• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제11권4호
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• pp.344-350
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• 2006

Thermoplasma acidophilum is a thermoacidophilic archaeon that grows optimally at $59^{\circ}C$ and pH 2. Along with another thermoacidophilic archaeon, Sulfolobus solfataricus, it is known to metabolize glucose by the non-phosphorylated Entner-Doudoroff (nED) pathway. In the course of these studies, the specific activities of glyceraldehyde dehydrogenase and glycerate kinase, two enzymes that are involved in the downstream part of the nED pathway, were found to be much higher in T. acidophilum than in S. solfataricus. To characterize glycerate kinase, the enzyme was purified to homogeneity from T. acidophilum cell extracts. The N-terminal sequence of the purified enzyme was in exact agreement with that of Ta0453m in the genome database, with the removal of the initiator methionine. Furthermore, the enzyme was a monomer with a molecular weight of 49kDa and followed Michaelis-Menten kinetics with $K_m$ values of 0.56 and 0.32mM for DL-glycerate and ATP, respectively. The enzyme also exhibited excellent thermal stability at $70^{\circ}C$. Of the seven sugars and four phosphate donors tested, only DL-glycerate and ATP were utilized by glycerate kinase as substrates. In addition, a coupled enzyme assay indicated that 2-phosphoglycerate was produced as a product. When divalent metal ions, such as $Mn^{2+},\;CO^{2+},\;Ni^{2+},\;Zn^{2+},\;Ca^{2+},\;and\;Sr^{2+}$, were substituted for $Mg^{2+}$ the enzyme activities were less than 10% of that obtained in the presence of $Mg^{2+}$. The amino acid sequence of T. acidophilum glycerate kinase showed no similarity with E. coli glycerate kinases, which belong to the first glycerate kinase family. This is the first report on the biochemical characterization of an enzyme which belongs to a member of the second glycerate kinase family.

• 한국균학회지
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• 제36권2호
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• pp.183-188
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• 2008

3단계를 거처 식용 가능한 다발구멍장이버섯으로부터 분리한 혈전용해효소의 비활성은 30.49 U/mg이었으며, MALDI-TOF/MS로부터 분자량이 30086.41 Da이었다. 일차 아미노산 구조는 Glu-Thr-Val-Thr-Glu-Thr-Thr-Ala-Pro-Trp-Gly-Leu-Ser-Arg-Ile으로 밝혀졌으며, pH 8.0에서 pH 10.0의 넓은 범위에서 큰 활성을 나타내는 alkaline protease로, 최적온도는 $50^{\circ}C$이며, $30^{\circ}C$까지는 대체로 열에 안정한 효소였다. 이 효소는 합성 기질 N-Suc-Ala-Ala-Pro-Phe pNA을 강하게 분해하였으며, $Hg^{2+}$ 금속이온의 첨가로 효소 활성이 완전히 사라졌다. 효소저해제인 PMSF의 첨가로 혈전용해활성이 사라지는 결과로부터 serine 분해효소임을 알 수 있었다.

• 한국균학회지
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• 제32권2호
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• pp.119-124
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• 2004

쓴송이버섯으로부터 분리한 혈전용해효소(TSFE)의 활성은 11.42 U/mg이었으며, N-terminal amino acid 서열은 Ala-Thr-Tyr-Lys-Ile-X-Ser-Ala-Thr-His-Gln-X-X-Leu-Val로 지금까지 발표되지 않은 새로운 효소였다. MALDI-TOF와 ICP/MS로 분자량은 18788.25 Da이며, $Zn^{2+}$을 함유하는 금속효소임을 알게 되었다. 이 효소는 $40^{\circ}C$까지 열에 안정하고, 특히 합성된 기질 Lys pNA를 강하게 분해하였다. $Zn^{2+}$와 $Co^{2+}$에 의해 활성이 증가되고, EDTA, 1,10-phenanthroline, $Hg^{2+}$에 의해서는 활성이 완전히 소멸되었다. 이 효소는 섬유소원의 $A{\alpha}$ chain은 분해하지만, $B{\beta}$ chain과 ${\gamma}$ chain은 분해하지 못했다.

• Journal of Life Science
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• 제11권2호
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• pp.108-110
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• 2001

The E. coli expression system to overproduce a harmful protein, carboxypeptidase Taq was developed. Since expression plasmid pCK305N containing the colicin promoter already has the initiation codon on the restriction site, the initiation codon of the CPase Taq gene was removed. Expression plasmid pCP4-col includes the entire CPase Taq gene, which is directed by the colicin promoter. E. coli cells harboring pCP-col produced a high amount of the enzyme when they were cultured in the present of mitomycin C (0.4 ${\mu}g$/ml). An amount of purified enzyme produced by pCP4-col directed by the colicin promoter was 10.5 mg. This result indicated that the novel E. coli expression system controlled by the colicin promoter could produce almost twice amounts of CPase Taq than the conventional system controlled by the tart promoter.

• BMB Reports
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• 제29권4호
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• pp.335-342
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• 1996

Porcine liver cysteinesulfinic acid decarboxylase was purified approximately 460-fold by means of ammonium sulfate fractionation and sequential column chromatographic separation with Sephadex G-100, DEAE-cellulose and hydroxylapatite. The enzyme has a flat pH profile with maximum activity occurring between pH 6.0 and 7.6. Pyridoxal 5'-phosphate must be present in all buffers used for purification procedures in order to stabilize the enzyme. Addition of sulfhydryl reagents such as 2-mercaptoethanol are also necessary to maintain maximum enzyme activity throughout purification. The absorption spectrum shows that cysteinesulfinic acid decarboxylase is a pyridoxal 5' -phosphate-containing protein. The major absorption is at 280 nm with two smaller absorption regions, one at 425 nm which is ascribed to a Schiffs base between pyridoxal phosphate and protein, and another at 325 nm which is thought to be due to the interaction of 2-mercaptoethanol with the Schiffs base. A number of divalent cations tested did not affect enzyme activity with the exception of mercury, copper, and zinc which are inhibitory. The partially purified enzyme has an apparent $K_m$ of 0.94 mM for cysteinesulfinate. Cysteic acid is a competitive inhibitor of the enzyme with a $K_i$ of 1.32 mM. The molecular weight of the enzyme was estimated to be about 79,600 by using Sephadex G-200 column chromatography.

• 한국자기공명학회논문지
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• 제9권2호
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• pp.110-121
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• 2005

E.coli methionyl tRNA synthetase consist of 676 amino acids and plays a key role in initiation of protein synthesis. The native form of this enzyme is a homodimer, but the monomeric enzyme truncated approximately C-terminal 120 amino acids retains the full enzymatic activities. X-ray crystal structure of the active monomeric enzyme shows that it has two domains. The N-terminal domain is thought to be a binding site for acceptor stem of tRNA, ATP, and methionine. The C-terminal domain is mainly a-helical and makes an interaction with the anticodon of $tRNA^{Met}$. Especially it is suggested that the region of helix-loop-helix including the tryptophan residue at the position 461 may be the essential for the interaction with anticodon of $tRNA^{Met}$. In this work the structure and function of E. coli methionyl-tRNA synthetase was studied by spectroscopic method (NMR, CD, Fluorescence). The importance of tryptophan residue at the position 461 was investigated by fluorescence spectroscopy. Tryptophan 461 is expected to be an essential site for the interaction between E. coli methionyl-tRNA synthetase and E. coli $tRNA^{Met}$. Proton and heteonuclear 2-dimensional NMR spectroscopy were also used to elucidate the protein-tRNA interaction.

• Korean Journal of Acupuncture
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• 제19권2호
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• pp.57-61
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• 2002

천궁약침액을 7일간 중완혈, 간수혈 및 임의혈에 투여한 후 마우스의 간에서 유도되는 phase I enzyme 억제 효과를 살펴본 결과 천궁 약침액은 CYP 1A1를 저해하였고, 생체의 CYP 2E1의 활성도 억제하였으므로 천궁 약침액은 암예방 효과가 있을 것으로 사료된다.

• 한국식품과학회지
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• 제44권2호
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• pp.207-215
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• 2012

본 연구에서는 쌀 막걸리의 발효제 종류 및 배합비율에 따른 담금유형을 설정하고 품질특성을 비교하였다. 알코올 함량은 담금 (C)형이 13.6%로 가장 높았으며, (D)형 13.5%, (A)형 13.1%, (B)형 12.9% 및 (E)형 12.7% 순이며, 담금 (F)형에서 12.1%로 가장 낮게 나타났다. 발효 후 당도는 담금 (A)-(E)형은 약 $8.6^{\circ}Bx$로 비슷하였으나 담금 (F)형에서는 $5.4^{\circ}Bx$로 낮게 나타났다. 적정산도는 발효 중 큰 변화는 없었으며, pH는 담금 (A)-(E)형에서는 pH 3.8-3.9, 담금 (F)형에서 pH 4.16으로 조금 높게 나타났다. 환원당 함량은 담금 (A)형에서 401.6 mg%로 가장 높았으며, 담금 (B)-(E)형에서는 337.3-380.9 mg%, 담금 (F)형에서는 119.2 mg%로 가장 낮게 나타났다. 알코올 성분 중 methanol, 1-propanol, 2-methyl-1-propanol 및 iso-amylalcohol이 검출되었으며, 발효 동안 증가하는 경향을 나타내었다. 올리고당 함량은 담금 (D)형에서 1251.27 mg%로 가장 높았으며, (E)형 1,219.2 mg%, (C)형 1,141.4 mg%, (A)형 1,049.9 mg%, (B)형 973.8 mg% 순이며, (F)형에서는 608.0 mg%로 가장 낮았다. 총 유리아미노산 함량은 담금 (B)형에서 781.4 mg%로 가장 높았으며, (C)형 703.2 mg%, (D)형 702.6 mg%, (E)형 678.7 mg%, (A)형 630.4 mg% 및 (F)형 328.7 mg% 순으로 나타났다. 휘발성 향기성분은 담금 (A)와 (B)형은 16종, (C)형 15종, (D)형과 (E), (F)형은 14종이 검출되었다. 전반적 기호도는 담금 (A)형과 (C)형에서 유의적인 차이를 나타내었으며, 쓴맛이 강한 (D)형과 (E)형, 단맛이 적은 (F)형에서는 전반적인 기호도 수치가 낮게 나타났다.

• 한국균학회지
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• 제27권6호
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• pp.386-393
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• 1999

대체에너지 생산을 위한 우수발효효모를 선별하기 위하여 전국 지역에서 전분, 전분박 및 전분 공장의 주변 토양과 폐수 등 시료를 채취하여 glucoamylase를 분비하는 효모균 64분리주를 얻었으며 이중 비교적 높은 activity를 보여주는 분리주를 선별하였다. 분리주를 동정한 결과 A1-5, D1, E3, G1과 J20은 Saccharomyces diastaticus로 동정되었으며 Saccharomycopsis fibuligera와 Schwanniomyces occidentalis는 각각 두 분리주, Ambrosiozyma monospora와 Lypomyces kononenkoae로 각각 한 분리주색 동정되었다. 그 중 높은 효소활성을 보여주는 S. diastaticus A1-5, J20과 E3을 선택하여 분비되는 glucoamylase의 일반적인 특성을 조사하였다. 배양액내의 효소의 생성을 측정한 결과 glucose나 saccharose, 그리고 4탄당과 3탄당보다 수용성녹말에 의하여 현저하게 증가하였다. Glucoamylase활성의 반응 최적 온도는 $50^{\circ}C{\sim}60^{\circ}C$였고, 최적 pH는 $5{\sim}6$이었으며, 열에 대해서는 $60^{\circ}C$ 이상에서는 불안정한 활성을 보며주었다. 금속이온에 따른 효소의 활성은 $Na^+,\;Mg^{2+}$에 의해 약간 증가하였으나, $H^{2+},\;Ag^{2+}$에 의해 현저하게 감소되는 현상을 보여주었다. 효소의 기질 특이성은 수용성녹말이 쌀 전분, 옥수수전분과 밀 전분에 비하여 현저하게 좋은 기질임을 알 수 있었다.

• 공업화학
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• 제5권4호
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• pp.681-697
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• 1994

어피로부터 추출한 젤라틴을 효소로 가수분해시킨 가수분해물을 분자량 크기에 따라 분획하여 이를 기능성 소재로서 이용할 목적으로 연속식 3단계 막(1st-SMR, MWCO 10,000; 2nd-SMR, MWCO 5,000; 3rd-SMR, MWCO 1,000) 반응기 장치를 이용하여 젤라틴 가수분해 최적조건이 구명되었고, 또한 막반응기 장치를 장시간 작동하였을 때, 기계적인 응력과 막에 의한 효소활성 및 안정성에 미치는 인자, 그리고 분자량이 서로 다른 가수분해물 획분의 생산량을 높이기 위한 최적화 공정에 대하여 검토하였다. 재순환 3단계 막반응기 장치에서 pH-drop법으로 선정하여 사용한 효소는 Alcalase(1단계), pronate E(2단계)였으며, 3단계에서는 collagenase(3단계)를 사용하였다. 최적 가수분해조건은 1단계의 경우, 효소농도 0.2mg/ml, 기질대 효소비 50(w/w), 온도 $50^{\circ}C$, pH 8.0, 반응부피 600ml 및 유출속도 6.14ml/min였으며, 2단계는 효소농도 0.3mg/ml, 기질대 효소비 33(w/w), 그외의 조건은 1단계와 동일하였다. 그리고 3단계의 경우는 효소농도 0.1mg/ml, 기질대 효소비 100(w/w) 및 유출속도는 10ml/min이였다. 1단계 막반응기를 1시간 작동하였을 때의 기계적인 전단응력 및 막에 의한 효소활성 저하는 30% 및 15%였으며, 2단계 및 3단계는 각각 14%, 5% 및 18%, 8%였다. 1단계, 2단계 및 3단계 막반응기의 최적 가수분해조건하에서 가수분해도는 각각 3.5%(Kjeldahl방법, 87%), 3.1%(77%) 및 2.7%(70%)였으며, 연속식 3단계 막반응기에서 가수분해물의 최종생산량은 부피대체율 10배에서 효소 mg당 430mg이었다.