• 생명과학회지
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• 제12권2호
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• pp.151-157
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• 2002

한방재료의 하나인 택사(Alismatis Rhizoma, AR)로부터 단백성 trypsin inhibitor(TI)를 분리, 정제하여 특성을 조사하였다. 정제과정은 0-80.% 포화 황산암모늄을 이용한 염석법, DEAE-cellulose ion exchange chromatography, Sep-hadex G-150 chromatography 등을 이용하였다. 정제된 ARTI의 분자량을 gel filtration과 SDS-PAGE 한 결과 모두 약 23,000 Da으로 나타나 monomer로 되어 있는 것으로 나타났다. 온도안정성에 있어 0-6$0^{\circ}C$에서는 안정하였으나 그 이상의 온도에서는 약 35%가지 안정성이 떨어졌다. ARTI와 상품화된 soybean kunitz inhibitor의 저해능을 비교해 본 결과 ARTI 및 soybean inhibitor 각각의 농도가 0.071 $\mu$M, 1.7 $\mu$M일 때 0.025 g/$m\ell$ trypsin활성을 50% 정도 저해하는 것으로 나타났다. ARTI의 trypsin의 가수분해반응에 대한 저해형태는 비경쟁적 저해형인 것으로 나타났으며 km값은 0.81 $\mu$M이었다.

• 한국식품과학회지
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• 제25권5호
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• pp.565-570
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• 1993

가공 과정 중 갈변에 관여하는 돼지감자의 peroxidase가 ammonium sulfate, DEAE-cellulose column, Sephacryl S-200 column chromatography에 의하여 36.65배로 정제되었다. 이 효소는 p-phenylenediamine을 기질로 사용하였을 때 pH5.0가 활성 최적 pH이었으며 pH $5.0{\sim}6.0$의 범위에서 비교적 안정하였다. 열 불활성화 곡선은 1차 곡선에서 벗어났고 60, 70, $80^{\circ}C$에서의 D값은 각각 86, 45, 33초이었으며 활성화에너지는 4,111 J/mole이었다. 이 효소의 기질특이성은 amine류 중에서 p-phenylenediamine과 가장 친화력이 좋았고 potassium cyanate, sodium diethyldithiocarbamate, L-ascorbic acid, sodium hydrosulfite, L-cysteine에 의해 활성이 완전히 억제되었으며 $Ca^{2+},\;Cu^{2+}$에 의해서는 활성이 촉진되었다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제40권5호
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• pp.388-394
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• 1997

곤충 병원성 곰팡이 Beauveria bassiana ATC7159의 배양여액으로부터 균체외 protease (basiasin I)를 Ammonium sulfate 침전, DEAE-Sephadex A-50, CM-cellulose 및 Hydroxyapatite column chromatography를 수행하여 완전히 정제하였다. 이 과정으로 41배 정제되었으며 정제수율은 13.6%였다. 정제된 bassiasin I의 분자량은 SDS-PAGE 상에서 약 32,000 Da이며 pI값은 9.5로 확인되었다. $NH_2$ 말단 아미노산 서열은 다른 곤충 병원성 곰팡이가 생산하는 pretense들과 높은 상동성을 보였다. Protease 활성의 최적 pH는 10.5 부근이며, pH 5.0-11.0범위에서 안정하였다. 최대 활성온도는 $60-65^{\circ}C$이며, $60^{\circ}C$에서 120분후에 약 20%의 잔존활성을 보였다. 이 pretense는 phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) 및 diisopropyl fluorophosphate (DFP)에 의해 저해된다.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제15권9호
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• pp.719-724
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• 1994

Major cellulase components, such as three endoglucanases (endoglucanases I, II, and III) and one exoglucanase (exoglucanase II), were isolated from a commercial cellulase (Meicelase TP 60) derived from the fungus Trichoderma viride by a series of chromatography procedures. These procedures were the gel filtration on Bio-Gel, the anion exchange on DEAE-Bio-Gel A, the cation exchange on SP-Sephadex C50, and the affinity chromatography on Avicel cellulose. The average molecular weights determined by SDS-polyacrylamide gel electrophoretic analysis were 51,000, 59,000, 41,000 and 62,000 Da for endoglucanases I, II and III and exoglucanase II, respectively. The extinction coefficients, ${\varepsilon}^{1%}$ 280 nm, of these enzymes were 11.7, 3.3, 7.2 and 11.3, respectively. Among them, the endoglucanase II showed the very low value of the coefficient compared with the others. On the other hand, it was found that endoglucanase II and III were of more random hydrolytic mode on carboxymethylcellulose as compared with those of endoglucanase I and exoglucanase II. Especially, endoglucanase I showed less random action than that of exoglucanase II. In the hydrolysis of insoluble cellulose by the enzyme components, cellobiose was the major product, but glucose was the major product by endoglucanase III.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1994년도 춘계학술대회 and 제3회 신약개발 연구발표회
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• pp.257-257
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• 1994

생쥐의 장내세균으로 부터 황산전이 반응을 촉매하는 효소인 sulfotransferase를 생산하는 균주를 분리하였으며 동정결과 Haemophilus속 균주로 확인되어 Haemophilus K-12라 명명하였다. 균의 성장과 효소활성과의 관계를 보면 균은 10시간에서 완전히 성장하였으며 효소활성도 이와 비례하였다. Haemophilus K-12의 배지조성에 따른 sulfotransferase의 생산성을 Brain Heart Infusion 배지에서의 생산성과 비교해보면 탄소원으로는 sucrose가 0.2%농도에서 584%로 가장 좋았으며 질소원으로는 yeast extract가 266%로 가장 좋았다. 공여체로 PNS를 최종농도 1mM로 하여 배지에 첨가하였을때 212%로 가장 높은 효소증가를 보였다. 2가금속이온에 의한 효소증가는 현저하지 않았으며 $Mn^{2+}$이 107%로 가장 높았고$Zn^{2+}$와 EDTA에 의해서는 저해를 받았다. 이상의 결과를 종합하여 균배양을 위한 이상적인 배지조성을 sucrose 0.2%, yeast extract 1%, $Na_2$HPO$_4$ 0.25%, NaCl 0.5%로 결정하였다. 결정된 최적배지에 균을 10L 배양하여 초음파 처리, 원심분리한 것을 70 % ammonium sulfate fractionation, DEAE-cellulose column chromatography를 2회, Hydroxyapatite column chromatography, chromatdfocusing column chromatography, Silica PAE column chromatography, Sephacryl S-300 superfine column chromatography를 행한결과 specific activity가 6.76 umoie/min/mg protein인 효소액을 얻었으며 homogeneous enzyme였다. 이렇게 해서 얻은 효소를 이용하여 수용체 기질 특이성을 측정한 결과 1-naphthol이 phenol을 100%로 하였을 때 233%로 가장 좋았으며 Eubacterium A-44 sulfotransferase의 좋은 기질이었던 p-acetaminophenol, tyramine, 9-phenanthrol은 좋은 기질이 되지 못했다. 이상의 결과로 미루어 보아Haemophilus K-12 sulfotransferase는 지금까지 보고된 bacterial sulfotrasferase와는 다른 효소로 사려되며 효소반응기전의 규명이 이루어지면 산업적 응용이 가능할것으로 사료된다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제5권3호
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• pp.141-151
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• 1977

Nocardia sp의 tellurite 및 tellurate 환원효소의 세포내 분포 및 이의 정제법에 대한 실험과 효소 화학약 성질에 대한 연구를 요약하면 다음과 같다. Nocardia sp의 tellurite 및 tellurate 환원효소는 세포질중에 존재하며 T.T.C.의 환원부위와는 세포내에서의 존재양식이 서로 다르다. 세포용성 성분을 균체로부터 조제하여 이것을 재료로 해서 유안여석법, DEAE-Cellulose column chromatography등을 병용함에 따라, tellurite및 tellurate 환원순서의 정제가 가능하다. 이상의 정제효소를 사용하여 이의 낙소 화학적 성질에 대하여 검토한 결과, 수소공여체로는 NADH, NADPH 환원형(methylene blue)의 어느 것이든 작용한다는 것을 알았지마는 아마 생리적 수소공여체는 NADH, NADPH의 양자이든가 또는 이들 양자중에서 어느 하나일 것이다. 한편 이들 수소공여체에 대한 수소수용기는 본 효소에 있어서는 tellurite가 균체의 기질이 되지마는 tellurite 및 tellurate와 화학구조가 유사한 selenite, selenate를 환원하여 각각의 기질화합물중에 함유되어 있는 금속을 석출한다는 것도 알게 되었다.

• 생명과학회지
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• 제8권3호
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• pp.326-332
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• 1998

Cyclodextrin glucanotransferase from B. stearothermophilus KJ16 that can produce both cyclodextrin glucanotransferase and cyclodextrinase was purified by ammonium sulfate precipitation, DEAE-cellulose chromatography, Sephadex G-100 chromatography, and FPLC. The molecular weight of the purifice enzyme was about 65,000 dalton by SDS-PAGE. The optimal pH and temperature were 6.0 and $60^{\circ}C$, respectively. The enzyme was stable at $50^{\circ}C$ for 1 hr and in the pH range of 5.5 and 8.5. Mercaptoethanol and dithiothreitol inhibited the enzyme activity strongly. The enzyme produced 60% cyclodextrin(CD) from 5% soluble starch with the $^{\alpha}$, $^{\beta}$, $^{\gamma}$-CD ratio of 42:46:12. Amylopectin was the most suitable substrate with 67% conversion to CD.

• BMB Reports
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• 제32권6호
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• pp.535-540
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• 1999

Two types of the thioltransferase (also called glutaredoxin) have been previously detected in the cytosolic extract of Schizosaccharomyces pombe, a fission yeast. Previously, the one with a smaller molecular mass (14kDa) was purified and characterized. In the present study, the second thioltransferase was purified. The purification procedure included ammonium sulfate fractionation (40-80%), Sephadex G-200 gel filtration, DEAE-cellulose ion-exchange chromatography, Sephadex G-50 gel filtration, and glutathione-agarose affinity chromatography. The purified enzyme showed a single band on SDS-PAGE, and its molecular mass was determined to be 23 kDa. It utilizes various compounds as substrates, including 2-hydroxyethyl disulfide. Interestingly, we found that the purified thioltransferase also contains significant glutathione S-transferase activity.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1994년도 춘계학술대회 and 제3회 신약개발 연구발표회
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• pp.253-253
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• 1994

영지와 구름버섯의 원형질체 융합 균주 F-1의 배양 균사체로 부터 열수추출한 분획 Fr.I을 DEAE-cellulose ion chromatography와 gel filtration chromatography를 통하여 분획 Fr.II, III, IV,로 분리 정제하였다. Sarcoma 180에 대한 종양억제율을 검사한 결과 Fr.IV는 68.73%로 가장 우수하였으며 동계 복수암에 대한 수명 연장 효과도 140 %의 유의적인 결과를 얻었다. 면역 관련 장기의 중량에 대한 영향을 실험한 결과 정상군에 비해 간, 비장 및 흉선의 중량을 증가시켰고, 마우스 암세포에 대한 직접적인 세포독성 작용을 보이지 않았으나 면역 실험을 실시한 결과, 마우스에서 용혈반 형성세포수를 1,36배 증가시켰으며 암이식군에서 감소된 T lymphocyte활성을 정상수준까지 회복시켰고 또, macrophage의 superoxide anion 분비를 2.25배 증가시켰다. 이로써 이 항암 성분은 면역세포를 활성화시켜 항암 효과를 나타냄을 의미한다. Fr.IV히 분자량은 7.9$\times$$10^4$ dalton이고 75,57%의 다당체와 4.47%의 단백질로 이루어졌으며 그 다당체는 주로 glucase, xylose와 mannose로 구성된 heteropolysaccharide이었으며 그 단백질은 Alanine과 Valine을 위시한 15종의 아미노산을 함유하고 있음이 확인되었다.

• 대한약학회:학술대회논문집
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• 대한약학회 2003년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.1
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• pp.217.3-218
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• 2003

A novel lectin has been purified from the fruiting bodies of the mushroom, Fomitella fraxinea, which belongs to bracket fungi by a combination of ion-exchange chromatography on DEAE-cellulose and gel filtration chromatography on Sephacryl S-200 HR. The lectin, designated as FFrL, was a homotetrametric protein with a molecular weight of 50 kDa as demonstrated by SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis) and MALDI-TOF-MS(matrix assisted UV laser desorption/ionization time-of flight mass spectrometry). (omitted)