막의 기능설계를 하기 위하여 DPPC(dipalmitoylphosphatidylcholine)인 지질로 제조한 liposome과 DPPC와 DTAB(dodecyltrimethylammonium bromide)를 혼합하여 liposome을 제조하여 그 구조변화를 조사하였다. 막 구조의 변화는 CF(carboxylfluorescein)를 이용하여 DPPC의 상전이 온도($t_c=41^{\circ}C$) 이상과 이하에서 측정하여 평가하였다. DPPC liposome에 함유된 CF의 유출에 의한 형광강도는 $45^{\circ}C$에서 증가되었지만 $20^{\circ}C$에서는 그 변화는 관측되지 않았다. 동등한 조건에서 DPPC/DTAB liposome에서 CF 유출에 의한 형광강도의 변화는 DPPC liposome에 비하여 큰 것이 관측되었다. 이 결과는 DPPC/DTAB liposome이 불규칙한 배열을 하고 있다는 것을 시사한다. 한편 $Ca^{2+}$ 존재하에서 DPPC liposome과 DTAB/DPPC liposome에서 Quin 2의 형광강도는 $45^{\circ}C$에서 현저히 증가되었지만 $20^{\circ}C$에서는 거의 변화하지 않았다. 그리고 형광강도의 변화는 DPPC/DTAB liposome보다 DPPC liposome 쪽이 더 크게 나타났다. 이것은 DPPC/DTAB liposome의 구조가 DPPC liposome보다 더 안정하다는 것을 의미한다. 또한 형광물질인 ANS를 이용하여 막 표면의 양상을 조사한 결과 DPPC liposome과 DPPC/DTAB liposome에서 ANS의 형광강도는 $45^{\circ}C$와 $20^{\circ}C$에서 다른 양상을 보였다. 이 양상은 상전이 온도의 이상과 이하에서 DPPC liposome과 DPPC/DTAB liposome의 막유동성을 의미하고 그 변화량은 DPPC liposome이 DPPC/DTAB liposome보다 더 컸다. 또한 DSC에 의해 측정된 상전이 온도는 DPPC liposome의 경우 $41^{\circ}C$이었으며 DPPC/DTAB liposome의 경우에는 $32^{\circ}C$이었다. 이상의 결과로 DPPC/DTAB liposome의 분자배열 상태가 불규칙한 것을 의미한다. 그러므로 DPPC/DTAB liposome은 불규칙하게 배열되어 있지만 안정된 구조를 갖고 있다고 생각된다.
Liposome-amino acid conjugates were prepared using dipalmitolyphosphatidylcholine(DPPC) and hydrophobically modified asparagine. A microdialyzer was used to measure glucose diffusion. The glucose binding affinity of DPPC-ODA-asparagine liposomes higher than that of DPPC liposomes and distilled water. The size of DPPC-ODA-asparagine was approximately 75-150 nm. Cholesterol increased the stability of liposomes, and reduced the size of liposome particles.
세포막 유동성은 생체의 항상성 유지의 가장 기본적이며 중요한 기능으로서, 도라지의 용매별 분획물의 첨가로 세포막 유동성에 미치는 영향을 열시차 열량분석법 (differential scanning calorimetry, DSC)으로 측정하였다. DPPC liposome에 도라지의 용매별 분획물 첨가시 첨가물의 농도 증가에 따라 서서히 상전이 온도가 저하되었고 thermogram도 넓어졌으며 이에 따라 협동 단위($\Delta$$H_{vH}$ /$\Delta$$H_{cal}$)수도 감소됨을 알 수 있었다. 이는 도라지 분획물의 첨가로 DPPC liposome의 유동성이 증가하였음을 보여주는 결과로 생각 되어진다. 시료의 각 용매별 분획물의 유동성 효과는 ethyl-ether 분획층인 PGMEE의 경우 상전이온도 Tm이 시료첨가 최고농도에서 DPPC liposome 만의 경우보다 4.3$^{\circ}C$가 저하되어 다른 분획물보다 그 정도가 두드러졌으며 그 순서는 hexane 분획층 PGMH, ethylacetate 분획층인 PGMEA 및 methanol 분획층 PGMM의 순이었으며 butanol 층인 PGMB는 그 효과가 미미하여 앞서의 열역학적 요소에 거의 영향을 미치지 못했다. 이와 같은 결과는 PGMB를 제외한 시료의 각 분획물 성분 중 분자내 hydrophobicity가 큰 물질들이 DPPC liposome 이중층의 소수성부분에 더 깊숙히 침투됨으로써 인지질 liposome의 유동성을 증가시킨 현상이라고 생각된다. 도라지의 용매별 분획물의 막유동성 증가는 이온, 약물, 영양물의 흡수, 수송 및 교환등 생체막의 주요기능에 영향을 미치므로 막유동성을 증가시키는 도라지 분획물들의 생리활성물질에 대한 더욱 구체적인 연구가 기대되어 진다.
The effect of ginseng glycosides and their aglycones on the thermodynamic characteristics of membranes from dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) was investigated. Total saponins (TS) from Korean red ginseng, Panax ginseng C.A. Meyer, interacted with the Eel Phase of lipid in the Polar region and did not penetrate the deeper glycerol backbone of lipid molecule. From the all investigated components of TS (aglycons and ginsenosides), only 20-(S)-panaxadiol (PD) had an effect similar to TS. High concentration of TS penetrated in hydrophobic Cl-C8 region. The presence of cholesterol did not influence the interaction of TS with DPPC. An elimination of transition, however, took place at 10~100 $\mu\textrm{g}$/ml of TS. DPPC had a low ability to interact with cholesterol (CHL) as compared with other lecithins except ethanolamine. From our results, only TS and PD, at high concentrations (100 mol%), influenced the phase transition of mixture of DPPC:CHL.
본 연구에서는 베지클의 응용성을 확장하기 위한 기초연구로서, DPPC(dipalmitoylphosphaticylcholine)/Chol(Cholesterol)계에 불소화계면활성제($C_8F_{17}(CH_2)_2OCO-CH_2CH(SO_3Na)COO(CH_2)_2C_8F_{17}$, FS)/불소화지방산염 (($C_7F_{15}COONH_4$, FFS)을 여러 가지 비율로 변화시켜 첨가함으로써 베지클을 변형 제조하고, 그 물리화학적 성질을 비교측정하였다. 제조된 베지클계에 대한 제타-전위 측정(Zetamaster Particle Electrophoresis Analyzer) 결과, 균일한 전하의 베지클이 형성되는 것으로 확인되었고, 이는 FFS 분자가 FS와 DPPC 사이에서 보조계면활성제로 기능하여 DPPC와 FS의 각 성분이 동일 베지클내에 공존하도록 작용했기 때문으로 풀이된다. 베지클의 입자크기 결정에서는 FFS의 농도가 증가할수록 그 크기가 감소하고, 제타-전위도 음의 값으로 더욱 작아지는 것으로 나타났다. 베지클의 분산도 변화에서도 DPPC/Chol/FS/FFS계의 경우가 DPPC/Chol/FS계에 비해 안정성이 훨씬 큰 것으로 조사되었다. 베지클의 서방유출 실험에서도 막내에 포집된 MB(Methylene Blue)의 유출속도가 DPPC/Chol/FS/FFS계에서 감소된다는 결과를 얻었고, 이는 FFS의 첨가로 인해 막의 유동성이 감소되기 때문으로 풀이된다. 이 결과는 형광방출 측정의 $I_{Excimer}/I_{Monomer}$값에서도 확인되는 것으로 막의 미세점도가 FFS 첨가 베지클에서 증가되는 것으로 나타났다. 단백질로서 알부민에 대한 친화도를 비교한 결과에서는 DPPC/Chol/FS/FFS계의 친화도가 다소 낮아지는 것으로 나타났다. 이들 실험결과에 바탕하여 FFS의 첨가에 의해 DPPC/Chol/FS 베지클계는 더욱 안정하고 균일한 막의 구조를 갖는 리포솜을 형성한다는 결론을 얻었다.
To understand the effects of the fraction from Chrysanthemum coronarium L. (CC), we prepared five different types of samples, denoted here as CCMM, CCMH, CCMEA, CCMB and CCMA. We studied the effects of these samples on the phase transition of liposomal membranes by high-sensitivity differential scanning calorimetry (nano-DSC). We used dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) bilayers which make most stable liposomes among the other phosphatidylcholines. When the samples were added to the bilayers, the phase transition temperatures of DPPC liposomes incorporated with CCMH and CCMEA were decreased by 1.5 and 2^{\circ}C$, while the other three fractions showed less tendencies. The CCMH and CCMEA fractions markedly affected the thermotropic properties of DPPC liposomes, broadened and shifted the thermograms of DSC. It also significantly reduced the size of cooperative unit of the transition. In all cases, there was no change in enthalpy of transition within the concentration range of the CC fractions studied. We concluded that the incorporation of the CCMH and CCMEA into DPPC liposomes was preferentially located in the hydrophobic core of DPPC bilayers compared to the other three fractions CCMM, CCMB and CCMA. These results suggest that certain substances in CCMH and CCMEA fractions might have biologically significant effects on the fluidity of biological membrane.
본 연구는 세포막의 유동성이 막의 항상성(homeostasis)을 유지하는 가장 기본적이며 중요한 성질이라는 점을 감안하여, 용매별로 분획한 식품의 추출물을 첨가함으로써 인지질 이중층(liposome)의 물리.화학적 성질에 미치는 막 유동성(membrane fluidity)의 변화를 열시차 열량 분석법(differential scanning calorimeter, DSC)에 의해 측정하였다. 즉 식탁의 애용식품인 당근의 용매별 분획물이 인지질 liposome에 미치는 막의 유동성에 미치는 증가효과를 본 결과, DPPC liposome에 당근의 용매별 분획물을 첨가했을 때, 일반적으로 첨가하지 않은 경우보다 첨가 농도의 증가에 따라 의존적으로 초기 상전이온도가 낮아졌고 흡열고선의 모양이 넓어졌으며 그로 인하여 협동단위($\Delta$$H_{VH}$$\Delta$H㎈)값이 감소됨을 확인하였다. 이와 같은 현상은 일정농도의 당근분획물의 첨가가 DPPC liposome의 막유동성을 증가시킨 결과로 생각되어진다. 그리고 각 용매별 당근분획물의 유동성효과를 각각 비교해본 결과, DCSMH와 DCSMEA의 분획물첨가가 DCSMB와 DCSMA에 비해 DPPC liposome의 초기 상전이온도 및 협동단위를 더욱더 감소시켜 막유동성에 더 많은 영향을 주는 것을 확인하였다. 이와 같은 현상은 DCSMH와 DCSMEA의 분획물이 DCSMB와 DCSMA분획물의 경우보다 hydrophobicity가 더 크므로 인해 DPPC 인지질막 이중층의 acylchain쪽으로 더 깊숙히 용해하여 침투되므로서 생긴 현상이라 하겠다. 즉 당근분획물의 막유동성 증가작용은 세포막에서 일어나는 대사물, 약물, 이온 등의 운반 및 영양물의 교환, 흡수 등 생체막의 주요기능에 영향을 미치는 효과가 있는 것으로 사료되며, 앞으로 막유동성을 증가시키는 구체적 생리활성물질의 추구가 기대되어진다.
Liposomes have been widely employed as biomembrane-mimetic system and drug-delivery system. In these applications, the low stability of liposomes has been the most serious problem. They have relatively short half-lives and easily lysed through interactions with biological components. This study was performed to investigate the effects of godulbaegi extracts on the fludity of phospholipid liposomes. We used dipalmitoyl phosphatidylcholine(DPPC) liposomes which make most stable liposomes among the other phosphatidylcholines. The thermograms of the DPPC liposomal bilayers incorporated with the hexane extract of godulbaegi(Ixeris sonchifolia H.) were obtained, and the enthalpy changes and the sizes of cooperative unit of the transition were calculated. The incorporation of the Ixeris sonchifolia H. into the liposomal bilayers effectively reduced the transition temperature at which the transition from gel state to liquid-crystalline state occurs, broadened the thermogram peaks, and reduced the ratio of van't Hoff to calorimetric enthalpies. These results indicate indicate that the godulbaegi extracts (Ixeris sonchifolia H.) have significant effects on the fluidity of biological membrance.
Conductive Langmuir-Blodgett(LB) films have recently attracted much interest from the viewpoint of ultrathin film conductors at the molecular level. The result shows that the Maxwell-displacement-current(MDC) measuring technique is useful in the detection of phase-transition over the entire range of molecule areas. At the liquid-solid phase transition, a striking feature in the present current measurement was observed; the I-A isotherm for a DPPC monolayer has sharp bend. Dynamic behavior of monolayers in the presence of an external field was also investigated using the current-measuring technique. Dynamic behavier of DPPC monolayer was measured by displacement current when the molecules are stimulated by pressure velocity. As result, it is known that current is generated of higher current pe마 as compression velocity become faster. Also, in order to clarify the reorganization of the lipid monolayers, it is instructive to plot the relationship between I and 1/$A^2$.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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