Cytochrome P450 3As such as 3A4 and 3A5 metabolize a wide range of pharmaceutical compounds. The vectors for the expression of fusion protein containing an N-terminal human P450 3A4 or P450 3A5 sequences and a C-terminal rat NADPH-cytochrome P450 reductase moiety were constructed. These plasmids were used to express the fusion protein in Escherichia coli DH5$\alpha$ cells. High levels of expression were achieved (100~200 nmol/liter) and the expressed fusion protein in E. coli membranes were catalytically active for nifedipine oxidation, a typical enzymatic activity of P450 3A4. The NADPH-P450 reductase activities of these fusion protein were also determined by measuring reduction of cytochrome c. To fine a specific Inhibitor of P450 3A4 from naturally occurring chemicals, a series of isothiocyanate compounds were evaluated for the inhibitory activity of P450 using the fusion proteins in E. coli membranes. Of the five isothiocyanates (phenethyl isothiocyanate, phenyl isothiocyanate, benzol isothiocyanate, benzoyl isothiocyanate and cyclohexyl isothiocyanate) tested, benzoyl isothiocyanate showed a strong inhibition of P450 3A4 with an $IC_{50}$value of 2.8 $\mu\textrm{M}$. Our results indicate that the self-sufficient fusion protein will be very useful tool to study the drug metabolism and benzyl isothiocyanate may be valuable for characterizing the enzymatic properties of P450 3A4.
마늘의 항균력에 저항성을 갖는 유산균을 분리하기 위해서 마늘 추출물이 첨가된 배지에서 생육하는 112 균주를 김치, 젓갈, 장아찌류로부터 분리하였다. 이 중에서 14균주에 대해서 내산성 및 내담즙성 그리고, 가축 병원성 세균인 Salmonella choleraesuis, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Shigella flesneri에 대해 항균력을 조사한 결과, 파김치 유래의 P'GW50-2 균주가 가장 우수한 특성을 지니고 있어 생균제로 이용 가능한 균주로 선발하였다. 선발된 균주는 16S rRNA 유전자의 염기서열 분석결과 Lactobacillus plantarum으로 동정되었고 L. plantarum TJ-LP-002으로 명명하였다. L. plantarum TJ-LP-002는 Bacillus cereus, S. aureus, Clostridium perfringens와 같은 Gram 양성균과 Aeromonas hydrophila, E. coli, Pseudomonas, Salmonella, Shigella와 같은 Gram 음성균에 대해서 비교적 넓은 항균활성을 나타내었다.
갓 중의 향균성 물질을 검색할 목적으로 에탄올추출물이 미생물의 증식에 미치는 영향과 전자현미경에 의한 세균의 형태변화를 살펴보았다. 갓 에탄올추출물의 농도별 항균활성은 대부분의 그람 양성균에서는 10mg/ml로 강하게 나타났으며, 그람 음성규느이 경우는 20mg/ml에서 나타났다. 그리고 젖산균 및 효모에서는 40mg/ml로 세균에 비하여 항균력이 약하게 나타났따. 갓 에탄올추출물이 미생물의 대수증식기에 미치는 영향은 E. coli와 S. aureus 두 균주 모두 20mg/ml 이상의 첨가시는 4시간 이후부터 균의 생육이 완전히 억제되었다. 갓 에탄올추출물로 처리한 E. colid와 S. aureus 두 균주를 전자현미경으로 관찰한 결과, 그람 음성균인 E. coli의 경우는 균체표면이 불규칙적으로 수축된 형상을 보였고, 그람 양성균인 S. aureus의 경우는 균체가 팽윤되고 타원형으로 변형되어 두 균주 모두 심한 형태학적인 변화가 있음이 관찰되었다.
한천 가수분해물의 각종 생리활성을 실험한 결과, $100^{\circ}C$ 이상의 조건에서 가수분해된 시료에서 B. cereus와 B. subtilis에 강한 항균활성을 나타내었는데 특히, malate 가수분해물에서 활성이 높은 것으로 나타났으며, 일부 획분에서는 E. coli에 대해서도 확실한 항균 효과를 나타내었고, 약하지 만 S. aureus에 대해서도 항균활성을 나타내었다. Citrate와 malate로 가수분해된 시료에서 $55{\sim}80%$의 tyrosinase 활성을 저해하는 것으로 나타났으나 전체적으로 활성이 낮았다. 한천 가수분해물의 비피더스균 증식 효과는 온도에 관계없 이 lactate, citrate 및 malate로 가수분해된 시료에서 B. infantis 균에 대해 증식효과가 확인되었다. 한천 가수분해물에서는 ACE 저해능이 확인되지 않았으며, 항혈액응고활성도 거의 나타나지 않았다. 한편, 세포증식 억제능은 0.5%의 citrate와 lactate로 $110^{\circ}C$에서 180분간 가수분해되어진 시료에서 강한 활성이 확인되었으며, 이들 시료를 정제하여 얻어진 특정 획분(C3과 L3)에서도 강한 세포 증식 억제능이 확인되었다.
세정수로서의 전해산화수 효능을 증대시키기 위하여 다양한 식품첨가제를 첨가하여 제조한 $0^{\circ}C$ 이하의 세정수에 대한 냉각특성, 살균 및 갈변억제 효과를 조사하였다. 식품첨가제의 첨가비율은 NaCl 0.85%(w/v), ethanol 0.5%(v/v), 레몬과즙 0.5%(v/v), 유자과즙 0.5%(v/v), polysorbate 80은 1 ppm으로 결정하였다. 미생물 사멸효과는 초기 5.63$\times$$10^{ 8}$ CFU/mL인 Escherichia coli KCTC 1039가 모든 첨가구에서15~30초 이내에 전부 사멸하였으며, Bacillus cereu KCTC 1012는 polysorbate 80 및 ethanol 첨가구에서 2분 후, Lactobacillus plantarum KCTC 3108은 polysorbate 80, 유자 및 레몬과즙 첨가구에서 30초만에, 그리고 Erwinia carotovorasubsp. carotovora KCTC 2776은 polysorbate 80 및 레몬과즙 첨가구에서 30초만에 사멸하는 효과를 나타내었다. 갈변억제효과는 polyphenol oxidase의 활성을 측정하여 비교한 결과, asnrbic acid 0.5% 첨가구에 5분간 침지하였을 때 57%의 활성저해를 보인 반면, 25%의 저해능을 보인 polysorbate 80 첨가구를 제외한 모든 처리구에서 62~84%의 높은 활성저해 효과를 보였으며, 그 중에서도 NaCl 및 유자과즙 첨가구에서 30분 침지시에 각각 64, 91 units로 가장 낮은 활성을 보여주었다. 절단 감자를 30분간 침지처리한 후의 색도에서도 대부분의 처리구에서 색차($\Delta$E)가 3 이하를 나타내었다.다.
시판 농약류의 미생물에 대한 독성을 검정한 결과 제초제인 paraquat(1,1'-dimethyl-4,4'-bipyridylium dichloride)가 편성혐기성 세균을 제외한 세균류와 효모 및 곰팡이에 걸치는 광범위한 미생물의 증식을 저해하였다. Paraquat는 $1.0\;{\mu}M$(0.186ppm)의 농도에서도 공시균(Escherichia coli KCTC 1039)의 turbidometric growth를 지연시켰으나, 생균수 변화 및 well test 등의 결과로부터 공시균에 대한 paraquat의 생육저지 최소 농도는 1.0mM(186ppm)로 평가되었다. Paraquat 처리시 공시균의 생균수는 처리직후에 대조구의 약 50%로 급격히 감소되었으나, 이후 4시간 동안 1.0mM의 paraquat 존재하에서도 유의적으로 증가되었다. 그러나 처리 4시간 이후로는 생균수가 서서히 감소되었으며 계속된 배양에도 불구하고 재증식은 관찰되지 아니하였다.
4-nitroquinoline 1-oxide (4-NQO)와 N-methyl-N-nitro-N'-nitrosoguanidinein (MNNG)에 의해 유도된 돌연변이원성에 대한 결명자 물 추출물의 억제효과를 E. coli PQ37 이용한 SOS Chromotest법으로 검색하였다. $100{\mu}g$/assay 농도에서 4-NQO와 MNNG의 변이원성에 대한 결명자 물 추출물의 변이원성 억제 효과는 27.5 및 40%로 나타났다. 결명자 물 추출물을 메탄을 가용성 부분과 메탄을 불용성 부분으로 분리하여 4-NQO와 MNNG의 변이원성에 대한 억제효과를 검색한 결과 메탄을 가용성 부분이 더 강한 효과를 나타내었다. 따라서 결명자 메탄을 가용성 부분을 에틸아세테이트, 부탄을 그리고 물로 각각 분획하여, 4-NQO 및 MNNG에 대한 돌연변이 억제효과를 검색한 결과 물 분획물은 각각 19.0, 및 23.0% 억제효과로 가장 강하게 나타내었으며, MNNG의 변이원성에 대한 억제효과가 4-NQO의 변이원성에 대한 억제효과보다 더 강하게 나타남을 확인하였다. 결명자 열수추출물의 메탄을 가용성부분의 물 분획물의 농도를 assay당 1.0, 10, 100 및 $250{\mu}g$으로 증가시켰을 경우, 항돌연변이 효과는 각각 8.0%, 12.0%, 25.5%및 43.0%로 나타났다. 이러한 결과로부터, 결명자 물 분획물은 MNNG의 변이원성에 대하여 용량 의존적 억제효과를 나타냄을 확인하였다.
Objectives : This study was conducted to compare antibacterial activities and free radical scavenging activity between the Bee Venom and Sweet Bee Venom in which the allergy-causing enzyme is removed. Methods : To evaluate antibacterial activities of the test samples, gram negative E. coli and gram positive St. aureus were compared using the paper disc method. For comparison of the antioxidant effects, DPPH(1,1-diphenyl-2picrylhydrazyl) free radical scavenging assay and Thiobarbituric Acid Reactive Substances(TBARS) assay were conducted. Results : 1. Antibacterial activity against gram negative E. coli was greater in the Sweet Bee Venom group than the Bee Venom group. 2. Antibacterial activity against gram positive St. aureus was similar between the Bee Venom and Sweet Bee Venom groups. 3. DPPH free radical scavenging activity of the Bee Venom group showed 2.8 times stronger than that of the Sweet Bee Venom group. 4. Inhibition of lipid peroxidation of the Bee Venom group showed 782 times greater than that of the Sweet Bee Venom group. Conclusions : The Bee Venom group showed outstanding antibacterial activity against gram positive St. aureus, and allergen-removed Sweet Bee Venom group showed outstanding antibacterial activity against both gram negative E. coli and gram positive St. aureus. For antioxidant effects, the Bee Venom was superior over the Sweet Bee Venom and the superiority was far more apparent for lipid peroxidation.
본 연구에서는 시판되고 있는 식초를 이용하여 6종의 식품 유해세근에 대한 항균력을 비교하였다. 그 결과, 감식초와 현미식초는 합성식초에 비해 S. aureu, M. luteus, S. enteritidius 및 E. coli에서 항균 활성이 높게 나타났으며, 현미식초가 감식초에 비해 식품유해세균에 대한 항균활성이 비교적 더 높게 나타났다. 현미식초의 농도에 따른 항균활성을 조사한 결과 5종의 그람양성 세균 및 음성 세균 모두 10$\mu$L/mL 이상의 농도에서 생육이 거의 억제되었으나, V. purahaermolyticus는 15$\mu$L/mL 농도에서 생육이 거의 정지되어, 현미식초는 식품 부패균과 대장균 생육억제에 우수한 것으로 나타났다. 식초처리에 의한 미생물의 형태 변화를 전자 현미경으로 관찰한 결과 S. aureu, E coli 모두 세포가 팽윤되고 일부 세포벽이 완전히 파괴된 형태를 관찰할 수 있어 식초처리로 인해 세균의 생육이 억제되는 것을 알 수 있었다.
Hegde, Hemant;Ahn, Chuljin;Gaonkar, Santosh L.;Shetty, Nitinkumar S.
대한화학회지
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제63권6호
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pp.435-439
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2019
An efficient one pot multicomponent synthesis of pyrimidinone derivatives of Biginelli type is described. 4-amino-6-aryl-pyrimidine-5-carbonitrile molecules were synthesized efficiently via three-component Biginelli-type condensation of aldehyde, malononitrile, and semicarbazone as urea substituent in the presence of a catalytic amount of PEG-400 as green medium under microwave irradiation. The reactions proceeded efficiently in the presence of microwave radiation to afford the desired products in good to excellent yields. Products have been confirmed by IR, and NMR spectral analysis. All the molecules were tested for their antimicrobial activity against E. coli, S. aureus, P. aeruginosa and C. tropicalis. Some of the compounds have shown moderate to good inhibition efficiency against both gram-positive and gram-negative bacteria. The potent activity was observed against the fungal species with minimum inhibition concentration 12.5 ㎍/mL.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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