• 한국산학기술학회논문지
• /
• 제10권6호
• /
• pp.1287-1291
• /
• 2009

시안화물을 포름아미드로 변환시키는 nitrilase의 일종인 시안 수화효소 (cyanide hydratase, CHT) 를 진균류인 Neurospora crassa 와 Aspergillus nidulans로부터 유전자 조작을 통하여 His에 태그 또는 언태그된 형태로 대장균에 형질변환시켜 발현하였다. 발현된 효소를 고정 metal affinity chromatography로 정제하였다. 정제된 효소들의 pH 안정성, 동력학적 매개변수의 값을 검토하였다. 실험 결과 N. crassa 의 CHT가 50% 정도 더 넓은 pH 안정 범위를 가졌고 3배 가량 turnover rate도 높았다. 반면 A. nidulans CHT의 Km 값 (효소포화 용량)이 N. crassa CHT보다 더 크게 나타났다. 두 진균류에서 CHT의 유도발현은 질소성분과 상관없이 KCN에 의해 가능하였으며, 생분해 실험결과 N. crassa CHT에 의해 최대 82%/h의 시안분해가 가능하였다.

• 한국환경과학회지
• /
• 제17권11호
• /
• pp.1221-1226
• /
• 2008

A variety of fungal species are known to degrade cyanide through the action of cyanide hydratase, a specialized nitrilases which hydrolyze cyanide to formamide. This work is a report on two unknown and un-characterized members from Neurospora crassa and Aspergillus nidulans. Recombinant forms of three cyanide hydratases (CHT) originated from N. crassa, Gibberella zeae, and A. nidulans were prepared after their genes were cloned with N-terminal hexahistidine purification tags, expressed in E. coli and purified using immobilized metal affinity chromatography. These enzymes were compared according to their pH activity profiles, and kinetic parameters. Although all three were similar, the N. crassa CHT has the widest pH range of activity above 50% and highest turnover rate ($6.6{\times}10^8min^{-1}$) among them. The CHT of A. nidulans has the highest Km value of the three nitrilases evaluated in here. Expression of CHT in both N. crassa and A. nidulans were induced by the presence of KCN, regardless of any presence of nitrogen sources. These data can be used to determine optimal procedures for the enzyme uses in the remediation of cyanide-containing wastes.