• 화훼연구
• /
• 제17권2호
• /
• pp.114-120
• /
• 2009

Pteris cretica 'Wilsonii'의 대량생산에 적합한 배양환경을 구명하기 위하여 연구를 수행하였다. 포자는 7주 안에 모두 발아하였다. Knop과 Hyponex배지에서 전엽체 증식이 왕성하였지만, 전엽체의 생육에는 Hyponex 배지가 더 유용하였다. MS배지에서는 전엽체가 괴사하였으며, 질소급원과 sucrose의 농도를 조절한 경우에도 sucrose 무첨가구를 제외한 모든 첨가구에서 전엽체가 괴사하였다. Sucrose 1%와 agar 0.6%를 첨가한 Hyponex배지가 전엽체의 증식과 생육에 가장 적합한 것으로 나타났다. 접종방법을 달리한 결과, Hyponex배지에서는 다져서 접종하는 전엽체의 증식 및 생육에 효과적이었지만, MS배지에서는 전엽체의 군집을 4등 분하여 접종한 처리구에서 전엽체의 증식 및 생육이 우수하였다. 고체배지에서 배양하는 것이 액체배지에서 배양하는 것보다 효과적이었다. 액체배양은 전엽체의 괴사를 유도하였다. 액체진탕배양한 전엽체는 생육은 우수하였으나 고체배양한 전엽체에 비하여 증식이 억제되었다.

• 대한수의학회지
• /
• 제38권2호
• /
• pp.359-365
• /
• 1998

This study was conducted to isolate the protozoan parasite Babesia gibsoni by intraerythrocytic culture method of micoraerophilous stationary phase(MASP) and evaluate the possibility of application for the detection of B gibsoni in canine babesiosis. Also, indirect fluorescent antibody test(IFAT) and thick blood smear(giemsa stain), direct light microscopy (DLM), as control diagnostic tests, were conducted to compare diagnostic effects between MASP, IFAT and DLM. The results obtained from this study were summarized as follows. The protozoan parasite B gibsoni multiplied in 24-well polystyrene plate containing 1.2ml of canine red blood cell suspension in RPMI 1640 medium(pH 7.0) which is contained 20~40% normal canine serum(NCS) under the MASP condition of 5% $CO_2$ and 95% air at $37^{\circ}C$ incubator. Under the above MASP culturing system the percentage of parasitized erythrocytes(PPE) after incubation for 9 days reached the peak. The levels of PPE in MASP culture were shown more higher by exchanging the medium at 24 hour intervals. The parasite were purely isolated from MASP culture of canine red blood cells collected from dogs(pit bullterrier) infected with B gibsoni naturally. Among the total of 83 heads of pit bullterrier blood samples the positive rate was 32 heads(38.5%) in DLM, 45 heads(54.2%) in IFAT and 42 heads(50.6) in MASP culture. In negative cases of IFAT and DLM the isolation rates of B gibsoni by MASP culture were 16 heads(42.1%) of 38 heads and 16 heads(28.6%)% of 56 heads, respectively. From this study it was suggested that MASP culture method by RPMI 1640 medium was a reliable and useful diagnostic test for the diagnosis of B gibsoni infections in canine babesiosis.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제15권2호
• /
• pp.129-136
• /
• 2000

This study was carried out to investigate the effect of biological factors on the in vitro production(IVP) of bovine oocytes for development of simple culture methods and medium. Oocytes from the slaughterhouse ovaries were matured and fertilized using general protocol and this study was examined if there were necessary to co-culture, media change, media type and embryo density. This results were as follows: 1. The development rate according to co-culture with cumulus cells and non co-culture as drop culture was not significantly different in cleavage (68.9 vs 71.7%), 8-cell stage (41.2 vs 44.1%) and blastocyst stage (12.2 vs 13.8%), respectively (p<0.05) 2. The blastocyst development rates in YS and CRIaa were higher than that in TCM199 (12.4, 10.4$ vs 3.7%), but the cleavage (69.0, 77.8 and 61.0%) and 8-cell stage (31.7, 37.0 and 35.7%) development accoring to YS, TCM199 and CRIaa ws not significantly different, respectively (p<0.05). 3. There was no significantly different in cleavage (62.6, 59.5 and 61.2%), 8-cell(34.7, 37.9 and 34.0%) and blastocyst (9.5, 11.6 and 12.8%) development among medium change time as control, Group I and Group II, respectively (p<0.05). 4. Blastocyst formation of 8-cell stage according to embryo density was not significantly different in 1, 10 and 25 embryos (27.3, 22.5 and 34.0%), respectively (p<0.05). These results indicated that simple culture system could reduce bovine IVP embryos as drop culture as non co-culture system, high density embryo (25 embryos/50 $\mu$1 drop). YS defined medium and no medium change for whole culture period, although other biological factors need to examine in order to produce efficient IVP bovine embryos.

• 한국가축번식학회지
• /
• 제25권3호
• /
• pp.243-250
• /
• 2001

본 연구는 미성숙 돼지 난포 난자의 체외성숙에 있어서 catalase (0.1 mg/$m\ell$)와 xanthine (5 mM)의 역할에 대하여 검토하였다. 그 결과, 체외에서 성숙배양 48시간 후 metaphase-II 단계로 발육한 난자의 비율은 xanthine (54%) 첨가 보다는 대조구 (72%), catalase (73%) 및 catalase+xanthine (70%) 첨가구에서 유의적으로 높은 성숙율을 나타냈다 (P＜0.05). 한편, 체외에서 30시간 동안 성숙배양한 경우 모든 실험구에서 성숙율의 유의적인 차이는 인정되지 않았으나, 성숙배양 36, 42 및 48시간 후 xanthine의 첨가 여부에 관계없이 catalase 무첨가 (29~50%) 보다는 첨가시 (49~70%)에 유의적으로 높은 성숙율을 나타냈다 (P＜0.05). 체외에서 xanthine의 첨가 또는 무첨가시 배양시간의 연장이 난자의 성숙에 미치는 영향을 검토한 결과 배양 72시간에서 높은 성숙율을 나타냈으며, 퇴행난자의 비율은 배양 120시간에서 catalase무첨가(47%)에 비하여 첨가시 (28%) 유의적으로 낮게 나타났으나 xanthine이 첨가된 배양액내에서 catalase첨가유무에 의한 차이는 인정되지 않았다. 또한 xanthine을 첨가하여 72시간 배양한 경우 단위발생란이 처음으로 관찰되었지만 catalase의 첨가 유무에 의한 차이는 인정되지 않았지만 배양시간이 길어짐에 따라 발생비율이 증가하였다. 이와 같은 결과에서 돼지 난포난자는 catalase와 xanthine을 첨가한 배양액내에서 배양 72시간까지 성숙율이 증가할 수 있으며, 배양기간의 연장시 catalase에 의하여 난자의 퇴행을 억제하며 단위발생란의 증가를 가져오는 것으로 생각된다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제31권4호
• /
• pp.362-367
• /
• 2003

운지버섯을 희석 감귤농축액과 일반 합성배지에서 각각 배양한 배양물을 열탕추출하고 여과하여 얻어진 버섯 배양추출물과 버섯을 접종하지 않은 희석 감귤농축액 자체에 대한 항산화 활성, 아질산 제거능, 그리고 항암활성을 조사 비교하였다. DPPH 전자공여를 이용한 항산화 활성에서 희석 감귤농축액에서 얻어진 배양추출물(Extract-I)은 89%, 일반 합성배지에서 얻어진 배양추출물(Extract-II)은 66%, 접종하지 않은 희석 감귤농축액 자체(Extract-III)는 22%의 항산화 활성을 나타내었다. 아질산 제거능은 배양추출물 모두 산성 조건일수록 증가하였으며, Extrac-I은 67%, Extract-II는 54%, 그리고 Extract-III는 34%의 아질산 제거능을 보였다. HeLa, PC-3, HepG2 및 A-549 세포에 대한 항암활성을 조사한 결과, Exract-I는 각각의 암세포들에 대해서 순차적으로 75%, 82%, 55%, 그리고 82%의 높은 생육 저해 활성을 보였다. 반면에 Extract-II는 HeLa cell에 대해서만 66%의 생육저해를 보였고, Exoact-III는 모든 암세포의 생육을 저해하지 않는 것으로 조사되었다. 따라서 운지버섯을 희석 감귤농축액에 배양함으로서 일반 합성배지에서 배양하거나 감귤농축액 자체 보다 항산화 활성과 항암활성을 현저히 증가시킬 수 있었다.

• 한국축산시설환경학회지
• /
• 제6권3호
• /
• pp.201-209
• /
• 2000

수평아리 사체를 이용한 효모의 최적 배양 조건과 효모배양물이 육계의 성장에 미치는 영향을 조사하였다. 수평아리 추출물의 단백질 농도는 72시간 동안 추출되었을 때 가장 높았으며, 수평아리 사체에서 추출물을 얻기 위한 물의 첨가 비율은 수평아리 사체의 무게에 1.5배(v/w ratio)가 적당하였다. 수평아리 사체의 추출물에서 지방은 효모의 성장에 영향을 미치지 못하였다. 수평아리 사체의 추출물과 4% sugarcane molasses로 구성된 SCELP2 배지는 1% yeast extract, 2% bacto pepton 그리고 2% glucose로 구성된 YEPD 배지보다 효모수가 26% 더 증가하였다. 또한 SCELP2 배지에 4% 폐이스트를 첨가한 SBYW2 배지는 SCELP2 배지보다 효모수가 8% 증가하였다. SBYW2 배지에서 배양된 효모배양물을 5주 동안 육계에 급여한 결과 종체량은 4% 첨가구가 대조구보다 9% 증가하였다. 따라서 본 연구 결과 부화부산물로 발생되는 수평아리 사체는 사료용 효모배양물을 생산하기 위한 효모배양 배지의 질소원으로서 이용될 수 있음을 의미한다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제11권2호
• /
• pp.186-192
• /
• 2001

A primary culture of human fetal hepatocytes was obtained through a therapeutic abortion process at 26 weeks of gestation period. More than $10^8$ cells were seeded on a plastic plate. These hepatocytes were infected with hepatitis B virus (HBV). The HBV was purified from serum of one chronic HBV carrier. Transformed hepatocytes were subcultured in a 10% FBS-supplemented medium. The morphology of the transformed cell was epithelial-like. The cells from the first pass showed signs of early proliferation and had a latent period of more than 3 months after 6-7 passages. After the rest period, the transformed cell proliferated actively and they were subcultured every three days. Transformed hepatocytes were characterized by detection of the HBV transcript by RT-PCR. The secretion of virions from transformed cells was investigated by PCR with the cell medium. Two types of virions secreted into the culture medium were examined by using the transmission electron microscope. Another approach to study the secretion of virions in to culture medium was carried out with HBV antibody. HBsAg was detected in the culture medium of transformed cells using ELISA and Western blot analyses. These data suggested that the human fetal hepatocyte cell line has been established by infection of HBV, in which this cell line secreted viral particles into the culture medium.

• 한국자원식물학회지
• /
• 제19권2호
• /
• pp.265-272
• /
• 2006

본 연구는 포자체 배양을 통하여 참쇠고비의 효율적인 번식방법을 구하고자 수행되었다. 배양절편의 기원(근경, 엽병, 엽신)과 절편의 균질화가 신초 계생에 미치는 영향을 조사한 결과, 오직 근경 조직에서만 기관발생능력이 관찰되었고, 식물체 재생은 배양재료를 균질화함으로써 더욱 촉진되었다. MS배지의 무기물 농도를 2배로 첨가한 배지에서 신초의 증식과 생장이 활발히 이루어졌다. 신초 재생에 적합한 배지의 질소함량은 MS배지의 1/2배 수준 이었고, 적정 sucrose농도는 1%였다. 또한 배지에 $NaH_2PO_4$를 첨가함으로써 재생된 식물체의 생육이 전반적으로 촉진되었다. 근경절편의 기관형성능력은 kinetin과 IBA를 혼용 처리함으로써 촉진되었으며, $0.1\sim0.2%$의 활성탄과 생장조절물질을 혼용 처리한 결과, 다수의 싹이 뭉친 듯이 보이는 primordia 형태의 발달이 억제되었고, 포자체의 정상적인 형태형성이 향상되었다.

• 식물조직배양학회지
• /
• 제28권3호
• /
• pp.123-128
• /
• 2001

인삼 callus의 기내배양에 의해서 항암물질을 대량생산하기 위한 연구의 일환으로 인삼 우수계통으로부터 기내에서 callus를 유기하여 polyacetylene 고함유 세포주를 선발하고, 인삼 callus의 polyacetylene 생산에 미치는 식물호르몬 및 배지의 영향을 조사하였다. 식물호르몬 CPA가 첨가된 MS배지에서 유도된 인삼 우수계통 callus에서는 polyacetylene 중에서 panaxynol은 TLC와 GC에 의해서 전혀 검출할 수 없었으나, callus에 따라서는 panaxydol이 형성됨을 확인할 수 있었다. 특히, 강력한 항암효과를 가지고 있는 panaxydol은 우수계통 callus 18종 중에서 5종이 형성하였으며, 30201계통 callus에서 가장 많이 검출되었다. 또한 인삼 10301계통 callus는 CPA가 단독으로 첨가된 배지에서 panaxydol을 생성하지 못하였으나, CPA 2 mg/L와 BA 0.05 mg/L 첨가구에서는 callus의 생장도 양호하였으며, panaxydol도 생성하였다. 인삼 callus의 생장과 panaxydol의 합성에는 MS배지보다 SH 배지가 더 양호하였으며, NAA와 sucrose는 전혀 영향을 미치지 않았다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
• /
• 제24권2호
• /
• pp.239-245
• /
• 2011

This study was conducted to determine the effects of excess vitamin A on alkaline phosphatase (ALP) activity, contents of calcium-binding protein (CaBP), bone gla-protein (BGP) in culture medium and CaBP mRNA expression in chicken osteoblasts in vitro. Osteoblastic cells in the tibia from 1-day-old Arbor Acre broiler chickens were isolated using enzyme digestion. The subconfluenced cells were divided into eight treatments with six replicates in each treatment and cultured in a medium containing either vehicle or different levels of vitamin A (0, 0.2, 0.6, 1.0, 2.0, 5.0, 10.0 and $20.0\;{\mu}g$/ml), and the control received an equivalent volume of ethanol. The incubation lasted 48 h. The results showed that vitamin A down-regulated ALP activity in the culture medium as well as CaBP mRNA expression of osteoblasts in a linear dose-dependent manner (p = 0.124 and p<0.10, respectively), and suppressed the contents of BGP and CaBP in the culture medium in a quadratic dose-dependent manner (p<0.05 and p<0.10, respectively) with increasing addition of vitamin A. The addition of 0-$0.2\;{\mu}g$/ml vitamin A to the culture medium increased ALP activity, BGP and CaBP contents as well as CaBP mRNA expression compared with other groups, but positive effects of vitamin A tended to be suppressed when vitamin A was increased to $1.0\;{\mu}g$/ml, and adverse effects occurred when vitamin A was increased to 10.0-$20.0\;{\mu}g$/ml. These results implied that there was a threshold level of vitamin A inclusion beyond which inhibitory effects occurred, and the mechanism by which overdose of vitamin A reduced bone growth in chickens was probably reduced osteoblastic cell activity, and inhibited expression of CaBP mRNA and CaBP secretion.