• BMB Reports
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• 제31권5호
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• pp.519-523
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• 1998

We have previously reported that anti-glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) serum raised against native G6PD (nG6PD) enzyme recognized nG6PD antigen poorly in competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) (Kim, 1997). In the present study, we investigated whether anti-G6PD serum raised against nG6PD can react with denatured G6PD effectively in competitive ELISA. We used partially active G6PD (paG6PD) by repeated freeze-thawing or SDS-denatured G6PD (SDS-G6PD) as both immobilized and soluble antigens, and anti-G6PD serum raised against nG6PD for competitive ELISA. The polystyrene cuvettes coated with either paG6PD or SDS-G6PD were challenged with a mixture of a limiting amount of anti-G6PD serum and various doses of paG6PD or SDS-G6PD as competitors, followed by incubation with alkaline phosphatase-anti-IgG conjugate. The competitive ELISA with paG6PD or SDS-G6PD antigen exhibited the sigmoidal dose-response curve characteristic of competition immunoassays. Furthermore, Triton-denatured G6PD (Triton-G6PD) was used in competitive ELISA. The paG6PD, SDS-G6PD, or Triton-G6PD used as competitors increased the inhibition of antibody binding to immobilized either of nG6PD or denatured G6PD compared with nG6PD competitor. The inhibition by denatured G6PD competitors was more pronounced at high competitor concentrations than at low counterparts. We conclude that anti-G6PD serum raised against nG6PD can effectively react with denatured G6PD in competitive ELISA and that our anti-G6PD serum recognizes denatured enzymes better than active enzymes.

• 대한수의학회지
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• 제37권3호
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• pp.613-618
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• 1997

곰팡이에 오염된 저질사료에서 T-2 독소의 존재확인 및 양을 측정하기 위한 Direct Competitive Enzyme Linked Immunosorbent Assay(ELISA)의 Kits를 개발하기 위하여 T-2HS, T-2HS-BSA, T-2HS-HRP 및 T-2 단크론 항체 동을 개발하고저 연구하여 좋은 결과를 얻었다. 분말 옥수수내에 인위적으로 혼합된 T-2 독소의 평균회수율은 83%이었으며, T-2 독소의 추출가능범위는 60ng에서 $6{\mu}g$이었다. 분말옥수수에서 인위적으로 혼합된 T-2 독소의 회수결과에 의하면 이 연구는 T-2 독소의 존재를 확인하기에 적합하고, T-2 독소의 양을 측정하기 위한각종 ELISA Kits 제조의 기틀이 마련되었다.

• 한국식품과학회지
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• 제47권3호
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• pp.401-404
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• 2015

가공식품 중 돈육의 검출을 위한 샌드위치 ELISA (sELISA)의 조건을 확립하기 위해 항돼지IgG 항체(goat anti-pig IgG antibody)를 이용하였다. 이때, 돈육의 검출범위는 $3-1,000ppm({\mu}g/mL)$이며, 검출한계는 2 ppm이었다. 특이항체의 교차반응 결과, 돼지IgG에 대한 반응성을 100%로 하였을 때, 돈육에 대한 반응성은 0.18%로 나타났으나, 여타의 식품원료에 대하여 반응하지 않았다. 열처리한 돈육에 대한 항체의 반응성은 $70^{\circ}C$까지는 32% 이상으로 양호하였으나 $80^{\circ}C$ 이상에서는 0.11% 이하로 반응성 급격히 감소하였다. 크림스프, 이유식, 어묵, 소스에 대한 spike test에서 돈육의 분석회수율은 각각 8.8, 45, 36, 39%로 나타났다. sELISA에 의하여 12점의 시판 가공식품 시료 중 돈육의 함유 유무를 조사한 결과, 정성적으로 원료의 표시사항과 100% 일치하였다.

• 생명과학회지
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• 제30권11호
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• pp.1012-1020
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• 2020

생쥐의 가변부위가 인간의 정상부위에 연결되어 제조된 바이오시밀러 자연항체치료제인 레미케이드는 암괴사인자-알파(TNF-α)에 특이적인 항체로써 카이메릭 단일클론항체이며 류마티스 관절염치료를 위해 개발되었다. 바이오시밀러 레미케이드 항체의 생물학적 기능을 연구하기 위해 우리는 단백질 데이터 은행을 이용한 생물정보학 분석을 수행하여 레미케이드 자연항체와 암괴사인자-알파 항원간의 결합기작특징을 분석하였다. 자연항체를 생산하는 세포의 유전적 불안정성 때문에 레미케이드 항체생산이 제한되므로 우리는 중 사슬 가변부위를 다중펩타이드 링커에 의해 경 사슬 가변부위에 연결된 레미케이드 ScFv항체(Remicade)를 제조하였다. 더욱이 더 높은 생산과 더 높은 항원결합력을 위해 레미케이드 ScFv를 leucine zipper에 융합시켰다. Remicade와 RemicadeScZip ScFv는 대장균에서 발현되었고 Ni⁺-NTA-아가로스 컬럼으로 정제하였다. 정제된 단백질들은 예상한대로 sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide electrophoresis에서 28.80 kDa과 33.96 kDa을 나타내었다. Remicade는 ELISA, western blot에서 TNF-α 항원에 대한 결합력이 관찰되지 않았으나 RemicadeScZip은 항원결합력을 나타내었다. 추가적인 BLI분석으로 RemicadeScZip의 TNF-α 항원에 대한 결합력을 재확인시켜주었으며 이 결과는 Leucine zipper가 레미케이드 ScFv의 접힘을 안정화시키고 TNF-α 항원에 대한 결합력을 개선시켰음을 제시해주고 있다.

• 한국동물위생학회지
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• 제42권4호
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• pp.177-181
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• 2019

Q fever is a zoonosis caused by Coxiella burnetti that is important not only for livestock but also for humans. This research aims to investigate infection rate of Q fever by examining the prevalence of antibody titers in cattle in Sejong City. From March to October 2018, 505 samples of Hanwoo serum and 47 samples of bulk-tank milk were collected and analyzed using ELISA. According to the result, 25 (53.2%) out of 47 bulk-tank milk samples were antibody positive and 28 (5.5%) out of 505 cows were antibody positive. The seroprevalence of C. burnetii increased with age (<1 y=0%, 1~2 y=4.1%, 3~5 y=7.5%, ≥6 y=9.6%) and was higher in females (6.5%) compared to males (0%).

• 한국어업기술학회:학술대회논문집
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• 한국어업기술학회 2003년도 춘계 수산관련학회 공동학술대회발표요지집
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• pp.250-251
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• 2003

Biochemical and biometric features of eggs of the Washington clam, Saxidomus purpuratus, are reported in this study. In addition, a polyclonal antibody against the purified clam egg was employed to quantitative assessment of eggs of the clams collected from Geoje Island, Korea in May 2002. Mean egg diameter was 70.81 $\pm$ 7.52 ${\mu}{\textrm}{m}$(histological preparation) or 88.56 $\pm$ 11.31 ${\mu}{\textrm}{m}$(purified oocytes), and individual egg weighed 95 ng in dry weigt. (omitted)

• 한국작물학회지
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• 제34권s01호
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• pp.48-54
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• 1989

식물 홀몬의 면역적 분석은 무엇보다 분석전 복잡한 정제가 필요치 않고 정밀분석을 신속히 할 수 있다는데 그 장점이 있다. 다만 pAb를 이용하는 경우에 특이성이 다소 문제로 대두되고 있으나 mAb를 생산함으로써 크게 개량할 수 있었다. 물론 GA류에 있어서는 극히 유사한 구조를 가진것 끼리의 면역분석은 잘되지 않는 것처럼 받아들여지고 있으나 이 문제도 epitope를 달리 함으로써 어느 정도 해결 팔 수 있으며, 이경우 HPLC로 정제후 mAb-ELISA를 이용하여 검출하면 훨씬 정확한 분리와 분석이 가능 할 것으로 생각된다. 본 연구자 등은 mAb를 이용한 식물 홀몬 분석에 있어서 시료를 추출, 정제후 실제 ELISA에 의해서 정량분석에 소요되는 시간은 2시간 미만정도밖에 걸리지 않는다. 또한 검출 한계도 pmol～fmol 정도로 정밀분석이 가능하다. 그리고 소요되는 장비는 간단한 spectrophometer만 가지면 된다. 다만 mAb를 생산하는 과정이 복잡하고 시간이 오래 걸린다. 따라서 필요로 하는 항체를 구입해서 (ABA artiserum sigma) 사용하는 것이 오히려 편리 할 것이다. 본 연구자 둥은 mAb를 이용한 식물 홀몬정량분석용 면역킷트를 제조하였다. 상기와 같은 여러가지 결과들은 식물 홀몬의 분석에 면역측정법이 편리하게 이용될 수 있음을 시사하고 생각된다.

• 약학회지
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• 제38권3호
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• pp.351-357
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• 1994

The levels of maternal immunity enhancing factor(MIEF), which is an immunomodulatory protein identified from bovine colostrum, were determined by indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) for the colostrum and normal milk collected during the first two weeks of lactation. The mean concentration of MIEF in the colostrum of the first day of lactation was $109\;{\mu}g/ml$, and fell from the third day of lactation to $3{\sim}4\;{\mu}g/ml$. The molecular weight of the purified MIEF determined by reducing SDS-PAGE and TSK G2000SW column chromatography was 22,000 and 24,000 daltons, respectively, showing that MIEF is a monomeric peptide in its native form. To examine the capacity of MIEF to induce differentiation of B Lymphocytes, human tonsillar Iymphocytes were cultured in the presence of different concentrations of MIEF, and then antibody secreting cells were enumerated by enzyme-linked immunospot(ELISPOT) assay. When added to cultures of human tonsillar Lymphocytes, MIEF induced differentiation of resting B Iymphocyte to antibody secreting plasma cells as efficiently as LPS.

• BMB Reports
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• 제34권5호
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• pp.408-414
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• 2001

Ornithine decarboxylase (EC 4.1.1.17) is an essential enzyme for polyamine synthesis and growth in mammalian cells and plants. We compared the biochemical and immunological properties of rat and Nicotiana glutinosa ODC by cloning and expressing the recombinant proteins. The primary amino acid sequence between rat and N. glutinosa ODC had a 40% homology The molecular weight of the overexpressed rat ODC was 53 kDa, and that of N. glutinosa was 46.5 kDa. Adding 1 mM of putrescine to the enzyme reaction mixture inhibited both rat and N. glutinosa ODC activity to 30%. Agmatine had an inhibitory effect only on N. glutinosa ODC. Cysteine and lysine modifying reagents reduced both ODC activities, verifying the key roles of cysteine and lysine residues in the catalytic mechanism of ODC. ELISA was performed to characterize the immunological difference between the rat and plant ODC. Both the rat and N. glutinosa ODC were recognized by the polyclonal antibody that was raised against purified N. glutinosa ODC, but the rat ODC was 50-fold less sensitive to the antibody binding. These results indicate that even though both ODCs have the same evolutionary origin, there seems to be a structural distinction between the species.

• 한국동물위생학회지
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• 제35권2호
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• pp.91-97
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• 2012

The strategy for infectious bursal disease (IBD) control and its success rate under field conditions depends on hygiene management, IBD field pressure, level, and variation in maternally derived IBD antibodies. This study investigated the level of IBD-specific antibody by ELISA and the prevalence of IBD virus by PCR in broilers, white-semi broilers, and Korean native chickens raised in Jeongeup, Jeonbuk. IBD-specific maternally derived antibodies were measured from 698 chickens and the mean titers of maternal antibodies were $3,572{\pm}1,402$ in broilers, $1,262{\pm}762$ in white-semi broilers, and $1,932{\pm}912$ in Korean native chickens. At 2 weeks after vaccination, the geometric mean antibody titers of broiler, white-semi broiler, and Korean native chicken were $582{\pm}427$, $3255{\pm}1,080$, and $1,023{\pm}499$, respectively. According to sequence analysis of the variable virion protein 2 gene, 4 isolates were found to be very virulent IBDV, 9 isolates classical virulent, and 2 isolates intermediate plus vaccine strain.