• 미생물학회지
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• 제31권3호
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• pp.230-236
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• 1993

Micrococcus luteus 가 생산하는 isocitrate lyase 의 효소단백질을 ammonium sulfate precipitation, DEAE-cellulose, DEAE-sephacel, 1차 Sephadex G-200, 2 차 Sephadex G-200 column chromatography 과정을 통하여 분리 정제하였으며 정제된 효소의 분자량과 효소학적 특성을 조사하였다. 정제된 isocitrate lyase 는 상기 정제 과정을 통하여 10.2%의 회수율과 38.8 의 정제도를 나타내었으며, 전기영동시 단일밴드를 얻을 수 있었고, SDS-PAGE 에 의해 측정된 분자량을 약 60,000이며 1개의 subunit 로 나타났다. 본 효소의 최적 pH 는 7.5이었으며, 최적 온도는 $40^{\circ}C$ 부근이었고 $45^{\circ}C$까지는 안정하였다. 2가 금속염의 첨가시$ Mg^{2+}$ 를 제외한 다른 금속이온들은 효소활성을 저해하는 것으로 나타났으며 $Mg^{2+}$의 농도는 5 mM 에서 최대활성을 나타내었다. 또한 기질인 DL-isocitrate 의 $K_{m}$ 치는 0.95 mM 로 나타났으며, thiol 화합물의 첨가시 cysteine 은 1mM, glutathione과 $\beta$-mercaptoethanol 은 5 mM 의 농도에서 효소활성이 최대에 달하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제5권3호
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• pp.141-151
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• 1977

Nocardia sp의 tellurite 및 tellurate 환원효소의 세포내 분포 및 이의 정제법에 대한 실험과 효소 화학약 성질에 대한 연구를 요약하면 다음과 같다. Nocardia sp의 tellurite 및 tellurate 환원효소는 세포질중에 존재하며 T.T.C.의 환원부위와는 세포내에서의 존재양식이 서로 다르다. 세포용성 성분을 균체로부터 조제하여 이것을 재료로 해서 유안여석법, DEAE-Cellulose column chromatography등을 병용함에 따라, tellurite및 tellurate 환원순서의 정제가 가능하다. 이상의 정제효소를 사용하여 이의 낙소 화학적 성질에 대하여 검토한 결과, 수소공여체로는 NADH, NADPH 환원형(methylene blue)의 어느 것이든 작용한다는 것을 알았지마는 아마 생리적 수소공여체는 NADH, NADPH의 양자이든가 또는 이들 양자중에서 어느 하나일 것이다. 한편 이들 수소공여체에 대한 수소수용기는 본 효소에 있어서는 tellurite가 균체의 기질이 되지마는 tellurite 및 tellurate와 화학구조가 유사한 selenite, selenate를 환원하여 각각의 기질화합물중에 함유되어 있는 금속을 석출한다는 것도 알게 되었다.

• 고려인삼학회:학술대회논문집
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• 고려인삼학회 1990년도 Proceedings of International Symposium on Korean Ginseng, 1990, Seoul, Korea
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• pp.79-85
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• 1990

The aqueous extract of fresh ginseng (Panax ginseng C.A. Meyer) contains a macromolecular fraction that showed mitogenic and comitogenic activities in human peripheral blood Iymphocytes. Purification of the crude extract by size (ultrafiltration, Sephadex G-200) and charge (DEAE-cellulose. DEAE-Sepharose) yielded a semi-purified fraction (DS-3). This fraction contains at least three subgroups of anionic macromolecules with apparent molecular weight greater than 600 kilodaltons. It is a glycoprotein with a large amount of glucuronic acid. It acts as a mitogen in both T and B cells of human peripheral blood lymphocytes. It could also potentiate the mitogenic action of Concanavalin A in Iymphocyte T cells. Such potentiation is not due to increased binding of Concanavalin A to the cell surface. Its mitogenic and co-mitogenic effects do depend on the presence of extracellular Ca2+.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2001년도 추계학술발표대회
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• pp.697-700
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• 2001

Iron is an essential nutrient for most organisms, which supplied to them in a protein-iron complex known as ferritin. Ferritins are multimeric proteins found in prokaryotes, plants and animals. They are consisted of spherical shell of 24 subunits defining a cavity of about 8nm in diameter, where an iron core is laid down. Expression of ferritin in recombinant E. coli at $37^{\circ}C$ led to the accumulation of recombinant ferritin. Insoluble form of ferritin was separated from disrupted cells, followed by various primary separation steps with two kinds of buffers. Collected samples from the primary steps were purified by DEAE-cellulose gels packed in a column. The fractions from the DEAE column were assayed to gain the amount and the purity of ferritin by using HPLC and SDS-PAGE.

• 한국식품영양학회지
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• 제7권2호
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• pp.119-123
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• 1994

Aspergillus sp. BY-54 which produced a strong dextran hydrolyzing enzyme was isolated from soil. Using this strain, the optimal cultural conditions, enzyme purification and characterization were studied. The results are as follows : The optimal concentration of dextran as carbon source was l%. and the optimum temperature and the initial pH for enzyme production was 3$0^{\circ}C$, and 7.0, respectively. Dextranase was purified by DEAE-cellulose column chromatography with a linear gradient increase in NaCl. Km value of dextranase was 0.222%, and several glucans containing various types of glucosidic linkages such as DEAE-sephadex, CM-sephadex and sephadex G-100 were almost digested to a large extent with this dextranase. The enzyme was strongly inhibited by sodium fluoride, KMnO4 and p-CMB, while KCN caused 20% of activation.

• 약학회지
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• 제42권1호
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• pp.53-58
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• 1998

A novel type of sulfotransferase, arylsulfate sulfotransferase (EC 2.8.2.22) purified from Haemophilus K-12, an intestinal bacterium of a mouse, was immobilized onto AH-S epharose 4B, CH-Sepharose 4B and DEAE-celluose. The enzyme was stabilized for storage more markedly by covalent immobilization onto AH-Spharose 4B or CH-Sepharose 4B and by adsorptive immobilization onto DEAE-cellulose than the free enzyme. The optimal pH and acceptor substrate specificity of immobuized enzyme were similar to those of the free enzyme.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제19권2호
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• pp.160-164
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• 1998

The NADH-cytochrome b5 reductase (NCBR), a mitochondrial external electron carrier, was purified from bovine heart and turnip and their properties were examined. The mitochondrial outer membranes separated were subjected to NCBR isolation through DEAE-Cellulose ion exchange, DEAE-Sephadex gel chromatography, and hydroxyapatite adsorption chromatography. These processes yielded the purification folds of 88 and 42 and the recovery percentages of 0.2%, 5.67% for turnip and bovine heart, respectively. The molecular weight of the NCBR from the two sources was estimated to be 35,000 using SDS polyacrylamide gel electrophoresis. The Michaelis constant Km and maximum velocity Vmax were determined by measuring the NADH-ferricyanide redox system as well as the NADPH-ferricyanide redox system. The kinetics showed that both NCBRs had higher affinities for NADH than artificial electron-acceptor substrate ferricyanide. Although NADPH had a lower affinity for the enzymes than NADH, this study showed the 2'-phosphate dinucleotide could be used as a substrate.

• 한국균학회지
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• 제22권4호
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• pp.298-308
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• 1994

Ganoderma lucidum이 생산하는 polygalacturonase의 유용활용 방안을 위한 효소의 특성을 연구하기 위하여 버섯배양물로부터 효소를 생산하고 정제하여 그 특성을 검토한 결과는 다음과 같다. Endo-polygalacturonase는 배양여액으로부터 ammonium sulfate 침전, Biogel P-100, DEAE-cellulose, Sehpadex G-150 column chromatography에 의하여 순차적으로 정제되었고, Sehpadex G-150 column chromatography에서 re-gel filtration까지 실시한 결과 specific activity가 892unit/mg protein로 배양여액보다도 약 56배의 정제도를 나타냈으며, exo-polygalacturonase는 ammonium sulfate침전, Biogel P-100, DEAE-cellulose column chromatography까지 부분정제한 결과 9.2배의 정제도를 나타냈다. SDS polyacrylamide gel에서 전기영동을 실시한 결과 단일 band를 나타냈으며, 분자량은 54,000 dalton이었다. Endo-polygalacturonase와 exo-polygalacturonase는 citrus pectin이나 pectic acid보다 apple pectin에 친화도가 높았으며, Lineweaver-Burk plot로부터 계산된 apple pectin에 대한 Km 치는 각각 1.44와 10.6 mg/ml이었다. 이 두 효소의 작용 최적 pH는 4.0이었으나 pH 안정성에서는 endo-polygalacturonase는 $pH\;4.0{\sim}6.0$에서, exo-polygalacturonase는 $pH\;3.5{\sim}5.5$ 범위에서 안정하였다. 효소반응 최적 온도는 endo-polygalacturonase는 $40^{\circ}C$ 이었으나 exo-polygalacturonase는 $60^{\circ}C$에서 최대의 활성을 나타냈고 열안정성도 exo-polygalacturonase가 endo-polygalacturonase보다 더 높은 온도에서도 안정하였다. 또한 endo-polygalacturonase는 $Ca^{++}$ 과 $Mn^{++}\;ion$에, exo-polygalacturonase에는 $Ca^{++}\;ion$에 의해 효소반응이 촉진되었다.

• KSBB Journal
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• 제9권3호
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• pp.239-245
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• 1994

Alcohol oxidase와 alcohol dehydrogenase를 DEAE-Cellulose와 ePG에 고정화시켜 에탄올을 산 화시키는 반응을 기상에서 수행하였다. 이 기상반응 의 반응활성은 반응온도와 효소의 hydration 정도에 큰 영향을 받았다. 온도에 의한 효소활성의 변화는 액상에셔의 경우와 비슷한 경향을 보였다. 즉 기상 반응에서도 $35^{\circ}C$에서 $40^{\circ}C$ 사이에서 최고의 활성을 나타내였다. 효소의 hydration 정도는 효소의 활성 에 매우 큰 영향을 끼치는 인자였는데 water activity가 0.8 정도까지는 water activIty가 증가함 에 따라 효소의 활성이 급격히 증가하다가 그 이상 에서는 다소 감소하는 경향을 보였다. 쇼소의 얀정 성도 water activity에 의해서 크게 영향을 받았는데 water actIvity가 0.5 정도까지는 water activity가 증가함에 따라 안정성이 비교적 급격히 감소하였고 그 이상의 water activity에서는 효소의 안정성이 water activity의 영향을 크게 받지 않고 어느 정도 엘정하게 유지되었다. 담체의 흡착성능이 기상반응에 마치는 영향을 알아보가 위하여 셔로 흡 착성능이 다른 DEAE-Cellulose와 CPG에 고정화 된 효소를 사용하여 반응을 비교해 본 결과 담체의 흡착성능은 반응에 별 영향을 주지 못했다. Alcoh이 O oxidase의 기상반응 속도상수(Km=0.24mM)는 액상에서의 값(Km=11.22mM)과 order of magni tude가 약 2 정도의 차이를 보여주었는데 이는 기질 인 에탄올의 기 액 평형상태에셔의 각상간의 농도의 order of magnitude 차와 비슷하였다. 같은 산화효 소류이나 조효소를 펠요로 하고 반응속도식이 많이 다른 alcohol dehydrogenase 효소에도, 기상반응 속도상수와 사용기질의 기 액평형 데이타와의 이와 같은 연관성이 성립하였다. 이같은 연관성이 산화환 원효소류가 아닌 다른 효소류에도 적용될지의 여부는 앞으로의 연구로 밝혀야 할 것이다.

• 한국식품과학회지
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• 제8권2호
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• pp.107-112
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• 1976

본(本) 실험(實驗)은 Gonda-type 치이즈의 숙성중(熟成中) casein의 변화(變化)를 구명(究明)하고자 총질소(總窒素), 수용성질소(水溶性窒素), 12% TCA 가용성질소(可溶性窒素) 및 5% NaCl 가용성질소(可溶性窒素)의 양(量)을 정량(定量)하여 비교(比較)하였고 또한 DEAE-cellulose column과 polyacryl amide gel electrophoresis를 사용(使用)하여 그 변화(變化)를 실험(實驗)한 결과(結果)는 다음과 같다. 1. 총질소중(總窒素中) 수용성질소량(水溶性窒素量)은 숙성(熟成) 2개월(個月)과 4개월(個月)에 각각 19.03% 및 30.61%이였으며, 12% TCA 가용성질소량(可溶性窒素量)은 각각 7.72% 및 11.73%이였다. 2. 5% NaCl 가용성질소량(可溶性窒素量)은 총질소중(總窒素中) 제조직후(製造直後)에 10.76%에서 숙성(熟成) 2개월(個月)에는 41.13%로 증가(增加)하였으나 숙성(熟成) 4개월(個月)에는 22.86%로 감소(減少)하였다. 3. 각종(各種) 질소화합물(窒素化合物)을 분가(分加)한 바 각각 모두 5개의 주(主) peak와 $3{\sim}4$개의 minor peak가 나타났으며 각 fraction의 면적비(面積比)가 숙성기(熟成期)에 따라서 증가 또는 감소를 나타내었다. 4. 4개월(個月) 숙성(熟成)된 치이즈를 전기영동(電氣泳動)한 결과(結果) 질소화합물(窒素化合物)에 따라서 $5{\sim}8$개의 band를 나타내었다. 5. 12% TCA에서 침전(沈澱)된 부분(部分)과 가용성(可溶性) 부분(部分)을 아미노산(酸) 조성(組成)을 분석(分析)한 바 모두 16개의 아미노산(酸)으로 나타났으나 조성(組成)의 비율(比率)은 서로 다르게 나타났다.