Trypsin-like enzyme was purified from shrimp hepatopancreas through Q-Sepharose ionic exchange, benzamidine Sepharose-6B affinity, and Superdex 75 gel chromatography. Purity of trypsin-like enzyme was increased 69-fold with $44\%$ yield. The enzyme consisted of a single polypeptide chain with a molecular weight (M.W.) of 32 kDa judged by sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The enzyme was completely inactivated by serine enzyme inhibitors such as soybean trypsin inhibitor (SBTI), tosyl-Llysine chloromethyl ketone (TLCK), and leupeptin. However, the enzyme was not affected by tosyl-L-phenylalanine chloromethyl ketone (TPCK) which is a chymotrypsin specific inhibitor. The enzyme had no activity against benzoyl-tyrosine ethyl ester (BTEE) which is a chymotrypsin specific substrate. The enzyme showed high activity on the carboxyl terminal of Phe, Tyr. Glu, Arg, and Asp. However. no activity was detected against the carboxyl terminal of Pro, Trp, Cys, Gly, Val, and Ala.
An experiment was conducted to determine the effects of different dietary crude protein (CP) levels on growth performance, nutrient utilization, small intestine protease activity and immunity index of weaner to 2 month-old New Zealand rabbits. Eighty weaner rabbits were allocated in individual cages to five treatments in which they were fed diets with CP at 14%, 16%, 18%, 20% and 22%, respectively. The growth performance and nutrient digestibility of rabbits increased firstly when dietary CP increased, then decreased. The average daily gain was the highest and feed conversion rate was the lowest when dietary CP reached 20%, namely 34.9 g/d and 2.74:1, respectively. Maximum CP digestibility was 72.1% in the 18% CP group, maximum crude fiber digestibility of 28.4% occurred in the 16% CP group and was significantly different from other treatments (p<0.01), apparent digestibility of Lys and Val followed the same trend as CP digestibility, and reached their maximum when dietary CP was 18%. Apparent digestibility of Cys, Tyr, Leu and Thr also had a similar trend to CP digestibility. Nitrogen retention (RN) increased with CP level (p>0.05), and was highest for 20% CP treatment (1.5 g/d). The effect of CP level on the rate of digestible nitrogen (DN) converted RN was small. The spleen index, thymus index, chymotrypsin and trypsin activities in small intestine were highest when dietary CP was 16%, which were 1.0, 2.8, 15.7 U/g and 125.7 U/g, respectively. There was no significant difference among treatments (p>0.05). According to the above results, the appropriate dietary CP level from weaner to 2 month-old meat rabbits was 18-20%.
Park, Joo-Woong;Lee, Joo-Kyung;Kwon, Tae-Jong;Yi, Dong-Hee;Park, Yong-Il;Kang, Sang-Mo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.11
no.6
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pp.1011-1017
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2001
Streptomyces sp. Y-110 cytochrome P-450, induced by the addition of compactin -Na into the culture medium, was purified from the cell extract to apparent homogeniety, mainly by DEAE-Sepharose, hydroxyapatite, and Mono Q column chromatyography. The sepcific activity of purified enzyme on its substrate, compactin-Na, was determined to be 15 nmol of pravastatin per mg protein. The molecular mass of this enzyme on SDS-PAGE was $37{\pm}0.5$ kDa, pI was 4.5, and its CO difference spectrum showed maximum absorption peaks at 452 and 550nm, respectively. The N-terminal amino acid sequence was determined to be Met>Thr>Cys>Thr>Pro>Val>Thr>Val>The>Gly>Ala>Ala>Gly>Gln>Ile>Gly>Tyr>Ala>Leu. Its apparent $K_m$ on compactin-Na was $1.294{\mu}M{\cdot}min^-1,\;and\;V_{max}\;was\;1.028{\mu}M{\cdot}min^-1$. The maximum substrate concentration ($K_s$) for reaction was $270 {\mu}M$and thus $1/[K_s]$ was $3.7{\mu}M$. These physicochemical characteristics and kinetic behavior of this enzyme were compared and shown to be different from those of Streptomyces cytochrome P-450 enzymes reported, suggesting that this enzyme may be an additional member of the Streptomyces cytochrome P-450 family.
In order to elucidate the usefulness of Lycopene, a cherry tomato variety, as a food material, the compositions of free amino acids, amino acid metabolites and polyphenol compounds were analyzed using HPLC and LC-MS/MS method. Lycopene contained eighteen free amino acids except for L-Cys and L-Try. L-Glu was the most abundant free amino acid, followed by L-Gln and L-Asp. The percentages of L-Glu, L-Gln and L-Asp of total free amino acid were 55.5%, 15.9% and 9.9% respectively. Lycopene contained essential amino acids with the exception of tryptophan. The following amino acid metabolites were found : ${\gamma}$-aminobutyric acid(GABA), carnitine(L-Car), o-phosphoethanolamine(o-Pea), hydroxylysine(Hyl) phosphoserine (p-Ser), N-methyl-histidine(Me-His), ethanolamine($EtNH_2$). Especially, GABA known as a neurotransmitter was present at a high level(305.99 mg/100 g dry weight). We identified the following polyphenol compounds in the cherry tomatoes : caffeic acid-hexose isomer I (CH I), caffeic acid-hexose isomer II (CH II), 3-caffeoylquinic acid(3-CQA), 5-caffeoylquinic acid(5-CQA), caffeoylquinic acid isomer(CQAI), quercetin-hexose-deoxyhexose-pentose(QTS), quercetin-3-rutinoside(Q-3-R), di-caffeoylquinic acid(di-CQA), tri-caffeoylquinic acid(tri-CQA), naringenin chalcone(NGC). Large quantities of Q-3-R and NGC known as bioactive compounds were found. These results revealed that Lycopene variety contained various nutritional and bioactive compounds and would be a potent functional food material.
Two experiments were conducted to evaluate the effects of diet complexity and fermented soy protein on growth performance and amino acid digestibility. In Exp. 1, a total of 120 crossbred weanling pigs ($5.68{\pm}0.80\;kg$ BW) were randomly allocated into 4 treatments. Each treatment had 6 replicate pens comprising 5 pigs in each replicate. Experimental diets consisted of simple (soybean meal as protein source) and complex (soybean meal, rice protein concentrate, potato protein concentrate and fish meal as protein sources) diets; each diet contained 0 or 5% fermented soy protein (FSP), respectively. Dietary treatments included: i) simple diet; ii) simple diet with 5% FSP; iii) complex diet; iv) complex diet with 5% FSP. Pigs were provided each experimental diet for 20 d (phase 1) and then fed the same common diet for 10 d (phase 2). During days 0-10, pigs fed FSP diets had greater ADG than those fed non-FSP diets (p<0.05). G/F in FSP treatments was significantly higher than that in non-FSP treatments (p<0.05) from days 0 to 10. Throughout the overall period, G/F was greater in FSP treatments compared with non-FSP treatments (p<0.05). On d 10, N digestibility was higher in pigs fed FSP diets than in those fed non-FSP diets (p<0.05). Diet complexity did not affect growth performance and nutrient digestibility (p>0.05) in this experiment. In Exp 2, 12 ileal-cannulated, weanling barrows were housed in individual metabolism crates and randomly assigned to 1 of 4 treatments (same as Exp. 1) by using a $4{\times}4$ Latin square design. Among the essential amino acids, apparent ileal digestibility (AID) of Met and Val were increased in pigs fed FSP diets compared with those fed non-FSP diets (p<0.05). AID of Met, Phe and total essential amino acids were higher in pigs fed complex diets than in those fed simple diets (p<0.05). Among the non-essential amino acids, AID of Ala in FSP treatments was greater than that in non-FSP treatments (p<0.05). In addition, Asp, Cys, Glu, Pro, Ser and total non-essential amino acid digestibilities in pigs fed complex diets were higher compared with those fed simple diets (p<0.05). Interaction was observed in AID of Met, Asp and Pro. In conclusion, these results indicated that feeding of 5% FSP to nursery pigs improved feed efficiency and AID of amino acids, and diet complexity did not maximize the growth performance of pigs in the subsequent phase.
Korean Native Pig (KNP) has a uniform black coat color, excellent meat quality, white colored fat, solid fat structure and good marbling. However, its growth performance is low, while the western origin Yorkshire pig has high growth performance. To take advantage of the unique performance of the two pig breeds, we raised crossbreeds (KNP ${\times}$ Yorkshire to make use of the heterotic effect. We then analyzed the liver transcriptome as it plays an important role in fat metabolism. We sampled at two stages: 10 weeks and at 26 weeks. The stages were chosen to correspond to the change in feeding system. A total of 16 pigs (8 from each stage) were sampled and RNA sequencing was performed. The reads were mapped to the reference genome and differential expression analysis was performed with edgeR package. A total of 324 genes were found to be significantly differentially expressed (${\left|log2FC\right|}$ > 1 & q < 0.01), out of which 180 genes were up-regulated and 144 genes were down-regulated. Principal Component Analysis (PCA) showed that the samples clustered according to stages. Functional annotation of significant DEGs (differentially expressed genes) showed that GO terms such as DNA replication, cell division, protein phosphorylation, regulation of signal transduction by p53 class mediator, ribosome, focal adhesion, DNA helicase activity, protein kinase activity etc. were enriched. KEGG pathway analysis showed that the DEGs functioned in cell cycle, Ras signaling pathway, p53 signaling pathway, MAPK signaling pathway etc. Twenty-nine transcripts were also part of the DEGs, these were predominantly Cys2His2-like fold group (C2H2) family of zinc fingers. A protein-protein interaction (PPI) network analysis showed that there were three highly interconnected clusters, suggesting an enrichment of genes with similar biological function. This study presents the first report of liver tissue specific gene regulation in a cross-bred Korean pig.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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