• 제목/요약/키워드: DEAE-cellulose chromatography

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Bacillus sp. HB-5균주가 생산하는 단백질 분해 효소의 분리. 정제 및 화장품에의 응용 (Purification and Identification of pretense from Bacillus sp. HB-5 and its application of cosmetic product)

  • 이범천;윤은정;이동환;표형배
    • 대한화장품학회지
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    • 제26권1호
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    • pp.107-124
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    • 2000
  • A bacterial strain No. HB-5, which was capable of producing a pretense in the culture conditions, was isolated from the soil . The pretense was purified from cultural filtrate of Bacillus sp. HB-5 by membrane ultrafiltration and DEAE- cellulose chromatography, gel filtration on Sephadex G-100. The molecular weight was estimated to be 60k4a. The optimal pH and temperature for the activity of the purified pretense pH were 11 and 5$0^{\circ}C$ , respectively. The enzyme was stable within a pH range 8-12 and up to 6$0^{\circ}C$ . The enzyme activity was highly inhibited by PMSF at 1mM. The proteolytic actions of pretense and papain on human epidermis keratins which are major protein impurities on the skin, were compared. The bacterial pretense degraded more effectively than papain. Product containing 2% protease exhibited 21% increase on the skin coloration index. These results suggest that cosmetic product containing pretense produced by Bacillus sp. HB-5 could remove the adherent keratin layer and then make a softer skin.

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버섯균사체 배양물로부터 면역증진 기능성 소재 개발

  • 김정옥
    • 식품저장과 가공산업
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    • 제6권2호
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    • pp.11-13
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    • 2007
  • This study relates to low and medium molecular weight isoflavone-${\beta}$-D-glucan produced by submerged liquid culture of Agaricus blazei, a method of producing the isoflavone-B-D-glucan using autolysis enzyme of Agaricus blazei mycelia, and use of the isoflavone-B-D-glucan for anti-cancer and immunoenhancing effect. In acordance with one aspect of the present study, it deals with a method of producing isoflavone-${\beta}$-D-glucan, which comprises the followings; 1) culturing and separating mushroom mycelia, 2) producing low-medium molecular weight isoflavone-${\beta}$-D-glucan from high molecular weight one. The cytotoxicity on human cnacer cell line (Caco-2, MCF-7), the expression of Cyclin D, Bcl-2, Bax protein, p21 protein, p53 protein in MCF-7 cells assessed by SDS-PAGE and immunoblotting, and other immuno related factor such as TNF-a and IL-1B activities were examined. Structural identification of isoflavone-${\beta}$-D-glucan which shoed cytotoxicity against cancer cell and immunoenhancing effects was carried by separation with DEAE-cellulose column chromatography, TLC, HPLC, IR, NMR, Clinical test for the cancer patients (n=119) for 6 month was carried out, and immunoenhancing factors(NK cell number, ratio of T4/T8) were checked. We concluded the identified isoflavone-${\beta}$-D-glucan has immuno enhancing effects and could be useful for cancer chemoprevention.

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멍게껍질로부터 분리제정한 적색 Carotenoprotein의 특성 1. Carotenoprotein 의 정제 및 특성 (Purification and Characterization of the Red Carotenoprotein from the Skin of Ascidian, Halocynthia roretzi 1. Purification and Characterization of the Caritenopritein)

  • 강옥주;서명자;이안종;김세권
    • 생명과학회지
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    • 제5권4호
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    • pp.170-180
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    • 1995
  • A carotennnoprotein from the skin of Ascidian(Halocynthia roretzi) was extracted by Triton X-100 and purified by ammonium sulfate fraction, SephadexG-200 charomatography and DEAE-cellulose ion exchange chromatography. The carotenoprotein was redwith broad $\lambda$$_{max}$ between 495, 467 and 318nm. The red carotenoprotein had an approximate molecular weight of 326KDa(gel filtration). SDS-PAGE indicated the presence of two polypeptodes of 84.1KDa and 74.4KDa, with different mobility in polyacrylamide gel electrophoresis. In the presence of denaturing agents such as organic solvent aand extreme pH, the red complex readily disociates to liberate the yellow carotenoid($\lambda$$_{max}$ 452nm) and a colourless apoprotein. The amino acid composition of carotenoprotein were mainly threonine(15.2%), aspartic acid(12.2%), glutamic acid(11.9%) and serine(9.6%), while proline was not found. The carotenoprotein consisted of lipids as structure units. Its major fatty acids composion were C$_{18:1}$, C$_{16:1}$, and C$_{16:0}$. The monounsaturated fatty acids(41.5%) contained abundant content compared to other fatty aacids(polyunsaturated fatty acids 37.4%, saturated fatty acids 20.6%).

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Kluyveromyces marxianus 가 생산하는 Intracellular 및 Extracellular Inulase 의 정제 및 특성비교 (Purification and Characterization of Intracellular and Extracellular Inulase from Kluyveromyces marxianus)

  • 김수일;문항식
    • Applied Biological Chemistry
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    • 제30권2호
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    • pp.169-178
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    • 1987
  • Kluyveromyces marxianus로 부터 inulase를 생산하고 정제하며 intra 및 extracellular inulase의 성질을 조사하였다. 본 균주는 stationary phase인 24시간째 intra 및 extracelullar enzyme의 생산이 최고에 달했으며 유기 질소원으로 YNB를 사용하고 배양 중 pH를 조절해 줌으로써 효소 생산을 향상시킬 수 있었다. 조효소는 DEAE-cellulose에 의해 intra 및 extracellular inulase 모두 2개의 fraction으로 분리되었고 각 fraction의 전기영동 양상은 비슷하여 주 band를 비롯 모두 3개의 glycoprotein band가 관찰되었으며 이중 주 band만 inulase 및 invertase activity를 보유하고 있었다. 정제 효소의 inulase 및 invertase의 최적 pH는 각각 5.0과 4.5였고 intra가 extracellular enzyme 에 비해 다소 넓은 범위의 pH에서 높은 활성을 나타내었다. 모든 fraction의 최적 온도는 inulase가 $40^{\circ}C$, invertase가 $50^{\circ}C$였으며 intracellular enzyme이 더 넓은 범위의 온도에서 안정하였고 열에 대한 안정성도 intracellular inulase가 extracellular inulase보다 높게 나타났다. Km value는 intra가 $16{\sim}19mM$, extracellular inulase가 $9{\sim}11mM$로써 extracellular inulase가 inulin에 대한 친화력이 더 높았으나 모두 exo-type의 inulase로 판명되었다.

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Bacillus stearothermophilus KJ16이 생산하는 Cyclodextrinase의 정제와 효소특성 (Purification and Characterization of Cyclodextrinase from Bacillus stearothermophilus KJ 16)

  • 권현주;유동주;김병우
    • 생명과학회지
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    • 제8권5호
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    • pp.497-503
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    • 1998
  • GTase와 CDase를 함께 분비$\cdot$생산하는 B. stearother-mophilus KJl6 균주의 CDase를 ammonium sulfate 침전, DBAE-cellulose, Sephadex G-100 column chromatogra-phy, 및 FPLC로 수율 7%, 비활성 12.4 units/mg, 정제도 87.6배로 정제된 CDase를 얻었으며 SDS-PAGE 상 단일 band를 확인하였다. 정제된 CDase의 분자량은 약 68,000 dalton 이었고 활성 최적 pH와 온도는 6.0와 55$^{\circ}C$였다. pH 안정성은 5.5~8.5의 범위에서 비교적 안정하였으며, 온도 안정성은 5$0^{\circ}C$에서 2시간까지는 안정하였고, 7$0^{\circ}C$에서 1시간 전처리하여도 80% 이상의 잔존활성을 나타내었다. 효소 활성은 $Cu^{+2}$$Hg^{+2}$와 같은 금속이온과 p-chlorome-rcuribenzoate, N-bromosuccinimide, mercaptoethanol, dithiothreitol에 의해서 효소활성이 강하게 저해되었다. 기질에 대한 반응 특이성은 $\gamma$ -CD를 가장 잘 분해하였으며, 그 외에 soluble starch나 amylose, amylopectin 등의 기질도 잘 분해하나 이들의 분해속도는 $\gamma$-CD에 비해서는 늦었다. 이들 기질의 최종 분해산물은 maltose였으며, maltose는 거의 분해되지 않았다.

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한국산 고등 균류의 성분 연구(제67보) -영지버섯 자실체의 항암성분- (Studies on Constituents of Higher Fungi of Korea (LXVII) -Antitumor Components of the Basidiocarp of Ganoderma lucidum-)

  • 현진원;최응칠;김병각
    • 한국균학회지
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    • 18권2호
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    • pp.58-69
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    • 1990
  • 담자균류인 영지 Ganoderma lucidum의 자실체를 열수추출한 후 얻은 단백 다당체를 DEAE cellulose 이온교환수지와 Sepharose CL-4B 젤 여과법을 이용하여 분리 정제하였다. 정제한 분획들을 각각 CR, IN, IA, GL과 GH로 명명하였다. 각각의 성분을 20mg/kg/day 용량으로 투여하였을 때 sarcoma 180 고형암에 대하여 Fr. GL이 81%의 가장 높은 종양 억제을을 나타냈으며 그 분자량은 47,000 dalton이었다. 그 구성성분은 82% 다당류, 8% 단백질 및 0.9% hexosamine 이었다. 그 다당류를 구성하는 단당류를 분석한 결과 glucose, galactose, mannose, fucose순으로 함유되어 있었다. 항암작용의 기전을 밝히기 위하여 마우스의 면역에 미치는 항암 성분의 영향을 연구한 결과 활성화된 마크로파지에서 분비되는 superoxide anion 양을 1.6배로, 그리고 hemolytic plaque assay에서의 용혈반 형성 세포수를 6배로 각각 증가시켰다. 이 결과로 항암작용은 고형암에 직접적으로 세포독성을 나타내는 것이 아니라, 면역세포를 활성화 혹은 강화시키는 작용임을 알 수 있다.

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Ganoderma lucidum IY 009로 부터 분리된 항암성 다당류의 정제 및 구조분석 (Purification and Structural Analysis of Antitumor Polysaccharides Obtained from Ganoderma lucidum IY 009)

  • 이권행;정훈;이준우;한만덕;최경숙;오두환
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제22권2호
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    • pp.190-196
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    • 1994
  • Alkali soluble(AS) fraction, revealed the highest antitumor activity of the alkali extracted fractions of G. lucidum IY 009, was loaded on DEAE cellulose(OH$^{-}$ form) column. AS-1, AS-2, AS-3, AS-4 and AS-5 were obtained by stepwise elution with H$_{2}$O, 0.1 M NaHCO$_{3}$, 0.3 M NaHCO$_{3}$, 0.5 M NaHCO$_{3}$ and 0.5 N NaOH respectively, and their antitumor activities(I.R. %) against the sarcoma 180 were 97.5%, 68.0%, 73.0%, 81.0% and 66.0% respectively. AS-1 observed highest antitumor activity was appeared as single peak on the Sepharose CL-4B column chromatography, and their molecular weight was about 580,000 dalton. The carbohydrate content of AS-1 was 98.9%, their monosaccharide consisted of 67.5% of mannose, 22.5% of xylose, 5.8% of glucose, 1.8% of galactose and 2.0% of ribose. AS-1 was assumed $\alpha $linkaged xylomannan having infrared absorption at 864.3 cm$^{-1}$. The main alditol acetates of AS-1 were identified as 1,5-Di-O-acetyl1-2,3,4-Tri-O-methylxylitol, 1,4,5-Tro-O-acety1-2,3,6-Tri-O-methylmannitol and 1,3,4,5-Tetra-O-acety1-2,6-Di-O-methylmannitol by methylation analysis, and their molar ratio was 1 : 2 : 1. The core portion of AS-1 might be $\alpha $-(1$\longrightarrow $ 4)mannopyranosyl unit branched with side chain, C1 of xylopyranosyl residue linked to C3 of every 3 mannopyranosyl units, and the degree of polymerization of structural unit in AS-1 was about 835.

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알긴산 분해균 Bacillus licheniformis AL-577가 생산하는 균체외 효소의 정제 및 특성 (Purification and Characterization of the Extracellular Alginase Produced by Bacillus licheniformis AL-577)

  • 어명희;주동식;조순영;민태선
    • 한국식품영양과학회지
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    • 제35권2호
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    • pp.231-237
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    • 2006
  • 알긴산을 선택적으로 분해하는 Bacillus licheniformis AL-577 균주가 생산하는 균체 외 효소를 정제하고 특성을 밝혔다. CM-Cellulose, DEAE-Sepharose 및 Gel 크로마토 그래프 등의 순서대로 정제하여 정제도가 약 98배 정도인 효소를 얻었다. 정제효소의 활성 최적 pH 및 온도는 5.0 및 $35^{\circ}C$이었고, pH 5.5이하와 pH 9.5이상의 반응조건에서는 불안정하였으며, $20^{\circ}C$이상의 온도에서는 불활성화가 쉽게 일어나는 효소였다. 얻어진 효소를 SDS-PAGE로 분자량을 측정한 결과 25,500 Da으로 추정되었다. NaCl 0.2 M 농도에서 최대의 활성을 나타내었고, 무첨가시에도 활성은 약간 나타내었다. $Cu^{2+},\;Fe^{2+},\;Mg^{2+},\;Zn^{2+}$ 등과 같은 2가 금속이 온에 의해서는 활성이 현저히 억제되었고, $K^+,\;Li^+$ 이온에 의해서 활성이 촉진됨을 알 수 있었다. 화학약품인 dithiothreitol 와 O-phenanthroline의 첨가로 인하여 약간의 활성 증가를 가져 왔으며 반면 EDTA, L-cysteine는 현저하게 감소하였다. 이 효소는 알긴산에만 특이적으로 작용함으로써 본 효소는 alginase 또는 alginate lyase인 것으로 판단되었다.

표고버섯 균사체로부터 항암 단백다당체의 추출 및 정제 (Extraction and Purification of Antitumor Protein-bound Polysaccharides from Mycelia of Lentinus edodes)

  • 박기문;이병우
    • 한국식품과학회지
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    • 제30권5호
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    • pp.1236-1242
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    • 1998
  • 한국산 표고버섯 산련 1호를 C/N비가 13.1인 버섯 완전액체배지에서 배양하여 균사체를 증식시킨 후 생리활성을 보이는 단백다당체를 추출하였다. 표고버섯 균사체 액체배양시 생성되는 단백다당체는 균사체 세포벽에 약 80%가 존재하고, 약 20%정도는 세포밖으로 분비하는 것으로 나타나 단백다당체의 추출은 균사체가 함유된 배양액 전체를 이용하여 추출하는 것이 높은 수율을 얻을 수 있었다. 그리고 균사체로부터 단백다당체의 추출방법으로 열수추출 및 glass bead mill로 세포벽을 파쇄한 후 열수추출, cellulase 처리 후 열수추출을 비교한 결과 물리적으로 세포벽을 파쇄한 후 60분간 열수추출하는 것이 배양액 100 mL당 약 930 mg의 조단백다당체가 추출되어 수율이 가장 높았다. 추출한 조단백다당체를 사용하여 protease 처리, 그리고 DEAE-cellulose 및 Sephadex G-100 column chromatography를 통하여 단백다당체를 정제한 후 단계별 시료에 대한 mouse leukemic cell인 $P_{388}$의 증식억제는 53.7, 62.2, 93.7, 97.4%로 정제도가 높아짐에 따라 증가하는 것으로 나타났다. Sephadex G-100 column으로 처리한 정제 단백다당체를 TLC/FID로 분석한 결과 단일 peak로 나타나 순수물질임을 확인하였다. 그리고 단백다당체의 성분을 분석한 결과 다당함량은 46.1%로 구성단당류는 glucose 및 galactose, xylose, mannose로 구성되어 있었고, 단백질은 약 7.3%로 주로 proline 및 glycine의 함량이 높았으며 methionine 및 leucine은 거의 없는 것으로 밝혀졌다. 그외에 무기질로서 Na, K, Zn, Ca 등이 존재하는 것으로 나타났다.

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Phellinus igniarius로부터 분리한 단백다당류의 분리 및 특성 (Characteristics and purification of proteoglycan from Phellinus igniarius)

  • 김선희;정인창;권용일;김소연;이종숙;이항우;이재성
    • Applied Biological Chemistry
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    • 제43권1호
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    • pp.57-62
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    • 2000
  • Phellinus igniarius의 배양방법별 균사체 및 단백다당류 생산수율비교 실험에서는 균사체내 다당류의 경우 모두 진탕배양이 효과적이었으나 균사체외 다당류의 경우 다당류 생산에서는 정치배양이 효과적이었다. 다당류의 정제는 조단백다당류를 이용하여 DEAE-cellulose column에 의한 1차 정제를 행하였고, 최종으로 Sepharose 2B를 이용한 2차 정제를 실시하여 최종적으로 균사체내 단백다당류의 탈이온수 분획물(PIIPDG)과 알칼리분획물(PIIPAG), 균사체외 단백다당류의 탈이온수 분획물(PIEPDG) 알칼리 분획물(PIEPAG)을 얻었다. 이때의 정제 수율은 1차 정제에서 40%의 회수율을 나타내었으며 2차 정제에서는 $38{\sim}61%$의 높은 회수율을 보였다. PIEPDG는 총당 79.0%, 총단백질 7.2%, PIEPAG는 총당 56.7%, 총단백질 40.8%, PIIPDG는 총당 64.8%, 총단백질 17.4%, PIIPAG는 총당 56.9%, 총단백질 41.5%으로 측정되었다. 각 단백다당류의 분자량은 PIEPDG 166KDa에서 PIEPAG 565KDa까지 모두 10만이 넘는 거대분자로 나타났다. 각 분획물의 단당류 조성을 볼때, PIEPDG는 glucose, PIIPDG와 PIIPAG는 glucose, inositol, PIEPAG는 glucose, rfructose, inositol이 검출되었다.

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