Environmental Sciences Bulletin of The Korean Environmental Sciences Society
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제3권3호
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pp.169-175
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1999
2,4-Dinitrophenol(DNP) is a metabolic uncoupler that prevents cells from creating energy for growth and it has been suggested that the availability of sodium ions may be important in mitigating the effects of uncouplers. Accordingly, the degradation of DNP was investigated using activated sludge which had been adapted to mineralize DNP. After the acclimation of the activated sludge, the effect of sodium ions on the toxicity of high concentrations(80 to 100mg/L) of DNP was investigated over a sodium ion concentration range of 9.3$\times$10-5 to 94mM. The concentration of sodium ions in the activated sludge mixed liquor seemed to have little effect on the DNP toxicity. However, a lack of sodium in the grwoth media resulted in a reduction of the DNP degradation rate by a bacterial isolate from the activated sludge culture identified as Nocardia asteroides.
In this study, we investigated the suppressive effects of ore minerals on the allergic cell damages and oxidative cell damages. The ore minerals significantly reduced the productions of tumor necrosis factor-alpha (TNF-${\alpha}$) and interleukin-4 (IL-4) in rat basophilic leukemia cells challenged with 2,4-dinitrophenol-bovine serum albumin (DNP-BSA). Lipoxygenase activity was also reduced by the ore minerals. Moreover, the ore minerals showed weak protective effects on the oxidative damage induced by hydrogen peroxide in pig kidney cells and retinal ganglion cells. Photohemolysis of erythrocytes in the presence of rose-bengal as a sensitizer was also inhibited by ore minerals. These results suggest that the ore minerals may be useful as the protectant for allergic and oxidative cell damages.
Saccharomyces cerevisiae J170, a mutant, was used for $DL-^{14}C-leucine$ uptake during the sporulation and vegetative stage. $^{14}C-Leucine$ uptake into yeast cells appeared the highest at pH 6.0, indicating the same result of glucose transport, $^{14}C-Leucine$ uptake in sporulation period was higher than in growth phase, showing the evidence that leucine is more required for protein synthesis. This tendency has the evidence tht leucine is more required for protein synthesis. This tendency has the evidence that leucine is more required for protein synthesis. This tendency has been also supported from the result of Km values of leucine uptake in two stages of yeast. Leucine uptake was inhibited by 2,4-dinitrophenol in two stages of yeast. This means that leucine transport system is associated with energy dependent in both stages. The contents of all amino acid in growth phase cells were higher than those of sporulation stge cells, and those of methionine and tyrosine were showed in trace during the sporulation stage. In contrast, the content of glutamic acid in sporulation stage was compared with those of other amino acids.
Biological degradation of nitrogen-containing aromatic compounds was investigated in activated sludge previously adapted to mineralize low concentrations of nitrogen-containing aromatic compounds. Normally, the time required for 95% degradation of 10 mg/l dinitrophenol (DNP) under aerobic conditions was less than 4 hours without any lag, and with mixed liquor suspended solid (MLSS) levels from 600 to 1,000 mg/l. However, when the initial DNP concentration was increased to 75 mg/l, lags and even complete inhibition of DNP degradation were observed. The length of the lag was found to increase proportionally with decreasing MLSS levels. When dilute activated sludge was incubated for extended periods (192 hours), degradation of 75 mg/l DNP did eventually occur after lag periods of 37 to 144 hours, depending on the MLSS concentration. DNP was degradable in high concentrations if MLSS concentrations were sufficiently high to allow growth of bacteria resistant to the toxic effects of DNP.
토양으로부터 alkaline protease 생성능이 강한 Streptomyces griseus HC-1141을 분리하였으며, 정제 효소의 최적작용 pH 와 온도는 8.0, 60'C 였으며, pH 7.0-9.0의 범위와 $60^{\circ}C$이하에서 안정하였다. 금속 이온중 $Mn^{2+}$, $Ca^{2+}$, 등에 의해 활성이 증대되었으나 $Hg^{2+}$, $Cu^{2+}$, $Zn^{2+}$, $Ba^{2+}$, $Fe^{2+}$ 등에 의해 효소 활성이 저해되었고, 효소활성 저해제 중 Epsilon-aminocaproic acid, 2,4-dinitrophenol, iodine 등에 의해서는 현전한 효소활성저해가 관찰되지 않았으나 ethylenediaminetetraacetic acid와 p-chloromercuribenzoic acid에 의해 활성저해가 관찰되어 효소분자 중 SH기가 활성에 어느정도 관여하는 metallo enzyme으로 추정되었다. 정제효소의 $K_m$, $V_{max}$ 및 활성화에너지는 $2.229{\times}10^{-4}$M, $46.08 {\mu}$g/min, 3.643 kcal/mol 이었으며 hemoglobin과 egg albumin보다 casein을 더 잘 가수분해하였다. 또한 여러 가지 detergent에 대하여 강한 저항성을 가지고 있었다.
To characterize cytosolic $Ca^{2+}$ fluctuations under metabolic inhibition, rat ventricular myocytes were exposed to $200{\mu}M$ 2,4-dinitrophenol (DNP), and mitochondrial $Ca^{2+}$, mitochondrial membrane potential (${\Delta}{\Psi}m$), and cytosolic $Ca^{2+}$ were measured, using Rhod-2 AM, TMRE, and Fluo-4 AM fluorescent dyes, respectively, by Laser Scanning Confocal Microscopy (LSCM). Furthermore, the role of sarcolemmal $Na^+$/$Ca^{2+}$ exchange (NCX) in cytosolic $Ca^{2+}$ efflux was studied in KB-R7943 and $Na^+$-free normal Tyrode's solution (143 mM LiCl ). When DNP was applied to cells loaded with Fluo-4 AM, Fluo-4 AM fluorescence intensity initially increased by $70{\pm}10$% within $70{\pm}10$ s, and later by $400{\pm}200$% at $850{\pm}45$ s. Fluorescence intensity of both Rhod-2 AM and TMRE were initially decreased by DNP, coincident with the initial increase of Fluo-4 AM fluorescence intensity. When sarcoplasmic reticulum (SR) $Ca^{2+}$ was depleted by $1{\mu}M thapsigargin plus $10{\mu}M ryanodine, the initial increase of Fluo-4 AM fluorescence intensity was unaffected, however, the subsequent progressive increase was abolished. KB-R7943 delayed both the first and the second phases of cytosolic $Ca^{2+}$ overload, while $Na^+$-free solution accelerated the second. The above results suggest that: 1) the initial rise in cytosolic $Ca^{2+}$ under DNP results from mitochondrial depolarization; 2) the secondary increase is caused by progressive $Ca^{2+}$ release from SR; 3) NCX plays an important role in transient cytosolic $Ca^{2+}$ shifts under metabolic inhibition with DNP.
칼슘을 함유하는 반응액에서 arachidonic acid는 뚜렷하게 superoxide와 $H_2O_2$의 생성을 자극하였고 NADPH oxidase를 활성화하였다. 칼슘이 없는 반응액에서 NADPH oxidase에 대한 arachidonic acid의 자극 작용은 나타나지 않았다. Arachidonic acid에 의하여 자극된 respiratory burst는 EGTA, TMB-8, verapamil, diltiazem, nifedipine, dibucaine, lidocaine, CCCP, 2,4-dinitrophenol, sodium arsenate, chlorpromazine, theophylline, $HgCl_2$, PCMB와 PCMBSA에 의하여 억제되었으나, tetrodotoxin, tetraethyl ammonium chloride와 procaine의 영향은 받지 않았다. EGTA는 거의 완전히 arachidonic acid에 의한 ${\beta}-glucuronidase$의 유리를 억제하였으며, verapamil, CCCP와 theophylline은 약간 억제하였으나, 이에 반하여 dibucaine은 유의한 효과를 나타내지 않았다. Arachidonic acid는 중성호성 백혈구로 부터 칼슘을 유리시켰으며, 이는 TMB-8에 의하여 감소되었다. Arachidonic acid에 의한 세포내 유리 칼슘 농도의 상승은 EGTA와 CCCP에 의하여 억제되었고 TMB-8에 의하여 약간 억제되었다. Arachidonic acid와 verapamil 또는 arachidonic acid와 dibucaine의 동시 첨가에 의하여 상승된 세포내 유리 칼슘 농도의 양은 arachidonic acid 단독에 의한 것보다 현저하였다. 이상의 결과로 부터 다양한 생화학적 변화가 arachidonic acid에 의하여 활성화된 중성호성 백혈구의 기능 표현에 관여할 것으로 시사된다. Arachidonic acid는 세포내 칼슘 저장고로부터 칼슘유리를 자극하여 세포내 유리 칼슘 농도를 상승시킬 것으로 추정된다. 중성호성 백혈구의 활성화증에 칼슘 유입과 유출은 동시에 이루어질 것으로 추정된다.
안정 상태 및 활성화된 중성 백혈구에서 ATP는 superoxide 라디칼 생성을 자극하였으나 adenosine은 약간 억제하였다. ATP에 대한 활성화된 중성 백혈구의 반응이 안정상태의 중성 백혈구에서보다 크게 나타났다. 칼슘이 제거된 반응액에서 superoxide 라디칼 생성에 대한 adenosine의 억제효과가 관찰되었으나 ATP는 영향을 주지않았다. Superoxide 라디칼 생성에 대한 ATP의 자극 효과는 adenosine에 의하여 용량에 따라 억제되었다. ATP와 adenosine은 NADPH oxidase 활성도에 영향을 주지 않았다. ATP 또는 adenosine에 의한 superoxide 라디칼 생성의 변경은 다른 triphosphate nucleotide나 nucleoside에 의한 것보다 현저하였다. 활성화된 중성 백혈구에서 ATP와 ADP는 칼슘이온의 흡수를 더 자극하였고 세포질 유리 칼슘농도를 증가시켰으나, adenosine은 칼슘이온의 이동을 억제하였다. APT에 의한 세포질 유리 칼슘이온 농도의 증가는 verapamil에 의하여 효과적으로, tetrodotoxin에 의하여 약간 억제되었다. ATP에 노출된 활성화된 중성 백혈구에서의 superoxide 라디칼 생성에 대한 verapamil 과 tetrodotoxin의 억제 효과는 ATP의 영향이 없는 활성화된 중성 백혈구에서보다 크게 나타났다. Tetraethylammonium chloride는 superoxide 생성에 뚜렷한 영향을 미치지 못했다. CCCP, 2,4-dinitrophenol, diphenylhydantoin과 procaine은 활성화된 중성 백혈구에서 superoxide 라디칼의 생성을 억제하였다. 이들 가운데 CCCP만이 ATP의 자극 효과를 억제하였다. ATP는 활성화된 중성 백혈구에서의 sulfhydryl기의 손실을 더 자극하였으나 adenosin의 영향은 관찰되지 않았다. 이상의 결과로부터 중성 백혈구의 기능적 반응은 부분적으로 purine에 의하여 조절될 것으로 시사되었다. ATP와 adenosine은 칼슘 흡수와 그리고 아마도 세포막 인산화 반응 및 용해성 sulfhydryl기의 산화에 대한 영향을 통하여 활성화된 중성 백혈구의 반응을 더 변경 시킬 수 있을 것으로 추정된다.
소듐에 의한 칼슘의 유리는 verapamil, TTX, TEA의 영향을 받지 않았다. $100\;{\mu}M\;Cd6{++}$과 $Zn^{++}$은 소듐에 의한 칼슘 유출을 유의하게 억제하였다. $Cd^{++}$은 $Ki\;100\;{\mu}M\;Cd6{++}$로써 비상경적으로 소듐-칼슘 교환이동을 억제하였다. $Cd^{++}$은 SH기의 산화를 초래하였으나, $Zn^{++}$은 거의 영향을 나타내지 않았다. $Cd^{++}$과 $Zn^{++}$은 $Na^+-Ca^{++}$ ATPase를 효과적으로 억제하였으나 $Ca^{++}-Mg^{++}$ ATPase를 약간 억제시켰다. Carbonyl cyanide chlorophenylhydrazone, 2,4-dinitrophenol과 sodium arsenate는 소듐에 의한 칼슘 유리를 촉진하였다. Dibucaine과 oligomycin은 소듐에 의한 칼슘의 유리를 약간 억제하였으나, 이에 반하여 ouabain은 약간 촉진하였다. 이상의 실험 결과로부터 신경 세포막에서의 소듐-칼슘 교환은 이온 통로를 통하여 이루어지지 않을 것으로 시사되었다. 소듐-칼슘 교환이동은 $Cd^{++}$에 민감하게 억제되고 이 이동기전에 synaptosome막의 SH기가 관여할 것으로 사료되었다. 또한 소듐-칼슘 교환은 세포막 단백질 성분의 인산화 반응 동안에 억압될 것으로 추정되었다.
느타리버섯을 사용하여, 빛이 버섯의 체내 대사에 영향을 미치는지, 영향을 미친다면 어떤 영역의 빛이 작용하는 지를 연구하였다. 이들 결과를 비교 검토하기 위해 재배 지역이 다른 느타리버섯 중의 mitochondria를 설탕 밀도 단계 기울기 원심분리법에 의하여 설탕 농도 44%층에서 분리 정제하여 실험한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 파장 변화에 따른 mitochondrial ATP synthase의 활성도는 490nm에서 가장 크게 활성화되었다. 2. 최적 파장 490nm에서 빛 조사 시간 변화에 따른 ATP synthase의 활성도는 15초 동안 조사하였을 때 가장 활성화 되었다. 3. 최적 조건에서 ATP synthase는 phenazine methosulfate(PMS)에 의해 224% 활성화 되었으며, 2,6-dichlorophenol indophenol(DCPIP)에 의하여 168% 활성화 되었다. 한편, oligomycin에 의해서는 90% 효소 활성이 억제 되었으며, 2,4-dinitrophenol(DNP)에 의해서 75%, 2-heptyl-4-hydroxyquinoline-N-oxide(HQNO)에 의해 15% 효소활성이 억제되었다. 4. 최적 조건에서 ATP synthase는 $Mn^{2+}$에 의해 73%의 효소 활성 억제를 보였고, $Ca^{2+}$에 의해 35%, $Co^{2+}$에 의해 14%의 효소 활성 억제를 보였다. 5. 최적조건에서 ATP synthase는 $CN^{-}$과 $SO_{4}\;^{2-}$에 의하여 각각 80%, 46% 효소활성이 억제되었고, $NO_{3}\;^{-}$과 $CO_{3}\;^{2-}$에 의해서는 28%의 효소 활성 억제를 보였다. 이상과 같은 결과를 통해 버섯의 종류에 관계없이 청색광 영역의 빛에 의해 활성화 된다는 것과 그 광수용체도 유사한 형태일 것이라 예측할 수 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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