본 연구에서는 은행잎에 존재하는 생리활성 물질이 추출용매와 추출조건에 따른 D. pteronyssinus에 대한 살충 실험을 통해 최적 추출 조건을 확립하였다. 은행잎 성분 중 bilobalide가 D. pteronyssinus에 살충효과가 있음을 검증하였으며, 다양한 은행잎 추출조건에 따른 살충실험을 한 결과 48시간 이후 약 68%$\sim$80%의 치사율을 보였다. 종합적으로 판단해 볼 때 경제성과 치사율을 고려하면 80$^{\circ}C$에서 온수추출물 (GLW80)이 가장 최적추출 조건이다.
Allergen extracts from dust mites and cockroaches commonly found in Korean homes were used to evaluate their enzymatic activity as they are believed to influence allergenicity. Allergen extracts were prepared from 3 dust mite species (Dermatophagoides farinae, D. pteronyssinus, and Tyrophagus putrescentiae) and 3 cockroach species (Blattella germanica, Periplaneta americana, and P. fuliginosa) maintained in the Korea National Arthropods of Medical Importance Resource Bank. Proteins were extracted in PBS after homogenization using liquid nitrogen. The activities of various enzymes were investigated using the API Zym system. No significant difference in phosphatase, lipase, or glycosidase activity was observed among the 6 allergen extracts, but much difference was observed in protease activity. Protease activity was assessed in more detail by gelatin zymography and the EnzChek assay. Extract from T. putrescentiae showed the highest protease activity, followed by those of the cockroach extracts. Extracts from D. farinae and D. pteronyssinus showed only weak protease activity. Gelatinolytic activity was detected mainly in a 30-kDa protein in D. farinae, a 28-kDa protein in D. pteronyssinus, a > 26-kDa protein in T. putrescentiae, a > 20-kDa protein in B. germanica, and a > 23-kDa protein in P. americana and P. fuliginosa. The information on various enzymatic activities obtained in this study may be useful for future studies. In particular, the strong protease activity found in cockroach extracts could contribute to sensitization to cockroach allergens, which is known to be associated with the development of asthma.
Canine sarcoptic mite (Sarcoptes scabiei var. canis) burrow usually in the stratum corneum of the skin of dogs and rabbits. Antigens from the burrowing mites induce cutaneous inflammatory reaction and humoral and cell-mediated immune response in the host. The effect of immunization induced by somatic antigens of house dust mite (Dermatophagoides spp.) has been evaluated to control the canine sarcoptic mite in this experiment. Twelve common antigens (187, 142, 126, 120, 109, 92, 80, 68, 51, 30, 25, 17 kDa) were found using SDS-PAGE with silver staining and Western blot between canine sarcoptic mite and house dust mite. In order to evaluate the immunologic effect of these common antigens 10 New Zealand white rabbits were divided as 4 groups such as negative control (group I), positive challenged control (group II), vaccinated (group III), and vaccinated-challenged (group IV) groups. Group II was artificially infested with about 1,000 canine sarcoptic mites and group III and IV were immunized with somatic antigens of house dust mite. In addition group IV was artificially infested with about 1,000 canine sarcoptic mites and group II, IV were treated with ivermectin. At the 8 weeks of the vaccination with common antigen, the antibody titers of all groups of II, III and IV had been increased. Both infestation score and live canine sarcoptic mite counts of group IV were lower than group III. Infestation score of group II become 0 by 2 weeks and group IV by 4 weeks after infestation. These results suggest that house dust mite, which is easy to culture in vitro, can be a vaccine candidate for protection of canine sarcoptic mite infestation.
The acaricidal activities of 12 commercial constituents derived from Eugenia caryophyllata leaf oils against Dermatophagoides farinae, D. pteronyssinus and Tyrophagus putrescentiae adults were examined using an impregnated fabric disk application and compared with that of the commercial benzyl benzoate as synthetic acaricide. On the basis of $LD_{50}$ values, the most toxic compound was methyl eugenol ($4.13\;{\mu}g/cm^2$), followed by methyl isoeugenol ($4.19\;{\mu}g/cm^2$), isoeugenol ($4.29\;{\mu}g/cm^2$), eugenol ($4.94\;{\mu}g/cm^2$), and acetyl eugenol ($13.91\;{\mu}g/cm^2$) against D. farinae. In the case of D. pteronyssinus, isoeugenol ($2.93\;{\mu}g/cm^2$) was the most toxic, followed by methyl isoeugenol ($3.28\;{\mu}g/cm^2$), methyl eugenol ($3.87\;{\mu}g/cm^2$), eugenol ($3.92\;{\mu}g/cm^2$), and acetyl eugenol ($7.21\;{\mu}g/cm^2$). These results suggest that D. pteronyssinus may be controlled more effectively by the application of eugenol congeners than D. farinae. In comparison with synthetic acaricides, the acaricidal activities of eugenol, isoeugenol, methyl eugenol, and methyl isoeugenol were about 1.9-2.2 times more toxic than benzyl benzoate. Furthermore, the most toxic constituent against T. putrescentiae was exhibited on eugenol ($10.11\;{\mu}g/cm^2$), followed by methyl eugenol ($38.67\;{\mu}g/cm^2$) and acetyl eugenol ($70.09\;{\mu}g/cm^2$), but no activity was observed for isoeugenol and methyl isoeugenol. The results suggested that eugenol congeners may be useful as a new source for selective control of house dust mites and stored food mites.
The house dust mite (Dermatophagoides pteronissinus) is an important factor in triggering allergic diseases. The function of eosinophils, particularly in the production of cytokine or chemokine, is critical in understanding the pathogenesis of inflammatory diseases. In this study, we examined whether D. pteronissinus extract (DpE) induces the expression of monocyte chemotactic protein 1 (MCP-1)/CCL2, IL-8/CXCL8, and IL-6 that mediate in the infiltration and activation of immune cells and in its signaling mechanism in the human eosinophilic cell line, EoL-1. DpE increased the mRNA and protein expression of MCP-1, IL-8, and IL-6 in a time- and dose-dependent course in EoL-1 cells. In our experiments using signal-specific inhibitors, we found that the increased expression of MCP-1, IL-8, and IL-6 due to DpE is associated with Src family tyrosine kinase and protein kinase C $\delta$ (PKC $\delta$). In addition, the activation of extracellular signal-regulated kinase (ERK) is required for MCP-1 and IL-8 expression while p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) is involved in IL-6 expression. DpE induced the phosphorylation of ERK and p38 MAPK. PP2, an inhibitor of Src family tyrosine kinase, and rottlerin, an inhibitor of PKC $\delta$, blocked the activation of ERK and p38 MAPK. DpE induces the activation of ERK and p38 MAPK via Src family tyrosine kinase and PKC $\delta$ for MCP-1, IL-8, or IL-6 production. Increased cytokine release due to the house dust mite and the characterization of its signal transduction may be valuable in understanding the eosinophil-related pathogenic mechanism of inflammatory diseases.
Canine sarcoptic mite (Sarcoptes scabiei var. canis) is ectoparasite which burrow usually in the stratum corneum of the skin of dogs. Antigens from the burrowing mites induce humoral and cellmediated immune responses in the hosts. The effect of antigenecity induced by somatic antigens of house dust mite (Dermatophagoides pteronyssinus) isolated by continuous elution has been evaluated in canine sarcoptic mites infestation. Continuous elution was carried out in 7.5% SDS-PAGE to isolate proteins of common antigens from somatic antigens of house dust mite. These eluted proteins from somatic antigens of house dust mite were confirmed by Western blotting in 7.5% SDS-PAGE, and eluted proteins (65, 60 kDa) were isolated. To evaluate the antigenetic effect of eluted proteins, eight dogs were divided as 4 groups such as non-vaccinated and non-challenged control (Group I), challenged control (Group II), vaccinated (Group III), and vaccinatedandchallenged (Group IV) groups. Group II and IV were artificially infested canine sarcoptic mites. Group III and IV were immunized with eluted proteins (65, 60 kDa). At the 6th week of the vaccination, the antibody titers of Group of IV were statistically significant higher than those of Group II (p<0.05). And antibody titers of Group III were also statistically significant higher than those of Group I (p<0.05). From these result, it is possible to replace somatic antigens of canine sarcoptic mites with eluted proteins from somatic antigens of house dust mites in order to diagnose and prevent the canine sarcoptic mite infestations.
Ahn, Sang Hyun;Kim, Hee Yeon;Yang, In Jun;Jeong, Han Sol;Kim, Kibong
동의생리병리학회지
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제32권6호
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pp.396-402
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2018
Hataedock (HTD) treatment is a traditional preventive therapy for the fetal toxicosis- the acute allergic disease after childbirth, mainly manifested by a variety of skin allergies such as scab, phlegm. The aim of this study was to investigate the efficacy of HTD treatments for the alleviation of inflammation in Dermatophagoides farinae-induced obese NC/Nga mice. 20 mg/kg of Coptidis Rhizoma, Glycyrrhizae Radix (CRGR) extracts as a remedy of HTD treatments were orally administered to NC/Nga mice. We induced obesity in the mice by high-fat diet. To induce skin allergies, the extracts of Dermatophagoides farinae were topically applied on the NC/Nga mice at 4th-6th and 8th-10th weeks. Structural and molecular changes in the skin tissues were measured by immunohistochemical staining. HTD treatment decreased the atopic dermatitis (AD)-like symptoms including hemorrhage, erythema, erosion, edema, and dryness. HTD treatment suppressed the mast cell activation confirmed by reduction of $Fc{\varepsilon}RI$, substance P, and serotonin. The expression of several inflammatory mediators including nuclear factor-kappa B ($NF-{\kappa}B$) p65, inducible nitric oxide synthase (iNOS), vascular endothelial growth factors (VEGFs) was also decreased by HTD treatment. HTD treatment suppressed the allergic, inflammatory responses in the skin tissues of the NC/Nga mice by reducing mast cells and down-regulating several inflammatory mediators.
Kim, Hee-Yeon;Ahn, Sang-Hyun;Yang, In-Jun;Cheon, Jin-Hong;Kim, Kibong
대한한의학회지
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제39권4호
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pp.74-85
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2018
Objectives: HTD treatment is a traditional preventive therapy for neonatal inflammatory diseases such as AD. The aim of this study was to investigate the efficacy of HTD treatments for the maintenance and formation of lipid barrier in Dermatophagoides farina-induced obese NC/Nga mice. Methods: 20 mg/kg of CRGR extracts as HTD treatments were orally administered to NC/Nga mice. To induce obesity, high fat diet was served. Dermatophagoides farina extracts was applied on the 4th-6th and 8th-10th weeks to induce AD-like skin lesions in NC/Nga mice. Changes of skin conditions in mice were observed by histochemistry and immunohistochemistry. Results: The results showed that HTD treatments effectively maintained and formed the lipid barrier. In the experimental groups, restorations of Lass2 expression and distributions of filaggrin, involucrin, loricrin, ASM, and LXR means that HTD treatments maintained and generated the lipid barrier. In the dermal papillae, HTD treatments reduced PKC production accompanied by epidermis damage. Furthermore, levels of IL-4, and STAT6 was low. HTD treatment may be effective for preventing inflammation induced by Th2-skewed condition by suppressing the main pathway of Th2 differentiation. Conclusions: HTD treatment alleviated the inflammatory damage in the skin tissues of the NC/Nga mice by maintaining the lipid barrier and suppressing Th2 differentiation.
목 적 : 면역치료는 흡입성 알레르겐에 의해 유발되는 천식이나 비결막염, 곤충자상 치료에 매우 효과적이다. 이중 집먼지진드기 항원에 감작된 환아를 1-2일 내에 유지용량에 도달하는 초급속면역치료(ultra-rush immunotherapy)에 대한 안전성과 효과를 알아보고자 본 연구를 계획하였다. 방 법 : 분당차병원 소아 알레르기 클리닉에서 알러지성 비염 또는 기관지 천식으로 진단받은 4세 이상의 소아 중, 피부반응 검사에서 Dermatophagoides 항원에만 양성 반응을 보이고 비강유발검사에서 양성소견을 보인 환자를 대상자로 선정하였다. 고식적면역치료는 11명, 초급속면역치료를 신청한 소아는 12명이었다. 초급속면역치료는 목표 농도의 100:1-1,000:1로 희석한 알레르겐을 30분 간격으로 2-3배 증량하며, 주사 후 15분마다 산소포화도와 심박수, 혈압 및 전신반응 유무를 관찰하였고, 이때 나타난 환아의 증상을 점수화하였다. 면역치료의 효과 판정은 초기치료 3개월이 경과한 후에 비강유발검사를 실시하여 점수 변화로써 확인하였다. 결 과 : 고식적면역치료와 초급속면역치료 받은 소아의 평균나이는 각각 $8.3{\pm}2.3$세, $9.2{\pm}2.8$세였다. 초급속면역치료를 받은 12명중 6명(50%)에게서 전신반응이 관찰되었으며, 아나필락시스와 같은 심각한 부작용은 발현되지 않았다. 고식적면역치료의 경우 11명중 1명(9%)에서만이 전신반응이 관찰되었다. 치료 전후의 비강유발검사 평균 점수는 고식적면역치료 군의 경우 치료 전 $8.2{\pm}1.5$점, 치료 후 $4.6{\pm}2.1$점이었으며(P=0.043). 초급속면역치료에서는 치료 전 $6.2{\pm}2.2$점, 치료 후 $3.7{\pm}2.5$점으로(P=0.017) 두 군 모두 치료 전후 비강유발 검사 결과가 호전된 것을 알 수 있었다. 결 론 : 소아에서 Dermatophagoides를 이용한 초급속면역치료는 3개월 후 비강유발검사상 호전된 것을 확인할 수 있었으나 전신반응이 고식적 면역치료보다 높아 소아를 대상으로 시행함에 있어 면밀한 주의가 요구된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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