정액채취는 인공질법으로 실시하였고 의빈대에 수소를 계류하고 채정대상우를 승가시켰으며, 3회 가승가후에 채정하였다. 채정후 10분 이내에 실험실로 옮겨와 검사항목을 조사하고 37$^{\circ}C$에서 1차 희석을 하고 5$^{\circ}C$까지 하강한 후 2차 희석을 하였으며, 액체 질소 5cm 위에서 5분간 평형후 침지하여 동결하였다. 이들 종모우 정액의 일반적 성상에 있어서 채정된 정액량은 1차와 2차를 합하였을 때 평균 채정량이 5.7 ml였고 정자농도는 975${\times}$$10^{6}$개였으며 정액의 색상은 유백색이었고 pH는 6.8이었다. 채취시 생존성은 90.2% 그리고 동결 융해후에는 65.7 %가 생존하였으며 총 6,870스트로우의 동결 정액을 생산하여 보존하였다.
난백에 함유된 lysozyme은 용균작용을 하며 ovalbumin은 면역계에서 항원으로써 역할을 한다. 난백분석에는 일반적으로 전기영동, 겔 투과 크로마토그래피, reversed-phase HPLC(RP-HPLC)를 사용하는데 신속한 분석을 위해 RPHPLC가 사용된다. HPLC 컬럼으로 C18 컬럼(Agilent, USA)을 사용하였다. 최적의 분리조건을 찾기 위해 이동상의 조성과 온도를 변화하였고 용량인자, 분리도를 계산하여 그 값을 비교하였다. 등용매 용리에서 acetonitrile(ACN), distilled ater(DW), trifluoroacetic acid(TFA)의 이동상 부피비를 30/70/0.1~60/40/0.1로 ACN 부피비를 10%씩 증가시키며 실험하였고 이 때 온도는 $20^{\circ}C$이었다. 기울기 용리에서는 ACN과 증류수의 비율을 20분 동안 10/90~60/40으로 증가시켰고 20, 30, $40^{\circ}C$의 온도변화를 주었다. 등용매 용리에서 이동상 조성이 50/50/0.1일 때 세 개의 피크로 분리되었고 개의 피크 중 첫 번째 피크가 lysozyme, 세 번째 피크가 ovalbumin임을 확인하였다. 기울기 용리에서는 온도가 $30^{\circ}C$일 때 네 개의 피크가 나왔으며 네 개의 피크 중 첫 번째 피크가 lysozyme, 세 번째 피크가 ovalbumin임을 확인하였다.
The effects of embryo number and incubation volume on the development of mouse embryos were evaluated. The growth rate of two-cell mouse embryos to attached blastocyst stage and the growth rate of blastocysts to early somite stage were assessed after culture in different incubation volumes and embryo densities. Embryos were collected from ICR female mice superovulated with pregnant mare serum gonadotropin and human chorionic gonadotropin and mated by ICR males. In experiment 1, groups of one, five, ten, twenty 2-cell embryos were cultured in 10-, 50-, 500-, 1000-${\mu}l$ drops of BWW media under mineral oil at $37^{\circ}C$ in a humidified atmosphere of 5% $CO_{2}$ and 95% air. As the incubation volume decreased, significantly (p<0.05) higher rates of embryos reached morular and blastocyst stage on day 3 and 4 culture, respectively. In experiment 2, groups of one, five, ten, twenty blastocysts were cultured in 1- and 2-ml volumes of CMRL 1066 media under same condition as in experiment 1. However the reverse was the result. Decreasing the number of embryos incubated per volume from 1 to 20 significantly (p<0.05) increased the number of blastocysts reaching the late egg cylinder (LEC) and early somite (ES) stage on day 6 and 8 culture, respectively, regardless of incubation volume. Blastocysts cultured in 2ml had higher (p<0.05) development rates to LEC and ES stage on day 6 and 8 culture, respectively, than embryos cultured in 1ml. Our results suggest that the effects of embryo number and incubation volume on the development of mouse embryos are stage specific and the shifting point was between hatching and EEC stage.
Hemorrhagic tendency observed in open heart surgery patients has been attributed, among other causes, to increased fibrinolytic activity during extracorporeal circulation. But the exact mechanism of enhanced fibrinolytic activity which occurs during extracorporeal circulation is still unknown. So, we studied and compared the changes of parameters of fibrinolytic and protein C system according to time obtained from the plasma of 31 adult open heart surgery patients[EGG group] and 10 adult general thoracic surgery patients[control group], in order to confirm the hypothesis that the activated protein C system might affect the fibrinolytic system during extracorporeal circulation. In ECC group, the nature of the enhanced fibrinolytic activity that evolved during extracorporeal circulation was characterized by significant increase in fibrin degradation products[P < 0.01] and significant decrease in plasminogen and alpha2-antiplasmin[P < 0.05, P < 0.01] in spite of adequate amount of heparin administration. These changes were most pronounced in the early phase of extracorporeal circulation and normalized after termination of extracorporeal circulation. The results of these observations were the same after volume correction with the value of hematocrit. The change of volume corrected protein C ratio during extracorporeal circulation revealed similar pattern to those of plasminogen and alpha2-antiplasmin [P < 0.01], but volume corrected ratio of free protein S showed significant increase after the commencement of extracorporeal circulation then decreased after extracorporeal circulation. Although the above mentioned changes occur similarly in both bubble type oxygenator-used and membrane oxygenator-used patients groups, but the degree of decrease was more severe in membrane oxygenator-used patients group [P < 0.01] and showed much slower recovery to reach to the preextracorporeal circulation level. These results confirm the hypothesis that the enhanced fibrinolysis during extracorporeal circulation might be caused by the activation of protein C system and the activation is possibly linked to the appearance of thrombin from contact activation of blood after wide exposure to the synthetic surfaces of extracorporeal circuit. Key words: Extracorporeal circulation, Enhanced fibrinolysis, Protein C system.
Objectives : The purpose of this study was to clarify the daily dose and uses of Goju-tang in Treatise on Cold Damage Diseases. Methods : We compared major editions of Treatise on Cold Damage Diseases with the original text of Supplement to the Essential Prescriptions Worth a Thousand Gold and chose the most appropriate text. If none of the existing texts seemed reasonable, We compared texts item by item. When there is nothing adequate even item by item, it was newly modified. These results were compared with currently distributed Pinellia Tuber and standards of eggs. Results : Goju-tang consisted of Goju(vinegar), Pinellia Tuber and an eggshell. Generally, a daily dose was extracted at once and taken 3 times a day, but in Goju-tang, 4 pieces of Pinellia Tuber and one-third Sheong of Goju(solvent) were used, which were one third of average volume. Pinellia Tuber was used cut in small pieces. And it was boiled gradually by low heat. Goju was mainly to reduce the pungency of Pinellia Tuber by cutting raphides of calcium oxalate. The Pot preparing medicines was eggshell which was chosen by its small size, because the volume of Pinellia Tuber and Goju was one-third of average volume. Since an egg shell is consisted of protein, it didn't react with vinegar(Goju). Conclusions : The 4 pieces of Pinellia Tuber and one-third Sheong of Goju(Vinegar) in the Goju-tang were one-third of average dose, and the eggshell was Pot preparing medicines.
Hemoglobin is oxygen carrier protein within erythrocyte in blood. Apoprotein of this, globin, is synthesized in the cytosol but it's cofactor, heme, is synthesized in the mitochondria. It has not been known very well how globin receives the heme from mitochondria and folds to hemoglobin. In this folding process, the initial structure of globin seems to be very important. A small volume of globin at acid pH was added rapidly into the bulk of an egg phosphatidylcholine $60\%$ liposome, containing hemins, at neutral pH according to the Rapid Dilution method. It was observed that an acid-induced unfolding structure of globin is initially needed to receive hemins from the lipid bilayer of liposomes. Also, this conclusion was confirmed with the absorption spectrum of the refolded globin separated by centrifugation.
Liposomes were studied as a drug delivery system. Multilamellar vesicles, small unilamellar vesicles and large unilamellar vesicles containing cytarabine were prepared using egg yolk lecithin and cholesterol. Large unilamellar vesicles showed the highest encapsulation efficiency of all and their encapsulation efficiency increased as the buffer volume decreased. Cholesterol increased the stability of liposomal drug products as drug carriers and reduced the permeability of drug across the liposomal membrane. The release rate of cytarabine increased with incubation temperature and decreased with cholesterol incorporation in liposomal membrane. The release mechanism of cytarabine from large unilamellar vesicles in vitro was chiefly due to simple diffusion across the liposomal membrane rather than liposomal rupture.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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