Biodegradation of an explosive compound, glyceryl trinitrate (GTN), was studied with a denitrifying microbial culture grown in a sequencing batch reactor and a GTN acclimated denitrifying culture. The GTN acclimated culture, which were fed on GTN for 1 month, degraded GTN regioselectively via denitration on C1 position as compared to C2 position denitration by denitrifying culture that has never been exposed to GTN. Accumulation of two isomeric glyceryl dinitrates (GDNs) in both culture medium suggests that GDN denitration is the rate-limiting step in GTN biodegradation. The first order GTN degradation rate normalized to cell concentration of the acclimated culture was calculated to be 0.045 (${\pm}0.002$) L/g-hr. Increasing concentration of electron acceptor(nitrate) resulted in discouraged GTN degradation. According to microbial community analysis, prolonged GTN exposure resulted in 25% increase in the genus level of the GTN acclimated culture with the disappearance of two dominating denitrifying microbial species of Methyloversatilis universalis and Hyphomicrobium zavarzinii in the denitrifying culture.
Bypassing acrosome reaction and fusion process in intracytoplasmic sperm injection(ICSI), most of injected spermatozoa still contain intact acrosome contents and plasma membrane. It Is not known yet what acrosome contents and plasma membrane of spermatozoa have effect on the development of embryo. For further understanding of fertilization process after ICSI, we studied the time of pronucleus formation, disappearance and first cleavage in human zygote, and pregnancy rate in relation to acrosome reaction rate of spermatozoa after ICSI. Seventy cycles undergoing ICSI program were randomly selected. Sperm suspension from 38 cycles were treated 50% human follicular fluid(hFF) for 3 hours in order to induce acrosome reaction, others were not treated as control. Acrosome reaction in hFF treated and non-treated group was assessed by fluorescein isothiocyanate(FITC)-conjugated Arachis hypogea(PNA) and Pisum sativum agglutinin(PSA). Oocytes were classified into 'good' and 'poor' according to their morphology. After ICSI, fertilization of oocytes were assessed by detection of two pronuclei at 16 hours. The pronuclei disappearance and first cleavage of zygotes were observed at 24 hours, and then embryos were transferred to uterus after culture for 72 hours. The rate of acrosome reaction of spermatozoa in hFF treated group was significantly higher than that in control(p<0.01). Fertilization rates of good oocytes were not different both control and hFF treated group(81.3%(174/206) vs. 72.1%(102/130)). But, in poor oocytes, the fertilization rates in hFF treated group(72.1%(149/183)) were increased compared than those of control group (63.6%(98/140), p<0.01). In either good or poor oocytes, the rates of pronuclei disappearance in hFF treated-spermatozoa injected oocytes were higher than control (59.1%(103/174), 56.4%(84/149) vs. 32.4%(33/102), 37.8%(37/98), p<0.01). Also, the rates of thirst cleavage were increased in hFF treated group (31%(54/174), 24.1%(36/149)) compared than those of control group (10.8%(11/102), 13.2%(13/98), p<0.01). The pregnancy rates of hFF treated group (42.1%(16/38)) were slightly higher than control group (28.1%(9/32), p>0.05). But, the pregnancy rate of group which possessed more than one cleavaged zygote at 24 hours was higher than group which did not (45.2%(19/42) vs. 21.4%(6/28), p<0.05). From these results, the development of zygotes were faster in higher acrosome reacted sperm group than lower acrosome reacted sperm group after ICSI. Our results may be explained that acrosomal membrane and plasma membrane are easily detached from spermatozoa in acrosome reacted spermatozoa compared with acrosome intact sperm in the cytoplasm of oocyte during pronuclear formation. We conclude that the injection of acrosome reacted spermatozoa will increase the pregnancy rate as they can induce fast embryonic development in ICSI.
Twenty Korean native bulls averaging 181 kg body weight were fed a fixed amount (1.5% of live weight) of concentrate and free choice roughage cubes which had four ratios of rice straw and orchard grass hay; 100:0, 85:15, 70:30 and 55:45 on a weight basis. Five bulls were assigned to each treatment and fed for 98 days in a confinement house. Nutrient digestibility and available energy content of mixed rations (40% concentrate and 60% roughage cubes) was determined in a digestion trial with twelve wethers. In vitro dry matter digestibility (IVDMD) and in situ dry matter disappearance of the roughage cubes were also determined. The ratio of grass hay to rice straw did not influence dry matter intake. Significant improvements in body weight gains and feed/gain ratios were obtained as grass hay levels increased. Average daily gain and feed/gain for each treatment was 0.83, 0.88, 0.98 and 0.99 kg; 7.63m 7.59, 6.83 and 6.41, respectively. Digestibility of the nutrients was improved with increasing levels of grass hay in the cubes. The IVDMD of roughage samples having a ritio of 100:0, 85:15, 70:30 and 55:45 between rice straw and orchard grass hay were 31.0, 37.1, 41.8 and 43.4%, respectively. Grass hay improved the IVDMD of rice straw diets in a linear manner up to 30%. In situ dry matter disappearance rate was also increased as the level of orchard grass hay increased.
The effect of ammonia treatment and rice bran supplementation on the in situ rumen degradation of rice straw was determined using three Japanese Corriedale wethers fitted with permanent rumen cannula. About 4 g samples of diets containing 100% untreated rice straw (URS); 100% ammonia treated rice straw (ARS); 65% URS+30% rice bran (RB)+5% soybean meal (SBM) (T1); and 85% ARS+15% RB (T2) were incubated at 0, 4, 8, 16, 24, 48, 72, and 96 hours in the rumen of sheep to measure dry matter (DM), crude protein (CP) and neutral detergent fiber (NDF) degradability. The DM disappearance of ARS based diets were about 20% higher than that of URS based diets. Rice bran supplementation improved DM disappearance of URS but not on ammoniated straw. Degradation parameters showed that ammoniation increased rate (c) of straw degradation resulting to higher DM and fiber degradability but RB supplementation did not. ARS gave similar DM and CP solubility and effective rumen degradability (ED) with that of the supplemented groups indicating that ammoniation alone can give the same effect on rumen degradability of sheep receiving low quality roughage. All degradation parameters for NDF were consistently higher in ARS based-diets indicating improved fiber solubility. Rice bran supplementation did not affect degradation characteristics of the diets except on soluble DM and CP fraction (A) of URS but not on ARS.
Dry matter (DM) degradation of leaves from Quercus cercis, Quercus libari, Quercus branti, and Quercus coccifera was determined using two different techniques: (i) in vitro gas production and (ii) the nylon bag degradability technique. In vitro gas production in the presence or absence of PEG and in situ DM disappearance were measured at 3, 6, 12, 24, 48, 72 and 96 h. In situ and in vitro DM degradation kinetics were described using the equation y = a+b ($1-e^{-ct}$). At all incubation times leaves from Quercus branti incubated with or without PEG gave significantly higher gas production than the other oak leaves except for 3 and 6 h incubation when leaves from Quercus branti without PEG supplementation only gave higher gas production than Quercus cercis and Quercus coccifera. At all incubation times except at 3, 6 and 12 h the DM disappearance from Quercus branti was significantly higher than the other species. Generally, PEG supplementation considerably increased the gas production at all incubation times and estimated parameters such as gas production rate ($c_{gas}$), gas production (ml) from the quickly soluble fraction ($a_{gas}$), gas production (b) from the insoluble fraction, potential gas production (a+b). However, all oak leaves did not give the same response to the PEG supplementation. Although the increase in gas production at 96 h incubation time was 8.9 ml for Quercus libari the increase was 5.5 ml for Quercus coccifera. It was concluded that except at early incubation times the relationships between the two methodologies seem to be sufficiently strong to predict degradability parameters from gas production parameters obtained in the presence or absence of PEG.
The objectives were to compare the ability of various rumen microbial fractions to reduce nitrate and to assess the effect of nitrate on in vitro fermentation characteristics. Physical and chemical methods were used to differentiate the rumen microbial population into the following fractions: whole rumen fluid (WRF), protozoa (Pr), bacteria (Ba), and fungi (Fu). The three nitrogen substrate treatments were as follows: no supplemental nitrogen source, nitrate or urea, with the latter two being isonitrogenous additions. The results showed that during 24 h incubation, WRF, Pr and Ba fractions had an ability to reduce nitrate, and the rate of nitrate disappearance for the Pr fraction was similar to the WRF fraction, while the Ba fraction needed an adaptation period of 12 h before rapid nitrate disappearance. The WRF fraction had the greatest methane ($CH_4$) production and the Pr fraction had the greatest prevailing $H_2$ concentration (p<0.05). Compared to the urea treatment, nitrate diminished net gas and $CH_4$ production during incubation (p<0.05), and ammonia-N ($NH_3$-N) concentration (p<0.01). Nitrate also increased acetate, decreased propionate and decreased butyrate molar proportions (p<0.05). The Pr fraction had the highest acetate to propionate ratio (p<0.05). The Pr fraction as well as the Ba fraction appears to have an important role in nitrate reduction. Nitrate did not consistently alter total VFA concentration, but it did shift the VFA profile to higher acetate, lower propionate and lower butyrate molar proportions, consistent with less $CH_4$ production by all microbial fractions.
The effects of colchicine on the plasma elimination and biliary excretion of various organic anions in rats were examined. Elimination of indocyanine green (ICG) or rose bengal (RB) from plasma was significantly delayed when rats were treated with colchicine (3 mg/kg body weight) 3 hr prior to the administration of the dye. On the other hand, disappearance of sulfobromophthalein (BSP) or bromophenol blue (BPB) from plasma was not influenced by colchicine. The plasma disappearance and biliary excretion of organic anions were kinetically analyzed based on a compartment model, in which the deep compartment and the unknown disposition are incorporated. The transfer rate constants of ICG or RB, $k_{23}$ (from the liver to the deep compartment) and $k_{3B}$ (from the deep compartment to the bile), were decreased by colchicine, but those of BSP or BPB were not changed. A mechanism for the decrease in the $k_{23}$ and $k_{3B}$ values for ICG and RB might be explained by a inhibition of colchicine to the intracellular cytoskeleton. The hepatocellular distribution of RB or BPB was then determined. BPB mainly distributed to the cytosolic fraction, but RB distributed to each hepatocyte organelle. Taken together. it was suggested that ICG or RB is transported through hepatocytes into bile with the aid of the cytoskeleton, whereas BSP or BPB is handled by hepatocytes in a different way.
The quality including in situ degradability in the rumen of Holstein of the black locust silage added with apple pomace was investigated in this study. The amount of apple pomace added in different treatments were 0, 20, 40 and 60% respectively. With higher amount of addition of apple pomace in black locust, crude protein content in the silage decreased. Crude protein contents in the apple pomace added silage were in the range between 11.7 and 13.7% and those were significantly lower than 16.3% of 100% black locust silage. The contents of ADF, NDF and crude ash were in the same trend as with crude protein, which were shown more clearly in the 40∼60% addition of apple pomace. Moisture content of 100% black locust silage was 56.7% however it significantly increased according to higher levels of addition of apple pomace(67.1∼73.8%). pH, lactic acid and total organic acid contents in 20∼60% addition of apple Pomace were 3.7∼4.3, 1.3∼2.2%, and 2.1∼6.0% respectively, however in 100% black locust silage those were significantly lower except pH as 5.4, 0.6% and 1.0% respectively. In situ disappearance rates of dry matter and NDF in the rumen were significantly higher at the stapes of incubation after 12h and 24h respectively in 20∼40% addition of apple pomace than in 100% black locust silage. No statistical differences were observed with quickly degradable fraction (a) in the disappearance rates of dry matter and NDF. In dry matter, however slowly degradable fractions (b) of 100% black locust and 60% addition of apple pomace were significantly higher as 99.7 and 99.8% respectively than 37.7∼50.5% of 20∼40% addition of apple pomace. On the contrary, fractional rate of disappearance (c) and effective degradability(ED) were significantly higher in 20∼40% addition of apple pomace as 0.0115∼0.0149 and 30.4∼31.9% respectively than the respective values of 0.0027 and 24.9% of 100% black locust. In NDF, b was significantly higher in apple pomace added silage(38.5∼99.8%) than in 100% black locust silage(14.9%). However, C was significantly lower in apple pomace added silage than in 100% black locust silage.
$AFB_1$과 아스콜빈산(AA)이 산성 $pH(pH1{\sim}7)$에서 반응하는 동안 ($37^{\circ}C$에서 5일간) 상당량의 $AFB_1$가 파괴되었다. 반응기간 중 $AFB_1$은 $pH5{\sim}7$ 사이에서 대조군의 경우 거의 파괴되지 않았는데 AA 존재할 때 5일 후 $50{\sim}60%$가 파괴되었다. pH4 이하에서는 대조군 자체에서도 pH가 낮아지면서 $AFB_1$의 파괴가 증가되었지만 AA 존재하에서는 그 파괴량도 증가되었을 뿐 아니라, pH가 떨어질수록 속도도 증가했다. $AFB_1$이 AA와 반응했을 때 온도가 증가함에 따라 $AFB_1$량이 점차 감소하여 $60^{\circ}C$에서 반응할 때는 3일 후에 전혀 $AFB_1$을 발견하지 못했지만 $5^{\circ}C$에서는 반응기간 중 $AFB_1$은 안정 했다. $AFB_1$이 산화제$(CuSO_4{\cdot}5H_2O)$가 첨가된 AA와 반응했을 때 그 반응속도는 급격히 증가되어 $90{\sim}96%$ 의 $AFB_1$이 파괴되었으며, 대조군의 4%만이 파괴된 것과는 대조적이었다. 환원제 L-cysteine을 첨가했을 때 하루 동안 $AFB_1$의 파괴는 거의 없었으며 반응기간 중 대조군보다 소량의 $AFB_1$이 파괴되었다. $AFB_1$의 파괴는 AA의 농도에 따라 달랐는데 AA농도가 감소할수록 파괴 속도가 감소했지만 $AFB_1$의 농도는 이 파괴 반응에 영향을 주지 못했다. $AFB_1$과 AA가 반응하여 새로이 생성된 반응물은 TLC, RPLC 및 UV spectrophotometer를 이용하였을 때 $AFB_2a$로 동정되었으며, $AFB_1$의 분해와 더불어 $AFB_2a$의 생성이 확인되었다. 이 실험 결과에 비추어 AA 존재시 $AFB_1$의 파괴는 AA 산화기간 중 생성된 산화 생성물에 의한 것으로 추정된다.
Patients with aplastic anemia were treated with a combination of depo-testosterone cyclopentylpropionate(Upjohn) and dexamethasone. In 7 of 15 patients treated, there was response in which either a significant increase in hemoglobin concentration, a prolonged interval or a cessation of blood transfusion requirement developed during androgen therapy. Younger patients with cellular marrow appeared to be better responding to androgen. EEI(Effective Erythropoietic Index) formulated by Gardner & Nathan(1966) which was a helpful measurement as to whether patients with myelofibrosis whould respond to androgen, was evaluated in patients with aplastic anemia. It was concluded that EEI as well as ferrokinetics indices (Plasma-$^{59}Fe$-disappearance rate, RBC $^{59}Fe$ net incorporation) did not significantly correlate with the degree of response to androgen in aplastic anemia.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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