Having studied the production of monoclonal antibodies for developing a diagnosis medicine which shall be detected by a high-sensitivity test by using Rhodotorula rubra as a fungi-host which had been extracted through biochemical tests and follow-up examinations on Yeast-like fungi obtained from pulmonary tissues of pulmonary tuberculosis patients who had been in Kong ju National Tuberculosis Hospital from Jun. to Dec. in 1987, I. have gained such results as follows: 1. The fusion rate was influenced by feeder cell layers, cell density and time required to the cell fusion with cells in myelona subculture. 2. The fusion rate did not show any significant difference when the cell was applyed with two molecular weights, i.e., 1500 and 4000, of polyethylene glycol. 3. Fused cells after the addition of HAT selection media were bright and round, whereas unfused myelona cells and spleen cells were shrunk and granulated. 4. The cell fusion rate turned out to be about $57.2\%$(150 wells / 264 wells). 5. $10\%$(15 wells / 150 wells) of the positive reaction was detected in monoclonal antibody screening. 6. The titer which had reacted positively to Rhodotorula rubra fungal-host was 800 times in density after the gradual dilution of the produced monoclonal antibodies with Indirect ELISA method. 7. The Strongest specific reaction came out after the peroxidase labelled anti-human Immunogobulin had been applyed to Rhodotorula rubra for activating its nature after making drift with Carbonate-bicarbonate buffer (pH 9.6) and drying completely.
This experiment was focused on the characterization of anti- Toxoplasma monoclonal antibodies (mAbs) and the effect of mAbs on the parasite invasion of mouse peritoneal macrophages. Twenty eight mAbs including M110, M556, R7A6 and M62l were characterized by Ab titer, immunoglobulin isotyping and western blot pattern. Antibody titer (optical density) of 4 mAbs. Ml 10. M556. R7A6 and M62l. were 0.53,0.67, 0.45 and 0.39 (normal mouse serum; 0.19) with the same IgGl isotypes shown by Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Western blot analysis showed that Ml 10. M556. R7A6 and M62l reacted with the 33 kDa (p30),31 kDa (p28),43 kDa and 36 kDa protein. Immuno-gold labelling of mAbs M110, M556, R7A6 and M621 reacted with the surface membrane, dense granules and parasitophorous vacuolar membrane (PVM) , rhoptries and cytoplasm of tachyzoite, respectively. For in vitro assay, preincubation of tachyzoties with four mAbs, Ml 10, M556, R7A6 and M62l resulted in the decrease of the number of infected macrophages (p < 0.05) and the suppression of parasite multiplication at 18 h post-infection. Four monoclonal antibodies including Ml 10 (SAGI) were found to have an important role in the inhibition of macrophage invasion and T. gondii multiplication in vitro, and these mAbs may be suitable for vaccine candidates, diagnostic kit and for chemotherapy.
Nickel is a nutritionally essential trace element that plays an important role in the immune system of several animal species. The aim of this study was to examine the effect of nickel chloride on chemotactic activity of peripheral blood polymorphonuclear cells (PMNs) and whether this effect is associated with interleukin (IL)-8 and a nuclear factor-kappa B (NF-κB)-dependent pathway. Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and PMNs were isolated by Percoll solution (Specific gravity; 1.080) and 1.5% dextran treatment, respectively. A modified Boyden chamber assay was used to measure the chemotactic activity of PMNs. The level of IL-8 in culture supernatant from PBMCs was measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Both of PBMCs and PMNs exhibited a low viability when cultured with concentration of greater than 1,000 μM of nickel chloride for 24 h. Thus, nickel chloride was used at concentration of 500 μM, which preserved cell viability. Treatment with nickel did not directly affect the chemotactic activity of PMNs. However, the chemotactic activity of PMNs was remarkably increased by culture supernatant from PBMCs treated with nickel chloride (500 μM) for 24 h. Recombinant porcine IL-8 polyclonal antibody (pAb) neutralized the enhancing effect on the chemotactic activity of PMNs by culture supernatant from PBMCs treated with nickel and this culture supernatant had higher IL-8 levels than the culture supernatant from untreated PBMCs. In addition, n-tosyll-phenylalanine chloromethyl ketone (TPCK), a NF-κB inhibitor, antagonized the enhancing effect on the chemotactic activity of PMNs by the culture supernatant from PBMCs treated with nickel. These results suggested that nickel stimulates porcine PBMCs to produce IL-8, which increases the chemotaxis of PMNs via NF-κB-dependent pathway.
${\gamma}$-Glutamyltransferase (GGT: E.C. 2.3.2.2.) is a glycoprotein enzyme which is involved in glutathione metabolism and amino acid transport through the plasma membrane. It is distributed widely in several organs including liver and kidney. Several isozymes of GGT have been reported and some of the isozymes may be associated with hepatocarcinogenesis. We have produced six monoclnal antibodies (mAbs) against GGT purified from the liver of 2-acetamidofluorene (AAF) treated rats. All of the six mAbs were obtained by immunizing mice with liver GGT Six hybridomas which produced anti-GGT Abs were extensively subcloned and injected into the peritoneal cavity of BALB/c mice to obtain large quantities of Abs. These mAbs were purified from ascites by ammonium sulfate precipitation and protein A sepharose CL-4B column chromatography. Using these mAbs we preformed enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), radioimmunoassay (RIA), immunohistochemistry (IHC), and autoradiography (ARG) to study the distribution of GGT isozyme in tissue. The results indicate that GGT-mAb 1 is specific for the AAF treated liver GGT, GGT-mAb 5 for the normal liver GGT, and GGT-mAb 6 for the normal kindey GGT. These mAbs may be used to evaluate the distribution of GGT isozymes in different tissues.
Neutrophil extracellular trap (NET) formation is an immune response for the invasion of microbes. The purpose of this study is to examine the effect of zinc on NET formation of porcine peripheral blood polymorphonuclear cells (PMNs). The NET formation of PMNs was measured by fluorescence microplate reader. The production of tumor necrosis factor (TNF)-α in the culture supernatants from zinc-treated peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) was measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Zinc itself did not have no effect on NET formation. However, the NET formation of PMNs was increased by culture supernatants from PBMCs treated with zinc. Also, the NET formation of PMNs was increased by recombinant porcine (rp) TNF-α. The production of TNF-α in PBMCs culture supernatants was shown to increase upon zinc treatments. These NET formations of PMNs increased by either culture supernatant from PBMCs treated with zinc or rpTNF-α were inhibited by treatment of anti-rpTNF-α polyclonal antibody (pAb). These results suggested that zinc has an immunostimulating effect on the NET formation of PMNs, which is mediated by TNF-α released from zinc-treated PBMCs. Therefore, zinc may play an important role for NET formation in the defense of porcine inflammatory diseases.
Toll-like receptors (TLRs) functionally expressed in salivary epithelial cells, but their roles remain elusive. Among TLRs family, TLR3 is activated by dsRNA, a byproduct of viral infection. The aim of this study was to investigate the role of TLR3 in the inflammatory immune responses using HSG cells. Reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR), real-time PCR and ELISA were performed to identify expression of TLRs and TLR3-mediated chemokine inductions. The chemotaxis assay of activated T lymphocytes was also performed. Treatment of HSG cells with polyinosinic: polycytidylic acid (poly(I:C)) significantly increased interferon-$\gamma$-inducible protein 10 (IP-10), interferoninducible T-cell $\alpha$ chemoattractant (I-TAC), and regulated on activation, normal T-cells expressed and secreted (RANTES) gene expressions in a concentration-dependent manner. Anti-TLR3 antibody blocked the increases of IP-10 and I-TAC genes. Poly(I:C)-induced increases of IP-10 and I-TAC were also confirmed at protein levels from cell lysates, but their release into extracellular medium was detected only in IP-10. We found that the culture media from HSG cells stimulated with poly(I:C) significantly increases T lymphocyte migration. Our results suggest that TLR3 plays an important role in chemokine induction, particularly IP-10, in salivary epithelial cells.
PARK, Young Doo;RONIS D.H.;DUYSEN M.E.;CHENG Z.M.;LORENZEN J.H.
Korean Journal of Plant Tissue Culture
/
v.24
no.5
/
pp.313-317
/
1997
Leaf segments of the potato (Solanum tuberosum L.) genotypes, ND860-2, Norchip, Russet Norkotah, Goldrush, and Norqueen Russet were transformed with the coat protein gene of potato virus Y (PVY). The white-skinned genotypes, ND860-2 and Norchip, were easily transformed and regenerated into shoots, whereas the three russet-skinned genotypes had low frequencies of regeneration. Transformed shoots were generally recovered in four to six weeks. Antibody to PVY coat protein detected a single band of 30 kD in western blots of transgenic plants. Transformed plants had a normal phenotype in the greenhouse and many showed a delayed buildup of PVY following inoculation. Several transgenic lines had negative ELISA readings 85 days after inoculation. Transgenic lines which did not show detectable levels of PVY antigen will be further tested for resistance to PVY.
Swine influenza is an acute respiratory disease prevalent in pig-growing areas all around the world and plays the roles of an intermediate host to be transmitted to mammals including human beings through a genetic recombination with the avian influenza virus. Recognizing that people could be contracted with swine influenza, this study set out to investigate the seroprevalence of individual and multiple infections with two subtypes (H1N1 and H3N2) of the swine influenza virus in pig farms in the Gyeongnam region according to age, area, and season, as well as to provide basic data for the prevention and control of swine influenza. Used in the study were total 904 swine sera that were not vaccinated against the influenza gathered from the pig farms in the Gyeongnam region from November, 2009 to October, 2010. HerdChek SIV (H1N1, H3N2) ELISA kit (IDEXX Laboratories, USA) was used for antibody testing against swine influenza. The test results show that 370 sera (40.9%) were infected with either H1N1 or H3N2 with 37.3% (337 sera) being contracted with H1N1, 13.1% (118 sera) with H3N2, and 9.4% (85) with both H1N1 and H3N2.
A one-step simultaneous immunchromatographic (OS-ICG) assay using colloidal gold-monoclonal antibody (gold-MAb) conjugates was developed for the rapid multianalysis of aflatoxin B1 (AFB1) and ochratoxin A (OTA) in feed samples. Visual detection limits for AFB1 and OTA were 0.5 and 2.5 ng/mL, respectively, and the results were obtained within 15 min. Matrix interference from the feed extracts was efficiently reduced by appropriate dilution with buffer. Cut-off values of the OS-ICG assay for the feed spiked with AFB1/OTA mixtures (5/5, 10/10, 25/25, 50/55, 100/100 ${\mu}g/kg$) were 10 and 50 ${\mu}g/kg$ for AFB1 and OTA. The comparative analyses of 65 feed samples by OS-ICG, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and high performance liquid chromatography (HPLC) showed good agreement. In this study, we confirmed that simultaneous analysis based on immunoassay is possible and it can be used as an on-site multianalysis of AFB1 and OTA in feed, food, and agricultural products.
A single chain variable fragment (scFv) specific towards B. pseudomallei exotoxin had previously been generated from an existing hybridoma cell line (6E6AF83B) and cloned into the phage display vector pComb3H. In this study, the scFv was subcloned into the pComb3X vector to facilitate the detection and purification of expressed antibodies. Detection was facilitated by the presence of a hemagglutinin (HA) tag, and purification was facilitated by the presence of a histidine tag. The culture was grown at 30$^{\circ}C$ until log phase was achieved and then induced with 1 mM IPTG in the absence of any additional carbon source. Induction was continued at 30$^{\circ}C$ for five h. The scFv was discerned by dual processes-direct enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA), and Western blotting. When compared to E. coli strains ER2537 and HB2151, scFv expression was observed to be highest in the E. coli strain Topl0F'. The expressed scFv protein was purified via nickel-mediated affinity chromatography and results indicated that two proteins a 52 kDa protein, and a 30 kDa protein were co-purified. These antibodies, when blotted against immobilized exotoxin, exhibited significant specificity towards the exotoxin, com-pared to other B. pseudomallei antigens. Thus, these antibodies should serve as suitable reagents for future affinity purification of the exotoxin.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.