The gDNA isolated from Cyclina sinensis from Gochang (GOCHANG), Incheon (INCHEON) and a Chinese site (CHINESE), were amplified by PCR. Here, the seven oligonucleotide decamer primers (BION-66, BION-68, BION-72, BION-73, BION-74, BION-76, and BION-80) were used to generate the unique shared loci to each population and shared loci by the three cyclina clam populations. As regards multiple comparisons of average bandsharing value results, cyclina clam population from Chinese (0.763) exhibited higher bandsharing values than did clam from Incheon (0.681). In this study, the dendrogram obtained by the seven decamer primers indicates three genetic clusters: cluster 1 (GOCHANG 01~GOCHANG 07), cluster 2 (INCHEON 08~INCHEON 14), cluster 3 (CHINESE 15~CHINESE 21). The shortest genetic distance that displayed significant molecular differences was between individuals 15 and 17 from the Chinese cyclina clam (0.049), while the longest genetic distance among the twenty-one cyclina clams that displayed significant molecular differences was between individuals GOCHANG no. 03 and INCHEON no. 12 (0.575). Individuals of Incheon cyclina clam population was somewhat closely related to that of Chinese cyclina clam population. In conclusion, our PCR analysis revealed a significant genetic distance among the three cyclina clam populations.
The ultrastructure of germ cells and follicle cells during oogenesis, oocyte degeneration, reproductive cycle, and first sexual maturity in female Cyclina sinensis were investigated for clams collected from Simpo, Jeollabuk-do, Korea, by cytological and histological observations. Vitellogenesis occured by way of endogeous autosynthesis and exogenous heterosynthesis: vitellogensis occurred through a process of autosynthesis, which involves a combined activities of the Golgi complex, mitochondria, and rough endoplasmic reticulum. The process of heterosynthesis involved endocytotic incorporation of extraovarian precursors into the basal region of the early vitellogenic oocytes prior to the formation of vitelline envelope. The follicle cells appear to play an integral role in vitellogenesis and oocyte degeneration, functioning in phagocytosis and digestion of products originating from the degenerated oocytes: these functions can permit the transfer of yolk precursors needed for vitellogenesis. Follicle cells might have a lysosomal system for breakdown and might also resorb phagosomes in the cytoplasm for nutrient storage during oocyte degeneration.
We investigated the effects of death and gametogenesis by infection of the trematode in the venus clam, Cyclina sinensis. The specimens of C. sinensis were collected monthly at the tidal flat of Kaehwado, Puan-gun and Sangpo aquafarms, Kochang-gun, Chollabuk-do, Korea, from June 1999 to May 2000. One species of a trematode, the metacercaria of Himasthla kusasigi Yamaguti, 1939 (Enchinistomatidae), was found in the venus clam, C. sinensis. Infection rates in Kaehwado area and Sangpo aquafarm were average 93% and 81%, respectively. Infection rates during the study period reached the maximum (100%) in September 1999 and March-April 2000 and showed the minimum (80%) in July in Kaehwado, while those in Sangpo aquafarm showed the maximum (99%) in January 2000 and the minimum (47%) in November 1999. The infection parts of the metacercaria of H. kusasigi in the venus clam were the visceral mass, gill, mantle including the foot. Their infection rates in Kaehwado area and Sangpo aquafarm were 76.7% and 81.3% in the visceral mass, 19.1% and 14.5% in the gill, and 5,1% and 4.2% in the mantle, respectively. Infection rates of H. kusasigi showed higher with the increase of the size of the clams. No abnormal characteristics in the various tissues by histological observations were found in the clams infected by the metacercaria of H. kusasigi because this clam is the second intermediate host.
We investigated the gonad index (GI), gonadal development, the reprodutive cycle and first sexual maturity of the venus clam, Cyclina sinensis by histological observation. Samples were collected from the intertidal zone of Komso Bay, Chollabuk-do, west coast of Korea, from April 1998 to March 1999. This clam is dioecious and oviparous. Monthly changes in the gonad index (GI) showed a similar pattern to the reproductive cycle. Ripe oocytes are about 90-100 ㎛ in diameter. The spawning period was between early July to September, and the main spawning occurred between July and August when the sea water temperature was over 20$\^{C}$ The reproductive cycle of this species can be divided into five successive stages: early active stage (February to April), late active stage (March to June), ripe stage (April to August), partially spawned stage (July to October), and spent / inactive stage (September to February). Percentages of first sexual maturity of female and male clams measuring 26.1-30.0 ㎜ in shell length were 53.3% and 62.5%, respectively, and 100% for the clams > 41.0 ㎜. It is assumed that both sexes begin reproduction at about two years age.
Reproductive cycle with the ovarian developmental phases, first sexual maturity of the female venus clam, Cyclina sinensis, was investigated by a histological study, and the number of spawned eggs and spawning frequency by artificial spawning induction of the clams were estimated. Samples were collected from the intertidal zone of Simpo, Gimje city, Korea between January and December, 2001. The reproductive cycle of this species can be classified into five successive stages; early active (February to April), late active (March to June), ripe (May to August), spent (July to September), and spent and inactive (September to February). The spawning period was once a year between July and August, a spawning peak was seen in July and August. Percentages of first sexual maturity of female clams of 25.1-30.0 mm in shell length were 64.3%, and 100% for the clams > 40.1 mm. The number of the eggs released from each clam by spawning induction increased as the size of clam in terms of shell length increased. The mean number of the eggs released from the second induction of spawning was 76.87% of the number of the eggs released in the first spawning. Our data indicated that the interval of each spawning was estimated to be approximately 15-17 (average 16.5) days.
The gametogenic cycle and the spawning season in female and male Cyclina sinensis were investigated by quantitative statistical analysis using an image analyzer system, and the biological minimum size (the size at 50% of sexual maturity) was calculated by combination of quantitative data by size and von Bertalanffy's equation. Compared the gametogenic cycle by quantitative statistical analysis with the previous qualitative results in female and male C. sinensis, monthly changes in female and male gametogenic cycles calculated by quantitative statistical analysis showed similar patterns to the gonadal stages in female and male reproductive cycles by qualitative histological analysis. Comparisons of monthly changes in the portions (%) of each area to eight kinds of areas by quantitative statistical analysis in the gonads in female and male C. sinensis are as follows. Monthly changes in the portions (%) of the ovary areas to total tissue areas in females and also monthly changes in the portions of the testis areas to total tissue areas in males increased in March and reached the maximum in May, and then showed a rapid decrease from June to October. Monthly changes in the portions (%) of oocyte areas to ovarian tissue areas in females and also monthly changes in the portions of the areas of the spermatogenic stages to testis areas in males began to increase in March and reached the maximum in June in females and males, and then rapidly dropped from July to October in females and males when spawnig occurred. From these data, it is apparent that the number of spawning seasons in female and male C. sinensis occurred once per year, from July to October. Monthly changes in the number of the oocytes per mm2 and in the mean diameter of the oocyte in captured image which were calculated for each female slide showed a maximum in May and reached the minimum from December to February. Therefore, C. sinensis in both sexes showed a unimodal gametogenic cycle during the year. The percentage of sexual maturity of female and male clams ranging from 25.1 to 30.0 mm in length was over 50% and 100% for clams over 40.1 mm length. In this study, the biological minimum size (sexually mature shell lengths at 50% of sexual maturity) in females and males were 26.85 and 26.28 mm, respectively.
An experiment was carried out in order to reveal the infection species of trematode and the infection demage in the marine bivalves. Metacercaria of Echinostomatidae were found in Mactra veneriformis, Cyclina sinensis and Solen strictus in the vicinity sea of Naecho-do, the estuary of the Keum River in the western coast of Korea. The metacercaria detected from Solen strictus were fed by Larus crassiostris, at 16 days after infection, the adult worm could be seceded. The metacercaria of Himasthla kusasigi were detected from Mactra veneriformis and Cyclina sinensis, their infection rates were 70.4% and 85.7% respectively. The partial infection rates with respect to the body parts were 40.4% and 77.3% in the foot, 17.0% and 12.4% in the gill, 12.6% and 10.3% in the mantle in order. The metacercaria of Acanthoparyphium were found from Solen strictus. The total infection rate was 63% and the partial infection rate was 63% and the partial infection rate was shown foot, mantle and gill in order. The adult worm ceded from Larus crassiostris was indentified as Acanthoparyphium tyosenensis Yamaguti, 1938 from view point of its physical characteristics. Therefore, Mactra veneriformis, Cyclina sinensis would be added as new intermediate hosts, and Echoinostoma decteded from Mactra sulcataria which was studied by author(1969) was revealed as larvae of Acanthoparyphium tyosenensis.
Cyclina sinensis is an edible bivalve inhabiting wide tidal flats which are exposed to the air at ebb tide along the western coast of Korea. Over the period of June to September 1971, some specimens from a tidal flat near Inchon were submerged in sea water with various concentrations of ammonium hydroxide added and careful observations were made on their fertilization, early development, and metamorphosis of the larvae. The highest rate of fertilization was demonstrated by individuals treated with 1/1000 normal solution of ammonium hydroxide and their fertilized eggs followed normal development, i.e., two cell stage 1.5 hours after fertilization, blastular stage after 4 hours, and trochophore stage after 6 hours. Within 24 hrs after fertilization C. sinensis larvae have acquired the form of early straight-hinge veliger with the mean prodissoconch I with the length of $110\mu$. It takes seven days to get the umbo stage with the mean shell length of $190\mu$ and twenty days to get the morphosing stage with the mean shell length of $260\mu$. The larvae were cultured to the metamorphosing stage with the shell length of $270\mu$ in the laboratory condition.
We investigated the reproductive cycle with gonadal development of the female Cyclina sinensis by histological observations and seasonal changes in biochemical components of the adductor muscle and visceral mass tissues were studied by biochemical analysis, from January to December, 2001. The reproductive cycle of this species can be classified into five successive stages: early active stage (February to April), late active stage (March to June), ripe stage (May to August), partially spawned stage (July to October) and spent/inactive stage (September to February). Total protein contents in the adductor muscle tissues reached the maximum in February (early active stage) and appeared the minimum in June (ripe stage), while their contents in the visceral mass tissues reached the maximum in the late active and ripe stages (June) and gradually decreased from July (partially spawned stage) to November (spent/inactive stage). Changes in total protein contents showed a negative correlationship between the adductor muscle and visceral mass tissues (r = -0.499, p = 0.099). Total lipid contents in the adductor muscle tissues reached the maximum in January (the inactive stages) and their contents gradually decreased from February. Their contents in the visceral mass tissues, however, reached the maximum in June (late active and ripe stage) and gradually decreased from July (the partially spawned stage). On the whole, total lipid contents showed a negative correlationship between the adductor muscle and visceral mass tissues (r = -0.631, p < 0.05). Therefore, These results indicate that the nutrient contents of the adductor muscle and visceral muscle tissues change in response to gonadal energy needs. Glycogen contents in the adductor muscle tissue reached the maximum in March (early and late active stages) and decreased from July to September (partially spawned stage). while their contents in the visceral mass tissues reached the maximum in June (late active and ripe stages) and gradually decreased from July (partially spawned stage). Thereafter, their levels gradually increased in November (spent/inactive stage). On the whole, changes in glycogen contents appeared negative correlationship between the adductor muscle and visceral mass tissues. However, they showed no significant different (r = -0.307, p = 0.331).
The seven selected primers BION-13, BION-29, BION-61, BION-64, BION-68, BION-72 and BION-80 generated the total number of loci, average number of loci per lane and specific loci in Meretrix lusoria (ML), Saxidomus purpuratus (SP) and Cyclina sinensis (CS) species. Here, the complexity of the banding patterns varied dramatically between the primers from the three venerid clam species. The higher fragment sizes (> 1,000 bp) are much more observed in the SP species. The primer BION-68 generated 21 unique loci to each species, which were ascertaining each species, approximately 150 bp, 300 bp and 450 bp, in the ML species. Remarkably, the primer BION-80 detected 7 shared loci by the three clam species, major and/or minor fragments of sizes 500 bp, which were matching in all samples. As regards average bandsharing value (BS) results, individuals from CS clam species (0.754) exhibited higher bandsharing values than did individuals from SP clam species (0.607) (P < 0.05). In this study, the dendrogram obtained by the seven oligonucleotides primers indicates three genetic clusters: cluster 1 (LUSORIA01-LUSORIA07), cluster 2 (PURPURATUS08-PURPURATUS14), cluster 3 (SINENSIS15-SINENSIS21). Among the twenty one venerid clams, the shortest genetic distance that displayed significant molecular differences was between individuals 18 and 20 from the CS species (genetic distance = 0.071), while the longest genetic distance among the twenty-one individuals that displayed significant molecular differences was between individuals LUSORIA no. 02 and PURPURATUS no. 09 (genetic distance = 0.778). Relatively, individuals of SP venerid species were appropriately closely related to that of CS species, as shown in the hierarchical dendrogram of genetic distances. Eventually, PCR fragments exposed in the present study may be worthwhile as a DNA marker the three venerid clam species to discriminate.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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