The Denver Developmental Screening Test was devised to provide a simple method of evaluating the developmental status of infants and preschool children. To assess the development of Korean children, 667 children (390 boys and 277 girls) between the ages of 2 weeks and 6 years who live in Kwangju city and rural areas in Chonnam were examined according to the DDST. The ages at which 25%, 50%, 75%, and 90% of the children performed each item were calculated for the entire sample. The results of these were compared with the norms of Denver children and other related previous studies in Korea. The development of the boys was also compared with that of the girls, and further the test results of city children and country children were also compared. Girls performed the DDST items in personal-social, fine motor-adaptive and gross motor sectors slightly earlier than boys. In general, however, there were no significant differences in the developmental rate between boys and girls. In all four sectors of the DDST, urban children performed the items significantly earlier than rural children. In comparing Korean children and Denver children, Korean children tended to perform gross motor and personal-social items at a slightly earlier age than Denver children. In the language sector, Denver children tended to perform a little earlier than Korean children. But on the whole there were no significant differences in developmental status between Korean and Denver children. It should be noted that a few items, such as“Uses plurals”, needed to be changed due to the structure of Korean language.
The effects of freezing and 1,2-propanediol on early and late pronucleate stage mouse ova were investigated in terms of survival after thawing and development in vitro. The samples were divided into two groups according to different age in pronucleate ova: ova in(1) early pronuclear stage with two distant pronuclei at 18h after hCG injection, and (2) late pronuclear stage with adjacent pronuclei at 30h. Zygotes in the late pronuclear stage have been proven to be more resistant to 1,2-propanediol, showing a significantly higher developmental rate than zygotes in early stage (80.3 versus 66.3%, <0.05), but survival rate was similar in the two groups (91.0 versus 93.5%). After freezing and thawing, survival and developmental rates were decreased in both groups when compared to the control group (54.3 versus 92.3%, 47.7 versus 73.3%. respectively). And developmental rate in the late pronuclear stage zygotes showed significantly higher than in early (55.4 versus 40.0%) after thawing. In conclusion, early pronucleate mouse ova have a lower developmental capacity in vitro and a lower survival rate after freezing and thawing than late ova. These findings suggest that the timing of freezing could be important for survival and further development in vitro in cryopreservation of human pronucleate ova.
This study was conducted to investigate the efficacy of vitrification procedure for the cryopreservation of porcine oocytes and the utilization of vitrified oocytes as recipient cytoplasts for somatic cell nuclear transfer (NT), and observed that porcine oocytes are evaluated by pronuclear formation, and parthenogenetic development. Single fetal donor cells were deposited into the perivitelline space of vitrified enucleation oocytes, followed by electrical fusion and activation. NT embryos were cultured in NCSU-23 medium supplemented with 5% FBS, at $38.5^{\circ}C$ in 5% $CO_2$ and air. 1. When the developmental rates of the oocytes after being culture for $0{\sim}10$ hours vitrified with EDS and ETS were 42.0%, 38.0%, respectively. This results were lower than the control group(62.2%). 2. When the developmental rates of the oocytes after being culture for $0{\sim}10$ hours vitrified-thawed with sucrose and glucose, 5% PVP, NCSU-23 supplemented with 10% FBS were 33.3%, 25.9%, respectively. This results were lower than the control group(55.6%). 3. The fusion and development to the blastocyst stage between the NT embryos constructed with the vitrified and non-vitrified oocytes were significant differences. Developmental rate of oocytes and NT embryos constructed with the vitrified or non-vitrified oocytes were $13.0{\pm}2.4%\;and\;23.2{\pm}2.4%$, respectively.
Kim, Dong-Hee;Chun, Ju Lan;Lee, Ji Hye;Kim, Keun Jung;Kim, Eun Young;Lee, Bo Myeong;Zhuang, Lili;Kim, Min Kyu
농업과학연구
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제43권1호
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pp.52-60
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2016
In animal reproduction, the quality of oocytes and embryos has been evaluated by the expression of specific molecules. Follistatin (FST), which was isolated from follicular fluid, binds and bio-neutralizes the TGF-${\beta}$ superfamily members. Previous studies using the bovine model showed FST could be an important molecular determinant of embryo developmental competence. However, the effect of FST treatment on porcine embryo developmental competence has not been established. In this study, the effect of exogenous FST on porcine embryo developmental competence was investigated during in vitro culture. FST (10 ng/ml) treatment induced a significant decrease in the rate of cell arrest at the 4-cell stage. The expression levels of DNA-methyltransferase 1 (DNMT1), histone deacetylase 1 (HDAC1), and histone deacetylase 2 (HDAC2) were decreased in 4-cell stage embryos. FST treatment also resulted in significant improvements in developmental competence of embryos in terms of blastocyst formation rate and OCT-4 mRNA levels, the latter being related to pluripotency. In conclusion, during in vitro culture, FST treatment significantly ameliorated 4-cell block during embryonic development and improved embryo developmental competence. Therefore, FST treatment may potentially have a functional role in porcine embryogenesis that is broadly applicable to enhance in vitro embryo development.
The study was carried out to investigate the effects of morphology, reproductive cycle, incubation time and activation of oocytes on in vitro maturation of cat oocytes and development of IVM/IVF embryos. The results were summarized as follows: 1. When recovered from ovaries collected at different stages of the reproductive cycle (inactive, follicular and luteal stage), the developmental rates of oocytes to GV and MI stage were 72.5% and 27.5%, 57.5% and 7.5%, 62.5% and 17.5%, respectively. 2. The developmental rates of oocytes with cumulus cells to GV and MI stage in different conditions of incubation (5% $CO_2$ , 95% $O_2$ and 10% $CO_2$, 90% $O_2$) were 70.0% and 27.5%, 52.5% and 20.0%, 55.0% and 12.5%, respectively. 3. The developmental rates to GV and MI oocytes when cultured at different time of incubation (17∼20, 21∼24, 25∼28 and 29∼32 h) were 67.5% and 20.0%, 67.5% and 30.0%, 62.5% and 22.5%, 65.0% and 15.0%, respectively. 4. The fertilization and cleavage rates of freshly collected oocytes with and without cumulus cells were 72.5% and 25.0%, 37.5% and 7.5%, respectively. The rates were greater in oocytes with cumulus cells than those without cumulus cells. 5. The fertilization and cleavage rates of oocytes recovered from ovaries collected at different stages of the reproductive cycle (inactive, follicular and luteal stage) were 75.0% and 25.0%, 40.0% and 7.5%, 50.0% and 15.0%, respectively.
Blastocyst formation, consisting of the inner cell mass (ICM) and trophectoderm (TE), is the first differentiation process during embryonic development in mammals. It has been hypothesized that the proportion of ICM to TE in the blastocyst may be crucial for subsequent developmental competence of early embryos, which it may be expressed as a sensitive indicator for evaluating in vitro systems. In this study ICM/total cell ratio of nuclear transfer (NT) embryos was compared with IVF-derived and in vivo embryos. Somatic cell nuclei obtained from a fetus at Day 40 of gestation were transferred into the enucleated oocyte and then cultured in NCSU 23 medium for 6 days as previously described (Koo et al., Biol. Reprod. 2000; 63:986-992). ICM and TE cells of blastocysts were determined by using a differential staining method (Han et al., Biol. Reprod. 1999; 60:1110-1113). Development rate (9.8$\pm$2.5%, 23/225) to the blastocyst stage of NT embryos was lower than IVF embryos (23.8$\pm$2.7%, 53/223). Thus, a difference was detected in the in vitro developmental rate to blastocyst stage between NT and IVF-derived embryos (P<0.05). In the next experiment, we investigated ICM and TE nuclei to assess the quality of blastocysts that produced by NT, IVF and in vivo, respectively. NT blastocysts (27.6$\pm$8.3) showed a smaller total cell number than IVF-derived (42.6$\pm$17.4) and in vivo embryos (283.9$\pm$103.5) (P<0.05). Ratios of ICM/total cells in NT, IVF and in vivo blastocysts were 15.1$\pm$ 18.6% (n=56), 12.3$\pm$9.2% (n=57) and 30.4$\pm$6.8% (n=40), respectively. Individual blastocysts for the ratio of ICM/total cells were assigned to 3 groups (I; <20%, II; 20 to 40% and III;>40%). As the results, most in vivo blastocysts (97.5%, 39/40) were distributed into group II while most NT (78.6%, 44/56) and IVF-derived blastocysts (82.5%, 47/57) were allocated to group I. Thus, our data show that NT or IVF-derived embryos have aberrant morphology during early development in vitro systems, suggesting that these anomalies may result in developmental failures of the NT embryos to term.
This research was performed to investigate the developmental ability of mouse oocytes following cold-culture(4$^{\circ}C$) in vitro. When the oocytes were fertilized after 10 hour cold-culture in D-PBS or Ham's F10 with 0.3% BSA, the cleavage rage of the oocytes was not different in the rate of oocytes fertilized in vitro without cold-culture(126/189, 66.2% vs 88/133, 66.7%) and also the rate of embryos developed to blastocyst did not(123/189, 65.1% vs 82/133). But, when the time of the cold-cultre was extended from 10 to 24 hours, the rate of embryos developed to blastocyst was slightly decreased(73.5% vs 52.2%). However, when the oocytes were cultured for 10 and 24hours at 37$^{\circ}C$, the rate of oocytes developed to blastocyst was significantly decreased than that of oocytes following cold-culture. By the results of this study, it'll be possible to utilize effectively the cold-culture of the oocytes when in vitro fertilization is delayed.
This study was performed to find out the optimal larval stage among trochophore, D-shaped and umbo stage larvae and the desirable protective additive such as fructose, glucose, sucrose and trehalose with cryoprotectant for cryopreservation of surf clam, Spisula sachalinensis larvae. Dimethyl sulfoxide and ethylene glycol were used as cryoprotectant and each cryoprotectant was made to 2.0 M with previous protective additives. The larvae were immersed in the preparations waited for 15 minutes to reach equilibration, and then frozen in a program freezer (-35$^{\circ}C$) and liquid nitrogen (-196$^{\circ}C$). The freezing rate of 1.0$^{\circ}C$ /min. was used for cryopreservation of trochophores before seeding temperature (-12$^{\circ}C$). The survival rate of frozen-thawed larvae increased as larval developing and that of umbo stage larvae was the highest as 96.1 ${\pm}$ 1.0%. The presence of lower concentration of disaccharides as sucrose or trehalose significantly enhanced survival rate when mixed with cryoprotectants (P<0.05). The results of our study indicate that desirable developmental stages of larvae and protective additive for cryopreservation are the umbo stage larvae and 0.2 M sucrose, respectively.
In the present study, effects of concentration of cryoprotectant solutions on the nuclear maturation of vitrified-thawed porcine oocytes were examined. Also, the developmental capacity of vitrified-thawed immature porcine oocytes following ICSI was investigated. Oocytes were cultured in NCSU-23 medium supplemented with 5% FBS at $38^{\circ}C$ in 5% $CO_2$ and air. The in vitro maturation rate of vitrified-thawed oocytes ($24.1{\pm}2.5%$) was lower than that of the control ($46.0{\pm}3.2%$, p<0.05). The in vitro maturation rate of vitrified-thawed oocytes treated with $1.0{\sim}5.0\;ug$ CB + NCSU- 23 medium were $22.2{\pm}3.0%$, $30.7{\pm}3.2$, $46.3{\pm}3.1%$, $38.5{\pm}3.2%$, respectively. The in vitro maturation rate ($46.3{\pm}3.4%$) of the vitrified-thawed oocytes treated with $3.0\;{\mu}g$ CB for 30 min was the highest of all vitrification groups. When the in vitro developmental rates of the vitrified-thawed (with EDS and EDT) oocytes following ICSI were $18.5{\pm}2.5%$, $16.4{\pm}2.1%$, respectively. This results were lower than the control group ($24.0{\pm}2.5%$).
비트의 주요 해충인 흰띠명나방을 9개의 다른 온도조건(15.0, 17.5, 20.0, 22.5, 25.0, 27.5, 30.0, 32.5 및 $35.0^{\circ}C$), 상대습도 $65{\pm}5%$, 광조건 16L:8D에서 발육특성을 조사한 결과, 알에서 성충 우화 전까지의 발육기간은 $17.5^{\circ}C$에서 51.0일로 가장 길었고, $35^{\circ}C$에서 14.6일로 가장 짧게 조사되었다. 온도와 발육율의 관계를 직선회귀에 의해 분석한 결과, 결정계수($R^2$) 값이 0.87 이상으로 나타났으며, 온도에 따른 발육은 직선회귀에 부합되었다. 알부터 성충 우화 전까지의 발육영점온도와 유효적산온도는 $10.4^{\circ}C$와 384.7일도를 나타내었다. 각 태별 발육모형은 $R^2$값이 0.97~0.99로 비선형회귀식에 잘 부합되었다. 각 태별 발육누적분포와 발육기간에 대한 평균 발육기간으로 나눈 값을 Weibull 함수에 적용한 결과 $r^2$값이 0.63~0.87이었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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