Nakamura, Chikashi;Hasegawa, Miki;Shimada, Kazumi;Shirai, Makoto;Miyake, Jun
Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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v.5
no.6
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pp.413-417
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2000
In this study, a direct detection system for triazine derivative herbicides was developed using the photosynthetic reaction center (RC) from the purple bacterium, Rhodobacter sphaeroides, and surface plasmon resonance (SPR) apparatus. The histidine-tagged RCs were immobilized on an SPR gold chip using nickel-nitrilotriacetic acid groups as a binder for one of the triazine herbicide, atrazine. The SPR responses were proportional to the sample concentrations of atrazine in the range 0.1-1 $\mu\textrm{g}$/mL. The sensitivity of the direct detection of atrazine using the RC-assembled sensor chip was higher than that using the antibody-immobilized chip. The other types of herbicides, DCMU or MCPP, were not detected with such high sensitivity. The results indicated the high binding selectivity of the RC complex.
Photoproduction of hydrogen by free and polyvinylalcohol (PVA)-immobilized spinach chloroplasts was investigated. Immobilization of chloroplast with PVA increased the functional stability of the chloroplast during storage. PVA-immobilized chloroplasts preserved photosynthetic electron transport activity much better than free chloroplasts. The hydrogen production of free chloroplast decreased to 17% of initial activity after storage of six days. The hydrogen production of the PVA-immobilized chloroplast, however, showed 44% of initial activity after storage of 15 days. The maximal rate of hydrogen production was accomplished at 2$^{\circ}C$ under the light intensity above 116 $\mu$E.m-2.s-1. The amount of hydrogen produced was proportional to the chlorophyll concentration. The hydrogen production was inhibited by DCMU treatment, indicating hydrogen production is dependent on photosynthetic electron transport. These results suggest that PVA is a good candidate for the immobilization matrix of chloroplasts for the photoproduction of hydrogen.
The effects of allelochemicals from medicinal plants have been studied as photo-synthetic inhibitor for photoautotrophic(PA) cultured cells. The extracts from 9 plant species were used for measuring the physiological effects on the liverwort cultured cell in following areas; germination inhibition, chlorophyll contents, hill activity, cell viability, photosynthetic oxygen evolution,and protein pattern changes on SDS PAGE. Germination inhibitions were detected in all plant after treating with 10% extract. Especially, treatment with 10% extract from Pulsatilla koreana and Aconitum carmichael inhibited germinations completely. Chlorophyll fornation was inhibited completely by treating PA cells with extract of Pulsatilla koreana, whose effect was similar to that of DCMU 10-3M, inhibitor for photosynthetic electron trans-fer. The treatment with extract from Pulsatilla koreana on PA cell showed the highest hill activity and the lowest cell viability among extracts studied. Oxygen releasing has been decreased down to 14-77% after treating with extracts from Pinellia ternata, Araliacont inentaila, Pulsatilla koreana and Vitex rotundifolia. Especially, 60$\mu$l of Pulsatilla koreana extract into 2ml mixture of PA cell inhibit-ed oxygen release up to 50%. Protein bands on SDS-PAGE, 14kD, 31kD, 41kD, 53kD, and 73kD, were not detected after treating Pulsatilla koreana extract on PA cells.
The effects of light and $CO_2$ on the electrophysiological characteristics of guard cells in the intact leaf and in the detached epidermis have been investigated. Guard cells in intact leaves showed the membrane hyperpolarization in response to light. The biggest induced change of the membrane potential difference (PD) in the guard cells of the intact leaf was 13 m V by light and 42 mV by $CO_2$ in Commelina communis. Similar results were obtained with Tradescantia virginiana. However, there were no changes of membrane PD in detached epidermis. In order to determine the influence of the mesophyll on the changes of membrane PD, infiltration of the mesophyll cells with photosynthetic inhibitors was performed. In CCCP infiltrated leaf discs the guard cell membrane was depolarized slightly by red-light and hyperpolarized by $CO_2$, but in leaf discs infiltrated with DCCD and DCMU the guard cell membrane was hyperpolrized by both red-light and $CO_2$ as the control leaf discs. In azide infiltrated leaf discs the guard cell membrane showed no response to light and there was a much reduced membrane hyperpolarization by $CO_2$ compared to other responses. It was likely that azide caused leaf damage and the activity of cell metabolism was decreased greatly, resulting in small membrane PD changes by $CO_2$ and no changes by redlight. Therefore, it can be suggested that red light was sensed by the mesophyll and the light induced guard cell membrane hyperpolarization was related to energy produced by cyclic-photophosphorylation, but ${CO_2}-induced$ guard cell membrane hyperpolarization was not related to photosynthesis. Alkalisation of the vacuole was observed when the intact leaf was exposed to $CO_2$, indicating that membrane hyperpolarization was mainly the result of proton efflux.efflux.
For understanding physiological nature of phototaxis in Synechocystis sp. PCC 6803 PTX(S. 6803 PTX), we examined the effects of some metabolic inhibitors and cation ionophore on the phototactic movement. In the presence of DCMU, which blocks the photosynthetic electron transport just after photosystem II acceptor, there was no inhibitory effect on the phototaxis up to $100\;\mu\textrm{M}$. Instead, the respiratory electron chain inhibitor such as sodium azide dramatically impaired the phototaxis in S. 6803 PTX. These observations indicate that the phototaxis is linked not to photo-phosphorylation, but to respiratory phosphorylation. When the cells were treated with un couplers such as CCCP or DNP, which dissipate the electrochemical gradient of proton($\Delta\mu_{H}+$) across the cytoplasmic membrane, these chemicals did not affect phototaxis. In contrast, when cells were treated with DCCD or NBD which deprive cells of A TP but leave $\Delta\mu_{H}+$ intact across the membrane, the phototactic movement was severly reduced. These results imply that ATP production, not proton motive force, is involved in the phototactic movement in this organism as a driving motive force. The application of specific calcium ionophore A23187 strongly impaired positive phototaxis. Calcium fluxes should be engaged in the sensory trans-duction of phototactic orientation. Finally, when ethionine was supplimented to culture media, the photomovement of this organism was inhibited. This implies that methylation/demethylation mechanism controls the process of phototaxis in S. 6803 PTX like chemotaxis in E. coli and Salmonella typhimurium.murium.
The rate of apparent nitric oxide (NO) release, as measured in the exhaust gas of green alga, Scenedesmus obliquus, depended on the light intensity and pH. It doubled after lowering the temperature from $25^{\circ}C{\;}to{\;}15^{\circ}C$ and strongly decreased from $35^{\circ}C{\;}to{\;}42^{\circ}C$. The Scenedesmus cells, deficient in nitrogen or phosphorus, demonstrated a significant increase in NO production following their transfer to nitrate- and phosphate-rich media. The addition of herbicides (DCMU and glyphosate) or toxic concentrations of $Cu^{2+}{\;}or{\;}Fe^{3+}$ produced strong NO peaks, resembling those that occurred after sudden darkening. An increase in the $Ni^{2+}$ concentration to 20 ppm resulted in a gradual increase of NO release from the initial ~1.5 ppbv to>20 ppbv, whereas $Cd^{2+}$ instantaneously suppressed the NO by the cultures of Scenedesmus was not altered by L-NNA, an inhibitor of nitric oxide synthase (NOS), or by its substrate, L-arginine. This seems to exclude the role of NOS in the NO formation under study. Accordingly, it can be assumed that the rate of NO formation is mainly a function of dynamic nitrite pool sizes and environmental factors significantly affect the NO production in algae.
To investigate the influence of the mesophyll cells on stomatal opening in response to white light, the segments of isolated epidermis were transferred on partly exposed mesophyll cells of a leaf and stomatal apertures were measured. Transferring the isolated epidermis on partly exposed mesophyll cells of a leaf caused a marked increase on stomatal apertures while stomata in isolated epidermis incubated in MES buffer hardly opened. Mesophyll infiltration with photosynthetic inhibitors (DCMU, DCCD, $NaN_3$) was performed to elucidate the correlation between stomatal apertures and the degree of photosynthetic activity. It was found that transferring the isolated epidermis on partly exposed mesophyll cells of a leaf caused an increase of stomatal apertures depending on the degree of photosynthetic activities. In $NaN_3$ infiltrated leaf discs, transferring the fresh isolated epidermis on partly exposed mesophyll cells of a leaf showed no significant effect, but a slight increase on stomatal apertures. Isolated epidermis alone did not respond to the light properly, but if it was closely contacted with mesophyil cells, the stomata regained the ability of the light response. Therefore, it could be suggested that stomatai apertures were related with the degree of photosynthetic activity in the mesophyll cells.
In order to characterize the chloroplasts of Korean ginseng as a semi-shade plant and radish as a sun plant, effects of growth light intensity on photosynthetic electron transport (PS) activity in chloroplasts and superoxide (O2.-) production in thylakoid membrane by irradiation were investigated. High-light chloroplasts of both plants showed higher PS activities than those grown under ow growth light intensity. High PS II and low PS I activities in ginseng chloroplasts (ratio of PS II/PS I : 1.1) were observed, but radish chloroplasts showed low PS II and high PS I activities (ratio of PS II/PS I : 0.3). PS II activity of both plants was little affected by temperature in range of 15-35$^{\circ}C$. Activities of whole -chain (PS II+I) in ginseng and PS I in radish were increased at high temperature (4$0^{\circ}C$). Preincubation of chloroplasts at 4$0^{\circ}C$ during 30 min, as a mild heat stress, caused rapid decrease in PS II and PS II+I activities of both plants. However PS I activity was not decreased in ginseng and rather increased in radish. O2.- production (NBT reduction) in Mehler reaction in the thylakoid membrane was inhibited by DCMU in both plants. DMBIB inhibited O2.- production in ginseng, but radish was insensitive to DMBIB. Electron flow system in ginseng thylakoid membrane was more susceptible to damage of photooxidation than that of radish.
The objective of this study was to investigate the cause of anthocyanin accumulation in the corn leaves treated with metsulfuron-methyl. The accumulation of anthocyanin and total sugar was increased with the time after metsulfuron-methyl application and with the greater herbicide concentration as well. The anthocyanin increase was alleviated by the combined treatment of DUMU or the tank-mixture treatment of metsulfuron-methyl, isoleucine and valine. Metsulfuron-methyl could not enhance the anthocyanin formation in the nonchlorophyllous tissue in which photosynthetic carbohydrate production was limited. Upon the exogenous supply of sucrose, however, the contents of anthocyanin was increased in the both chlorophyllous and nonchlorophyllous leaf segment of corn without the herbicide treatment. On the other hand, the herbicide itself did not influence Hill reaction in vitro and photosynthesis electron transport in vivo. The anthocyanin accumulation by metsulfitronmethyl did not occur in the corn mutants deficient in the structural gene of anthocyanin synthesis, but corns deficient in the regulatory gene had the anthocyanin accumulation only in R-r and r-r type. The above results suggest that the purple pigmentation in the corn leaves treated with metsulfuron-methyl is related to the accumulation of photosynthetic carbohydrate which can stimulate the. regulatory gene related to anthocyanin biosynthetic pathway.
Photoinhibition and photoprotection of PSII in the leaves of hot pepper (Capsicum annuum L.) grown in Hoagland solution and Tap water were compared. Though changes in the rates of $O_2$ evolution as a function of photon fluence rate (PFR) were comparable, the rates of respiration in the dark was 3 times higher in the Hoagland solution grown leaves than in the Tap-water grown ones. Compared to Hoagland solution grown plane, PSIIs of Tap water grown pepper leaves were more susceptible to photoinhibitory light treatment. In order to inactivate functional PSII to the same extents, Hoagland solution grown plants required almost 2-fold high light $(1600{\mu}molm^{-2}s^-)$ treatment than those of Tap water $(900{\mu}molm^{-2}s^-)$. Interestingly, the remaining fraction of PSII in Hoagland grown pepper was able to survive under prolonged illumination in the presence of lincomycin, which probably means that the growth condition of plant seemed to have an effect on the recovery of PSII from light stress. When PSII was severly photoinactivated at a chilling temperature, recovery was observed only if the residual functional PSII were not inhibited with DCMU, Nigericin and MV during recovery. In conclusion, PSIIs grown in the Hoagland solution was more resistant to excess light than in the Tap water grown one and the recovery of PSII from photodamage was more efficient in Hoagland grown pepper leaves than Tap water grown one, which means that the increased dark respiration may play a important role in the protection of PSII from photoinhibition by helping repair photosynthetic proteins (in particular, the D1 protein of PSII) degraded by photoinhibition.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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