• Journal of Pharmaceutical Investigation
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• 제28권1호
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• pp.25-33
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• 1998

Intestinal absorption of ${\beta}-lactam$ antibiotics and angiotensin converting enzyme(ACE) inhibitors has been shown to use the carrier-mediated transport system. In vitro experiments have established that the efficacy of uptake by enterocytes depends on an inwardly directed proton gradient. It was suggested that benazepril was mediated by tripeptide transport system and that amoxicillin was transported by dipeptide transport carrier. The aim of this study is to assess the influence of amoxicillin on the intestinal absorption of benazepril using in vitro diffusion chamber and in situ single pass perfusion technique in the rat in order to elucidate whether the above transport systems are competitive or not. We obtained the gastrointestinal pemeability coefficient of amoxicillin, benazepril and both of them using in vitro diffusion chamber. And also the gastrointestinal absorption clearance of amoxicillin, benazepril and both of them using in situ single-pass perfusion method at steady state were calculated. Amoxicillin and benazepril were analyzed by HPLC. The results by the use of diffusion chamber in vitro indicated that the apparent intestinal permeability coefficient of benazepril was significantly(p<0.01) decreased by amoxicillin(45.2%) and vice versa significantly(p<0.01) decreased(89.1%). The results by the in situ gastrointestinal single-pass perfusion method indicated that the intestinal absorption clearance of benazepril was significantly(p<0.05) decreased by amoxicillin (40.2%) and vice versa significantly(p<0.05) decreased(54.8%). These results might suggest that they share the same peptide carrier pathway for oral absorption.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제9권6호
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• pp.798-803
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• 1999

Prolyl endopeptidase [PEP; EC 3.4.21.26], a serine protease which is known to cleave peptide bonds on the carboxy side of a proline residue, plays an important role in the degradation of proline-containing neuropeptides that have been suggested to participate in learning and memory processes. An abnormal increase in the level of PEP, which can lead to generation of $A{\beta}$, is also suggested to be involved in Alzheimer's type senile dementia. In the course of screening PEP inhibitors from Basidiomycetes, the mushroom Polyozellus multiplex exhibited a high inhibitory activity against PEP. Two active compounds were isolated from the ethyl acetate soluble fraction by consecutive purification, using silica gel, Sephadex LH-20, and Lobar RP-18 chromatography. The chemical structures of these compounds were identified as thelephoric acid and 12-acety1-2,3,7,8-tetrahydroxy-[12H]-12-hydroxymethylbenzobis[I.2b,3.4b'] benzofuran-11-one (kynapcin-9) by spectral data including UV, IR, MS, HR-MS, $^1H-,{\;}^{13}C-$, and 2D-NMR. The $IC_{50}$ values of the thelephoric acid and kynapcin-9 were 0.157 ppm (446nM) and 0.087 ppm (212nM) and their inhibitor constants ($K_i$) were 0.73ppm ($2.09{\;}\mu\textrm{m}$) and 0.060 ppm (146 nM), respectively. Furthermore, they were non-competitive with a substrate in Dixon plots.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제31권4호
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• pp.559-569
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• 2021

As one of the major types of lung cancer, non-small cell lung cancer (NSCLC) accounts for the majority of cancer-related deaths worldwide. Treatments for NSCLC includes surgery, chemotherapy, and targeted therapy. Among the targeted therapies, resistance to inhibitors of the epidermal growth factor receptor (EGFR) is common and remains a problem to be solved. MET (hepatocyte growth factor receptor) amplification is one of the major causes of EGFR-tyrosine kinase inhibitor (TKI) resistance. Therefore, there exists a need to find new and more efficacious therapies. Deoxypodophyllotoxin (DPT) extracted from Anthriscus sylvestris roots exhibits various pharmacological activities including anti-inflammation and anti-cancer effects. In this study we sought to determine the anti-cancer effects of DPT on HCC827GR cells, which are resistant to gefitinib (EGFR-TKI) due to regulation of EGFR and MET and their related signaling pathways. To identify the direct binding of DPT to EGFR and MET, we performed pull-down, ATP-binding, and kinase assays. DPT exhibited competitive binding with ATP against the network kinases EGFR and MET and reduced their activities. Also, DPT suppressed the expression of p-EGFR and p-MET as well as their downstreat proteins p-ErbB3, p-AKT, and p-ERK. The treatment of HCC827GR cells with DPT induced high ROS generation that led to endoplasmic-reticulum stress. Accordingly, loss of mitochondrial membrane potential and apoptosis by multi-caspase activation were observed. In conclusion, these results demonstrate the apoptotic effects of DPT on HCC827GR cells and signify the potential of DPT to serve as an adjuvant anti-cancer drug by simultaneously inhibiting EGFR and MET.

• 산업식품공학
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• 제13권4호
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• pp.243-250
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• 2009

프라바스타틴 나트륨은 HMG-CoA(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A) 환원효소 저해제로서, 콜레스테롤 생합성의 초기 율속단계(rate-limiting step)에 작용하여 메 발로네이트(mevalonate)의 합성을 저해하는 광범위한 고지혈증 치료제이다. 본 연구에서는 효율적 발효와 고품질의 정제를 통한 생산성 향상을 위해 수행하였다. 프라바스타틴 나트륨의 경쟁력있는 생산성 향상을 위하여 Streptomyces carbophilus KCCM 10370을 UV 돌연변이 처리하여 프라바스타틴 나트륨의 생산량을 약 45배 향상시키는 S. carbophilus K-212(KCCM 10370) 선별하였다. 생산성을 극대화시키기 위하여 콤팩틴 나트륨의 연속식 투입이 회분식 투입보다 생산량이 24%, 전환율 4.3%로 향상 되었으며, 본배양에서 콤팩틴 나트륨의 농도를 연속적으로 투입하여 0.1%(w/v) 이하로 유지시켜 프라바스타틴 나트륨의 생산량이 0.49%, 전환율 70%로 확인하였다. 발효가 종료된 후 배양액을 Diaion HP20 수지 컬럼, 분배(Partition), 그리고 ODS(Octa-Decylsilyl Silicagel) 수지 컬럼 크로마토 그래피를 하여 유럽약전기준(EP)에 적합한 순도 99.7% 이상, 70~72%의 수율이었다. 프라바스타틴 나트륨을 적외부스펙트럼측정법, 자외부스펙트럼측정법, 수소핵자기공명스펙트럼측정법 및 탄소핵자기공명스펙트럼측정법으로 분석한 결과 유럽약전기준(EP)과 일치하였다.

• Journal of Digestive Cancer Research
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• 제4권1호
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• pp.1-9
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• 2016

The abundance of multi-drug resistance ATPase binding cassette and deranged self-renewal pathways shown in cancer stem cells (CSCs) played a crucial role in tumorigenesis, tumor resistance, tumor recurrence, and tumor metastasis. Therefore, elucidation of CSCs biology can improve diagnosis, enable targeted treatment, and guide the follow up of GI cancer patients. In order to achieve chemoquiescence, seizing cancer through complete ablation of CSCs, CSCs are rational targets for the design of interventions that will enhance responsiveness to traditional therapeutic strategies and contribute in the prevention of local recurrence as well as metastasis. However, current cancer treatment strategies fail to either detect or differentiate the CSCs from their non-tumorigenic progenies mostly due to the absence of specific biomarkers and potent agents to kill CSCs. Recent advances in knowledge of CSCs enable to produce several candidates to ablate CSCs in gastrointestinal (GI) cancers, especially cancers originated from inflammation-driven mutagenesis such as Barrett's esophagus (BE), Helicobacter pylori-associated gastric cancer, and colitis-associated cancer (CAC). Our research teams elucidated through revisiting old drugs that proton pump inhibitor (PPI) and potassium competitive acid blocker (p-CAB) beyond authentic acid suppression, chloroquine for autophage inhibition, sonic hedgehog (SHH) inhibitors, and Wnt/β-catenin/NOTCH inhibitor can ablate CSCs specifically and efficiently. Furthermore, nanoformulations of these molecules could provide an additional advantage for more selective targeting of the pathways existing in CSCs just like current molecular targeted therapeutics and sustained action, while normal stem cells intact. In this review article, the novel approach specifically to ablate CSCs existing in GI cancers will be introduced with the introduction of explored mode of action.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제37권3호
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• pp.248-257
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• 2009

Vibrio harveyi 쿼럼 센싱 (quorum sensing; QS) 신호전달에 대한 저해제들이 주 신호물질인 N-3-hydroxybutanoyl-L-homoserine lactone(3-OH-$C_4$-HSL)의 분자 구조를 변형함에 의해 개발되었다. 일련의 구조 변형체들인 N-(3-hyoxysulfonyl)-L-homoserine lactones(HSHLs)들은 고체상 유기합성법 (solid-phase organic synthesis method)으로 합성되었다. 이 물질들의 생체내 쿼럼 센싱 저해능이 V. harveyi 발광을 이용한 bloassay를 system에 의해 측정되었을 때, 모두 의미있는 저해효과를 보여주었다. 이 물질들과 3-OH-$C_4$-HSL 수용체 단백질인 LuxN 사이의 상호작용을 분석하기 위하여 LuxN의 신호 결합 부위를 다른 acyl-HSL 결합 단백질들과의 유사성에 기초하여 시험적으로 결정하였다. 이 추정 신호결합 부위의 부분적 삼차구조를 ORCHESTRA program을 이용하여 예측하였으며, 이 부위 내에서 3-OH-$C_4$-HSL와 HSHLs의 결합 형태와 에너지를 계산하였다. 이렇게 모델링을 통해 얻어진 결과와 생체 내 bioassay를 통해 얻어진 결과의 비교를 통해, 수용체 단백질과 그 리간드 사이의 상호 작용에 관한 in silica 해석이 특히 단백질의 삼차 구조에 대한 정보가 제한적인 경우에 보다 나은 저해제 개발을 위한 유용한 방법이 될 수 있음을 제안한다.

• 한국균학회지
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• 제13권4호
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• pp.203-212
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• 1985

전국 각지 토양으로 부터 채취한 토양균을 screening하여 ${\alpha}-amylase$를 저해하는 물질을 생성하는 균주인 Streptomyces DMC-72를 선발하였다. 이 균주가 생성하는 저해제를 acetone 침전 및 이온 교환 수지인 Amberlite IRC-50, Amberlite CG-50과 SP-Sephadex C-25를 이용하여 분리하였다. 이 물질은 ${\alpha}-amylase$ 뿐만아니라 다른 amylase와 기타 효소에 대해서도 억제작용을 나타내었다. 이 물질은 기질인 soluble starch의 가수분해에 대해서 non-competitive하게 저해작용을 보이주고 있으며 열 및 넓은 범위의 pH에서 안정한 물질이었다. 이 물질은 anthrone 시험과 IR spectrum에 의해서 oligosaccharide계 화합물임을 알 수 있었다.

• 한국응용곤충학회지
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• 제53권4호
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• pp.331-338
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• 2014

시스타틴(cystatin: CST)은 C1A류 시스테인 단백질분해효소에 대한 경쟁적 가역억제자로서 동식물류에서 파파인과 같은 캐셉신을 억제대상으로 작용하게 된다. 바이러스 유래 CST (CpBV-CST1)이 폴리드나바이러스의 일종인 CpBV (Cotesia plutellae bracovirus)에서 동정되었다. 기존 연구는 이 유전자의 과발현이 배추좀나방(Plutella xylostella) 유충의 면역 및 발육을 교란한다는 것을 보여 주었다. 본 연구는 이 유전자의 단백질 기능을 분석하기 위해 세균발현시스템을 이용하여 재조합단백질(rCpBV-CST1)을 형성하여 단백질분해효소에 대한 활성억제효과를 결정하고, 곤충의 면역과 발육에 대한 생리적 억제효과를 분석했다. 이 유전자 번역부위는 138 개 아미노산으로 약 15 kDa 크기의 단백질로 추정되었다. CpBV-CST1이 먼저 pGEX 발현벡터에 재조합되고, BL21 STAR (DE3) competent cells에 형질전환된 후 0.5 mM IPTG로 4 시간동안 과발현되었다. 분리된 재조합단백질은 파파인에 대한 뚜렷한 억제효과를 나타냈다. 이 재조합단백질은 파밤나방(Spodoptera exigua)에 대해서 혈구소낭형성의 세포성 면역반응을 억제하고, 경구로 처리할 때 배추좀나방의 유충발육을 처리 농도에 비례하여 제한시켰다. 이상의 결과는 CpBV-CST1이 해충 밀도 억제에 응용될 수 있음을 제시하고 있다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제51권1호
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• pp.84-87
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• 2008

Streptococcus mutans, Streptococcus sobrinus 등과 같은 구강 세균에 의해 생산되는 효소인 glucosyltransferase(GTase; sucrose 6-glucosyltransferase, EC 2.4.1.5) 는 충치 발생에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있으며 Gtase-I, GTase-SI, GTase-S 등 최소 3종의 isozyme이 알려져 있다.$^{7-10)}$ GTase는 sucrose로부터 점착성이 있는 불용성의 glucan을 형성하고 이 glucan에서 구강 미생물이 증식하며 그 결과로 생성된 유기산에 의하여 치아표면의 에나벨 층이 부식되므로써 충치가 유발되게 된다.$^{11)}$ 따라서 불용성 glucan의 생성을 유도하는 GTase의 활성을 조절하는 것은 충치 발생 억제에 중요한 역할을 하는 것으로 판단된다. 본 연구자 등은 GTase를 효율적으로 저해하여 충치를 예방할 물질을 탐색하기 위한 연구의 일환으로 약 420종 식물체의 ethanol 추출물로부터 GTase 저해 활성을 검색하여 보고한 바 있다. 수종의 식물체 ethanol 추출물은 S. mutans에 대한 정균활성과 GTase 저해 활성을 동시에 나타내었으며 물질의 분리${\cdot}$정제로부터 oleic acid를 주성분으로 히는 불포화 지방산임이 밝혀진바 있다.$^{12)}$ 본 연구에서는 약 420종 식물체의 열수추출물을 대상으로 GTase 저해 활성을 검색하였다. 그 중 13종의 열수 추출물에서 비교적 높은 GTase 저해활성이 분포 되고 있음을 확인하였으며 활성이 높은 회향을 대상 식물체로 하였다. 회향의 열수 추출물은 S. mutans의 생육에는 영향을 미치지 않고 GTase 활성을 저해하는 특정을 가지고 있다(data not shown). 특히 사람을 대상으로 한 회향 열수 추출물에 의한 치면 세균막 억제 임상 실험 결과 plaque index의 저하를 가져오는 것으로 나타나 회향 열수 추출물은 GTase 활성을 저해하여 충치 예방 목적으로 적용 할 수 있음을 알 수 있다. 회향은 한국을 비롯한 아시아권에서 식품의 향신료 및 민간요법에 널리 사용되는 식물이고 식품의 원료로 사용할 수 있는 소재이다. 회향의 열수 추출물은 열에 대해 높은 안정성을 나타내는 가공 특성을 가지고 있으므로 천연물 기원의 충치예방 기능성 식품으로서의 산업적 이용가치가 기대된다.

• 생명과학회지
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• 제27권2호
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• pp.139-148
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• 2017

본 연구에서는 (E)-2-(substituted benzylidene)-2,3-dihydro-1H-cyclopenta[a]naphthalen-1-one 유도체들을 합성했으며, 합성된 유도체들이 멜라닌 생성과정의 주요 효소인 tyrosinase 활성을 저해할 수 있는지에 대하여 확인하였다. 19종류의 유도체들의 tyrosinase 저해활성을 측정해본 결과, MHY3655 ($IC_{50}=0.1456{\mu}M$)가 가장 큰 저해활성을 나타냈으며 이는 대조군인 코직산($IC_{50}=17.2{\mu}M$) 보다 큰 효능을 보였다. 게다가, Lineweaver-Burk 분석법을 이용하여 MHY3655가 경쟁적 저해 기전으로 tyrosinase 활성을 저해하였고, docking simulation으로 MHY 3655가 tyrosinase에 직접 결합함을 재확인하였다. 마지막으로, B16F10 melanoma 세포에서 MHY3655의 세포독성을 평가한 결과 $1-20{\mu}M$ 사이의 MHY3655는 세포독성을 나타내지 않았다. 이상의 결과에서, 신물질 MHY3655은 우수한 tyrosinase 저해활성을 나타내며, 이는 미백 화장품 소재로서 활용할 가치가 있으리라 사료된다.