Degradation of deoxyribonucleic acid(DNA) and ribonucleic acid(RNA) by cell-free extract of mixed rumen protozoa of buffalo rumen was investigated. DNA was observed to be degraded rapidly during an initial incubation period of 2 hr with simultaneous appearance of degradation products. RNA on the other hand recorded a rapid degradation during an initial incubation period of 1 hr. RNA degradation products appeared upto an incubation period of 2 hr. DNA was observed to degrade into oligo- and mononucleotides. pyrimidine nucleosides, purine nucleoside adenosine and bases xanthine, hypoxanthine and thymine. Degradation products of RNA comprised of pyrimidine nucleosides, purine nucleoside, adenosine and bases xanthine, hypoxanthine and uracil besides oligo- and mononucleotides.
Some antioxidant phenolic compounds exhibit prooxidant activity mainly due to their abilities to reduce $Fe^{3+}\; to\; Fe^{2+}.$ Reducing ability and prooxidant activity of maltol, an antioxidant component of Korean red ginseng, were compared with those of pyrogallol. Maltol at 2 mM did not appreciably reduce$ Fe^{3+}\; to\; Fe^{2+}$ and also failed to reduce nitroblue tetrazolium. Stimulation of hydroxyl radical mediated-deoxyribose degradation by pyrogallol was maximal at 60 .mu.M. Maltol stimulated the deoxyribose degradation to a much less extent, and a similar stimulatory effect was observed at a concentration of more than 100-fold higher than that of pyrogallol. The stimulatory effect of maltol reached a plateau over 1 mM, suggesting the removal of hydroxyl radicals by excess maltol. In bleomycin-$Fe^{3+}$-DNA assay, maltol at 2 mM produced a 2.5-fold increase of the iron-bleomycin-dependent DNA degradation over the basal value, whereas pyrogallol at 10 .mu.M accelerated DNA degradation by ca. 10-fold. Furthermore, maltol inhibited $Fe^{2+}$-stimulated DNA degradation by bleomycin. These results strongly suggested that maltol is an antioxidant with little prooxidant activity.
Kim, Hyojeong;Cho, Yoonjung;Kim, Jeongyong;Lee, Ja Hyun;Kim, Hyo Sook;Kim, Eungsoo
대한의생명과학회지
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제26권4호
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pp.275-287
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2020
Since its introduction in the forensic field, quantitative PCR (qPCR) has played an essential role in DNA analysis. Quality of DNA should be evaluated before short tandem repeat (STR) profiling to obtain reliable results and reduce unnecessary costs. To this end, various human DNA quantification kits have been developed. Among these kits, the PowerQunat® System was designed not only to determine the total amount of human DNA and human male DNA from a forensic evidence item, but also to offer data about degradation of DNA samples. However, a crucial limitation of the PowerQunat® System is its high cost. Therefore, to minimize the cost of DNA quantification, we evaluated kit performance using a reduced volume of reagents (1/2-volume) using DNA samples of varying types and concentrations. Our results demonstrated that the low-volume method has almost comparable performance to the manufacturer's method for human DNA quantification, human male DNA quantification, and DNA degradation index. Furthermore, using a reduced volume of regents, it is possible to run 2 times more reactions per kit. We expect the proposed low-volume method to cut costs in half for laboratories dealing with large numbers of DNA samples.
한국고분자학회 2006년도 IUPAC International Symposium on Advanced Polymers for Emerging Technologies
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pp.206-206
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2006
Polymer induced turbulent drag reduction achieved by adding minute amounts of high molecular weight DNAs in aqueous solution was investigated using a rotating disk apparatus. The DNAs in this study include ${\lambda}-DNA$ and calf-thymus (CT) DNA. By putting emphasis on effect of CT-DNA concentration, its DR characteristics were compared with that of ${\lambda}-DNA$ possessing monodisperse molecular weight characteristics based on both DR efficiency and a mechanical degradation under turbulence. The DNA chains having much higher molecular size than that of ${\lambda}-DNA$ are observed to be more susceptible to mechanical degradation in a turbulent flow. This result was verified via electrophoresis. Furthermore, the coil to globule phase transition of DNA was also investigated under a turbulent flow.
This study was investigated to test whether the zygote recognized the topoisomerase II beta (TOP2B) mediated DNA fragmentation in epididymal spermatozoa or the nuclease degradation in vas deferens spermatozoa by testing for the presence of gammaH2AX (γH2AX). The γH2AX is phosphorylation of histone protein H2AX on serine 139 occurs at sites flanking DNA double-stranded breaks (DSBs). The presence of γH2AX in the pronuclei of mouse zygotes which were injected with DNA broke epididymal spermatozoa was tested by immunohistochemistry at 5 and 9 h post fertilization, respectively. Paternal pronuclei that arose from epididymal spermatozoa treated with divalent cations did not stain for γH2AX at 5 h. On the other hand, in embryos injected with vas deferences spermatozoa that had been treated with divalent cations, γH2AX was only present in paternal pronuclei, and not the maternal pronuclei at 5 h. Interestingly, both pronuclei stained positively for γH2AX for all treatments and controls at 9 h after sperm injection. In conclusion, the embryos recognize DNA that is damaged by nuclease, but not by TOP2B because H2AX in phosphorylated in paternal pronuclei resulting from spermatozoa treated with fragmented DNA from vas deferens spermatozoa treated with divalent cations, but not from epididymal spermatozoa treated the same way.
A new aniline-utilizing microorganism, strain HY1 obtained from an orchard soil, was characterized by using the BIOLOG system, an analysis of the total cellular fatty acids, and a 16S rDNA sequence. Strain HY1 was identified as a Burkholderia species, and was designated Burkholderia sp. HY1. GC and HPLC analyses revealed that Burkholderia sp. HY1 was able to degrade aniline to produce catechol, which was subsequently converted to cis,cis-muconic acid through an ortho-ring fission pathway under aerobic conditions. Strain HY1 exhibited a drastic reduction in the rate of aniline degradation when glucose was added to the aniline media. However, the addition of peptone or nitrate to the aniline media dramatically accelerated the rate of aniline degradation. A fatty acid analysis showed that strain HY1 was able to produce lipids 16:0 2OH, and 11 methyl 18:1 ${\omega}7c$ approximately 3.7-, 2.2-, and 6-fold more, respectively, when grown on aniline media than when grown on TSA. An analysison the alignment of a 1,435 bp fragment. A phylogenetic analysis of the 16S rDNA sequence based on a 1,420 bp multi-alignment sowed of the 16s rDNA sequence revealed that strain HY1 was very closely related to Burkholderia graminis with 95% similarity based that strain HY1 was placed among three major clonal types of $\beta$-Proteobacteria, including Burkholderia graminis, Burkholderia phenazinium, and Burkholderia glathei. The sequence GAT(C or G)${\b{G}}$, which is highly conserved in several locations in the 16S rDNA gene among the major clonal type strains of $\beta$-Proteobacteria, was frequently replaced with GAT(C or G)${\b{A}}$ in the 16S rDNA sequence from strain HY1.
Sphingomonas chungbukensis DJ77에서 난분해성 물질 분해 유전자가 chromosome 또는 plasmid 존재하는지를 규명하였다. 야생주 DJ77의 plasmid를 mitomycin C를 이용하여 curing 시킨 후, 각각 phenanthrene과 biphenyl이 단일 탄소원으로 첨가된 최소배지에서 배양한 결과 야생주는 성장을 하지만 plasmid가 제거된 DJ77은 성장하지 않았다. 각각의 plasmid DNA를 분리한 수 이미 클로닝된 방향족 탄화수소 분해에 관련된 DNA를 probe로 하여 Southern hybridization을 한 결과 야생주에서만 positive signal을 발견할 수 있었다.
Kim, Chang Jin;Kim, Tae Hoon;Lee, Eun-Woo;Lee, Kyung-Bon
대한의생명과학회지
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제23권4호
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pp.372-379
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2017
This study was investigated to test whether paternal DNA that was destined for degradation was properly licensed by testing for the presence of mini-chromosome maintenance protein (MCM) 7 and origin recognition complex (ORC) 2 in the paternal pronuclei. ORC2 is one of the first licensing protein to come on and MCM7 is one of the last licensing protein to come on. Zygotes were prepared by injection of control and treated sperm injection (ICSI). To control for DNA breakage, epididymal spermatozoa were treated with DNase I to fragment the DNA, then injected into oocytes. The presence of MCM7 and ORC2 in the pronuclei of mouse zygotes was tested by immunohistochemistry, just before the onset of DNA synthesis, at 5 h after fertilization, and after DNA synthesis began, at 9 h post fertilization. We found that in all cases, both MCM7 and ORC2 were present in both pronuclei at 5 h after sperm injection, just before DNA synthesis began. This indicates that no matter how extensive the DNA damage, recruitment of licensing proteins to the origins of replication was not inhibited. Sperm DNA fragmentation does not prevent licensing of DNA replication origins. Furthermore, the embryo recognizes DNA that is damaged by nucleases. Our data indicate that the one-cell embryo does harbor a mechanism to prevent the replication of severely damaged DNA from spermatozoa, even though the embryos do not undergo classical apoptosis.
A DNA barcode based on 648 bp of cytochrome c oxidase I (COI) gene aims to build species-specific libraries for animal groups. However, it is hard to recover full-length (648 bp) barcode gene from environmental fecal samples due to DNA degradation. In this study, we designed a new primer set (K_Bird), which amplifies a 226 bp fragment targeted an inner position of full-length COI barcode based on 102 species of Korean birds to improve amplification success, and we attempted to identify bird species from 39 avian fecal samples collected during 4 months from Jinan, South Korea. Simultaneously, we conducted a dietary analysis using a universal DNA mini-barcode (Uni_Minibar) from same fecal samples. In silico analysis on newly designed mini-barcode represented that genetic distances were 0.5% in species and 9.1% in genera. Intraspecific variations of 149 species out of 174 species (86%) between Korea and North America were within the threshold (5.3% threshold in this study). From environmental fecal samples collected in Jinan, we identified seven avian species, which have high similarity (99-100%) with registered COI sequences in GenBank. Eight kinds of prey species, such as moth, spider, fly, and dragonfly, were identified in dietary analysis. We suppose that our strategy applying mini-barcode for environmental fecal samples, might be a useful and convenient tool for species identification and dietary analysis for birds.
Growth inhibition potency of the anthraquinones, anthraquinone-1,5-disulfonic acid and carminic acid, for Sarcoma 180 and L1210 leukemia cells in vivo and in vitro, was induced by the divalent transition metal ion, $Cu^{2+}$. On the other hand spectroscopic titration data show that the anthraquinone drugs form $Cu2^+$ chelate complexes (carminic acid : $Cu^{2+}$ = 1 : 6; anthraquinone-1,5-disulfonic acid : $Cu^{2+}$ = 1 : 3). Furthermore the $Cu^{2+}$-drug complexes associate with DNA to form the $Cu^{2+}$-anthraquinone-DNA ternary complexes. The formation of the complexes was further supported by the $H_2O_2-dependent$ DNA degradation, which can be inhibited by ethidium bromide, caused by the $Cu^{2+}$-drug complexes. It is likely that the $Cu^{2+}$-mediated cytotoxicity of the anthraquinone drugs is related with the $Cu^{2+}-mediated$ binding of the anthraquinone drugs to DNA and DNA degradation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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