Cymbidium의 mild mosaic 병주로부터 각종 초본식물에 즙액접종되는 소구형 바이러스를 분리하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 본 바이러스를 즙액접종하였을 때 C. amaranticlor, C. quinoa, Cymbidium spp., Dianthus caryophyllus는 전신감염, C.ficifolium, Gomphrean globosa는 국부감염되었다. 2. 본 바이러스는 Myzus persicae로 전반되지 않고, 영양번식기관에 의하여 전반되었다. 3. 조즙액중의 불활성화한계는 내열성이 $90^{\circ}C$ (10분)이고 내희석성이 $10^{-6}$, 내보존성이 60일 $(20^{\circ}C)$이였다. 4. 본 바이러스는 C. amaranticolor병엽을 동결후, chlorform으로 청등하여 분획원심분리와 sucrose density gradient 원심분리법으로 순화하였다. 5. 순화시료의 자외선흡수곡선은 최고 261nm, 최저 243nm이고 260/280=1.72, 최고/최저=1.26의 핵단백에 의한 흡수곡선을 나타냈다. 침강계수는 $S_{20,w}=126$의 수치가 얻어졌다. 6. 本 바이러스의 항혈청은 침강반응혼합법에 의해 2,025배의 역가를 나타냈고, 한천내확산법에 의한 시험에서 CarMV와 혈청학적관계가 있는 것으로 나타났다. 7. 本 바이러스의 형태는 직경 약 28nm의 소구형(다면체) 입자이고, empty particles도 소수 관찰되었다. 5. 본 바이러스에 감염된 C. amaranticolor, C. ficifolium, Cymbidium spp.의 병엽초박절편을 전자현미경으로 관찰하였든 바, 각종 세포의 세포질, 액포 및 도관내에 소구형 입자가 산재 또는 집괴의 소재양식으로 확인되었다. 9. 이상의 결과를 종합해서 본 바이러스를 Cymbidium mild mosaic virus로 명명한다.
더덕 뿌리 내에 함유되어 있는 항산화효소를 생육환경에 따라 조사하기 위하여 경북 서벽지역의 1 2년생 밭더덕, 야생더덕 및 논에서 재배되는 1 2년생 더덕을 채취하여 사용하였고, 부위별 비교는 각 더덕 뿌리를 upper, middle, low로 나누어서 사용하였다. 이들을 O radical caseade인 SOD, POD, CAT activity를 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. SOD 활성은 밭재배조건의 경우 1년생보다는 2년생이, 논재배시는 1년생이 2년생보다는 높은 활성을 나타내었으며, 야생종의 비활성이 96069u/mg protein으로 가장 높은 활성을 나타내었다. 부위별로 비교해보면 재배종은 upper>middle>lower 순으로 논재배시는 low>upper>middle 순으로 야생종은 middle>lower, upper 순으로 생육환경에 따라 차이를 나타내었다. 2. POD 비활성(u/mg protein)은 년근수가 높을수록 활성은 증가하며, 야생지역이 68 u/mg protein로 가장 높은 활성을 나타내었다. 부위별로는 middle>lower>upper 순으로 활성이 나타났으며, 서벽야생의 middle 부분이 85 u/mg protein를 나타내었다. 3. CAT 활성은 POD 활성과는 달리 년근수가 낮을수록 높게 나타났으며 밭재배지와 야생지의 활성은 비슷하며 논재배지는 상대적으로 그 활성이 낮았다. 부위별로는 upper>low>middle 순으로 upper 부위가 상당히 높은 활성을 나타내며, 서벽재배 1년생의 upper가 53.59 u/mg protein으로 가장 높게 나타났다. 4. MS1D(MS+2.4-D 1ppm)에 배양한 배양세포의 항산화효소의 활성은 CAT는 1564, POD는 30, SOD는 22200 u/mg protein로 생체에 비해 낮은 활성을 나타내었다.
인삼성분 중 ginsenoside-Rb$_2$에 의한 LDL receptor발현 증가의 기전을 HepG$_2$세포에서 관찰하였고 이를 lovastatin과 비교하였다. 콜레스테롤 투여에 의하여 억제된 LDL receptor mRNA발현이 ginsenoside-Rb$_2$에 의하여 다시 증가하였고 이는 lovastatin에 의한 증가 효과보다 뛰어났다. SREBP mRNA의 발현 또한 콜레스테롤 투여에 의하여 억제되나 ginseonside-Rb$_2$에 의하여 발현이 증가하였고 이는 lovastatin에 의한 효과와 비슷하였다. 세포에 투여한 ginsenoside-Rb$_2$의 농도에 비례하여 SREBP-1 mRNA의 발현이 증가하였으며 ginsenoside-Rb$_2$의 대사체인 compound K를 투여한 경우에도 SREBP-1 mRNA가 비슷한 양상으로 혹은 더 많이 발현되었다. 따라서 ginsenoside-Rb$_2$에 의한 LDL receptor의 발현 증가는 SREBP의 발현 증가 때문이라고 설명할 수 있다. 즉 ginsenoside-Rb$_2$에 의한 SREBP 발현 증가는 콜레스테롤 투여에 의하여 억제된 LDL receptor발현을 증가시켜 결과적으로 혈중의 콜레스테롤을 효과적으로 제거하는 것으로 판단된다.
Essential and non-essential amino acids supplemented to culture medium stimulate mammalian embryo development in vitro. Amino acids such as glycine, taurine and alanine are concentrated in the lumen of oviduct and uterus and it can he thought that these amino acids may have physiological role on fertilization and embryo development. Our aim of this experiment was to investigate the effects of essential and non-essential amino acids, taurine or glycine supplemented to fertilization medium on the cleavage and subsequent in vitro development of bovine oocytes matured and fertilized in vitro. Immature oocytes were obtained from slaughtered Holstein cows and heifers and matured in TCM199 containing 10% fetal calf serum, 2.5 $\mu$g /mL of FSH and LH and 1 $\mu$g / mL of estradiol with granulosa cells in vitro. After maturation, oocytes were coincubated with sperm in fertilization medium supplemented with Minimum Essential Medium (MEM) essential and non-essential amino acids, taurine (3.75 mM) or glycine (10 mM) for 30 hours in vitro. Inseminated oocytes were cultured in synthetic oviduct fluid medium (SOEM) containing MEM essential, non-essential amino acids and 1 mM glutarnine up to 8 days after fertilization.Supplementation of fertilization medium with MEM essential and non-essential amino acids lowered significantly (p<0.05 and p<0.001) the cleavage rate after 30 hours of IVF (53.3%) and at Day 3 (62.7%: Day 0: the day of I VF) compared to control (64.3% and 77.3%, respectively). Subsequent developmental rates to morulae (Mo) and expanding blastocysts (ExBL) also significantly decreased (p<0.001 and p<0.05 for Mo and ExBL) when oocytes were coincubated with sperm in the medium containing MEM amino acids. Taurine added to fertilization medium have not increased the cleavage rate over the control, whereas glycine showed significantly lower (p<0.01) cleavage rate at Day 3 than that of taurine, but there was no significant difference in the developmental rates to Mo and ExBL of bovine embryos irrespective of the supplementation of taurine or glycine to fertilization medium. In conclusion, supplementation of fertilization medium with essential and non-essential amino acids, taurine or glycine has no beneficial effect on in vitro cleavage and development of bovine oocytes matured and fertilization in vitro.
Pyracantha is a genus of thorny evergreen large shrubs in the family of Rosaceae, with common names Firethorn or Pyracantha. It's extract has also been used in cosmetics as a skin-whitening agent and functioning through tyrosinase inhibition. Recent studies have shown that pyracantha extract possesses antioxidant activities and may significantly improve lipoprotein metabolism in rats. Although the mode of action of Pyracantha extract is not fully understood, a strong relationship was observed between antioxidant and apoptosis in some types of cells. Thus, the aim of this study was to evaluated the effect of pyracantha extract on blastocysts formation and their quality of the porcine parthenogenetic embryos. After parthenogenetic activation by chemicals, presumptive porcine parthenogenetic embryos were cultured in PZM-3 medium supplemented with extracts of pyracantha leaf, stalk and root for 6 day (1, 5 and $10{\mu}g/ml$, respectively). In our results, the frequency of blastocyst formation in pyracantha root extract ($5{\mu}g/ml$) treated group had increased that of other groups. Furthermore, blastocysts derived from pyracantha root extract ($5{\mu}g/ml$) treated group had increased the total cell numbers and reduced apoptotic index. Blastocyst development was significantly improved in the pyracantha root extract ($5{\mu}g/ml$) treated group when compared with the $H_2O_2$ treated group (p<0.05). Subsequent evaluation of the intracellular levels of ROS in pyracantha root extract ($5{\mu}g/ml$) treated groups under $H_2O_2$ induced oxidative stress were decreased (p<0.05). In conclusion, our results indicate that treatment of pyracantha root extract may improve in vitro development of porcine parthenogenetic embryos through its antioxidative and antiapoptotic effects.
꾸지뽕나무 (Cudrania tricuspidata)에 미량으로 함유되어 있는 신규 생리활성물질인 Gericudranin를 기내 배양세포에서 효율적으로 생산하는 시스템을 확립하기 위하여 캘러스 유도 및 여러 가지 배양조건 규명에 관한 실험을 수행하였다. 캘러스는 1.0 mg/L NAA, 0.1 mg/L kinetin, 3% sucrose가 함유된 B5 배지에 배양된 배축에서 효율적으로 유도되었다. Gericudranin 생산과 세포생장에 관여하는 여러 가지 요인을 조사한 결과, 세포생장을 위해서는 1.0mg/L NAA, 0.1 mg/L zeatin과 5% sucrose가 함유된 WPM배지가 좋았고, Gericudranin 생산을 위해서는 무기염 농도가 1/8로 희석된 MS배지, 1.0 mg/l NAA, 0.1 mg/l zeatin과 5% sucrose 처리구가가장 좋았다 Gericudranin A의 함량 (2200 $\mu\textrm{g}$/g dry wt)은 3% sucrose, 1.0 mg/L IBA가 함유된 1/2MS배지에서 모식물체의 수피의 함량보다 약 10배 높았으며, Gericudranin B의 함량 (2350 $\mu\textrm{g}$/g dry wt)은 sucrose 5%를 함유한 1/2 MS 배지에서 수피의 함량보다 약 3배 높았다.
항암제와 세포독성과의 관계를 알아보고자 인혈배양 임파구에서 SCE빈도, 세포분열지수 및 세포분열주기변동을 조사한 결과는 다음과 같다. 1) 항암제 농도증가에 따라 SCE빈도는 대조군에 비해 유의하게 증가되었으며 (P<0.01), methotrexate에서는 유의성이 인정되지 않았다(P>0.05). 2) 세포분열지수는 cyclophosphamide를 제외한 공시 항암제에 대하여 현저하게 감소되었다. 3) 항암제의 농도증가에 따라 세포분열주기는 현저하게 지연되었으며 고농도에서는 현저한 세포분열 억제로 정상적인 세포분열이라 할 수 없는 강한 세포독성효과를 보였다. 이 결과는 알킬계 약제가 다른 항암제에 비해 강한 SCE 유발제이며 SCE유발과 세포분열주기 지연과는 깊은 상관성이 인정되지만 methotrexote경우에서는 그 상관성을 인정할 수 없었다. 이는 SCE유발과 세포분열주기지연이 서로 다른 기전에 의해서도 나타남을 제시해주고 있다.
신장 근위세뇨관세포들은 사구체에서 여과된 물질의 재흡수, 분비 및 대사에 관여하는 여러 호르몬들의 수용체들을 가지고 있다. 이들중에서 dopamine(DA)과 angiotensin II(ANG II)가 $Na^{+}/H^{+}$ 상호운반계 조절에 중요한 역할을 하고 있다. 본 연구는 초대배양한 토끼 신장 근위세뇨관세포의 $Na^+$ uptake에 있어서 DA과 ANG II의 상호관계를 알아보고자 실시하였다. DA은 농도의존적으로 $Na^+$ uptake를 유의성 있게 억제하였다($10^{-6}M$ ; $83.2{\pm}7.2%$, $10^{-3}M$ ; $67.2{\pm}3.8%$ vs. control)(p<0.05). $DA_1$ 작동제(SKF 38393, $10^{-6}M$)는 대조군의 $81.4{\pm}6.7%$ 까지 $Na^+$ uptake를 유의성 있게 억제하였으나(p < 0.05) $DA_2$ 작동제는 영향을 미치지 않았다. $DA_1$ 길항제(SCH 23390, $10^{-6}M$)에 의해 DA의 $Na^+$ uptake 억제효과는 차단되었으나 $DA_2$ 길항제(spiperone, $10^{-6}M$)에 의해서는 영향을 받지 않았다. DA과 대조적으로 $10^{-11}M$ ANG II는 $AT_1$ 수용체를 통하여 대조군의 $120.7{\pm}4.9%$까지 $Na^+$ uptake를 유의성 있게 촉진하였다. (p < 0.05). DA 및 $10^{-11}M$ ANG II를 병합처리하였을 때 DA은 농도의존적으로 ANG II에 유도된 $Na^+$ uptake 촉진효과를 유의성 있게 차단하였다(p<0.05). 한편 ANG II에 의해 유도된 $Na^+$ uptake촉진작용은 $DA_1$ 또는 $DA_2$ 작동제에 의해 차단되었으나 DA에 의한 차단 효과는 $DA_1$ 및 $DA_2$ 길항제를 병합처리하였을 때만 반전되었다. 결론적으로 DA은 $DA_1$ 수용체를 통하여 $Na^+$ uptake를 억제하였으나 ANG II에 의한 $Na^+$ uptake 촉진작용의 억제에는 $DA_1$ 및 $DA_2$ 수용체 모두가 관여하였다.
신장 근위세뇨관세포들은 사구체에서 여과된 물질의 재흡수, 분비 및 대사에 관여하는 여러 호르몬들의 수용체들을 가지고 있다. 이들중에서 norepinephrine(NE)과 angiotensin II(ANG II)는 $Na^{+}/H^+$ 상호운반계를 조절함으로써 혈압조절에 관여하는 것으로 알려져 있으나 이들의 상호관계에 대해선 연구보고가 많지 않다. 본 연구는 초대배양한 토끼신장 근위세뇨관세포를 이용한 $Na^+$ uptake 실험을 통하여 NE이 어떠한 수용체를 통하여 $Na^{+}/H^+$ 상호운반계를 조절하는지 그리고 이러한 작용에 있어서 NE과 ANG II의 상호관계를 알아보고자 실시하였다. NE(>$10^{-9}M$)은 $Na^+$ uptake를 유의성 있게 증가시켰다($10^{-9}M$ NE : $27{\pm}4%$ increase vs. Control;p < 0.05). $\alpha$ 길항제(phentolamine, $10^{-10}M$)는 NE($10^{-9}M$)에 의해 유도된 $Na^+$ uptake를 유의성 있게 차단하였으나 (phentolamine+NE : $29{\pm}5%$ inhibition vs. NE ; p〈 0.05), ${\alpha}_1$ (pra-zosin, $10^{-10}M$) 및 ${\alpha}_2$ 길항제(yohimbine, $10^{-10}M$)는 부분적으로 차단하였다. ${\beta}$ 길항제(propra-nolol, $10^{-10}M$)도 역시 NE에 의해 유도된 $Na^+$ uptake를 유의성 있게 차단하였으나(propranolol+NE : $24{\pm}6%$ inhibition vs. NE ; p< 0.05), ${\beta}_1$(atenolol, $10^{-10}M$) 및 ${\beta}_2$ 길항제(butoxamine, $10^{-10}M$)는 부분적으로 차단하였다. 이러한 결과들은 NE에 의해 유도된 $Na^+$ uptake 증가작용은 ${\alpha}$(${\alpha}_1$ 및 ${\alpha}_2$ )와 ${\beta}$(${\beta}_1$ 및 ${\beta}_2$) 수용체 모두를 통하여 일어난다는 것을 시사해주고 있다. ANG II($10^{-11}M$) 또는 NE(${\alpha}_1$, ${\alpha}_2$, ${\beta}_1$, ${\beta}_2$ 작동제) 단독처리군의 $Na^+$ uptake는 대조군에 비해 유의성 있게 증가하였으나 (ANG II : $23{\pm}9%$ increase vs. Control; p < 0.05), 병합처리시 상승작용은 나타나지 않았다. ${\alpha}$ 또는 ${\beta}$ 길항제 처리시 NE 및 ANG II에 의해 유도되었던 $Na^+$ uptake 증가는 유의성 있게 차단되었다(phentolamine+NE+ANG II : $25{\pm}3%$ inhibition, propranolol+NE+ANG II : $24{\pm}6%$ inhibition vs. NE+ANG II, respectively ; p〈 0.05). 이 결과들은 $Na^+$ uptake에 있어서 ${\alpha}$(${\alpha}_1$ 및 ${\alpha}_2$)와 ${\beta}$(${\beta}_1$ 및 ${\beta}_2$) 수용체와 ANG II의 관련성을 시사해 준다. 결론적으로 토끼 신장 근위세뇨관세포에서 NE은 ${\alpha}_1$, ${\alpha}_2$, ${\beta}_1$ 및 ${\beta}_2$ 수용체를 통하여 $Na^+$+ uptake를 증가시켰으며 이들 수용체는 ANG II $Na^+$ uptake 증가작용에 관여하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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