• 한국식품과학회지
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• 제41권2호
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• pp.215-219
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• 2009

$AFB_1$의 대사산물 중 하나인 $AFM_1$을 사람과 돼지의 뇨에서 cdELISA를 통해 분석함으로써 간접적으로 $AFB_1$의 위해성 평가를 수행하고자 하였다. 항 $AFM_1$ 항체와 ${AFB_1}-HRP$를 이용한 cdELISA에서 $AFM_1$의 검출한계는 10 pg/mL로 나타났다. 사람의 요에 $AFM_1$을 3-100 pg/mL 농도가 되게 첨가한 후 cdELISA로 분석하였을 때 그 회수율은 117-167%(평균 139${\pm}$19.1)의 범위로 나타났다. 사람의 뇨 중 $AFM_1$의 오염량을 cdELISA로 분석한 결과 전체 172개의 시료 중 165개의 시료에서 평균 2.74${\pm}$1.89 pg/mL 농도로 검출되었다. 뇨 중 $AFM_1$의 일일배출량은 평균 3.97 ng/day으로 나타났고, $AFB_1$의 섭취량은 체내전환율 5%로 가정하였을 때, 79.4 ng/day로 추정되었다. 따라서 사람의 일일섭취추정량 (PDI)은 1.28 ng/kg bw/day로 나타났으며 돼지의 PDI는 9.2 ng/kg bw/day로 나타났다. 한편 $AFB_1$ 섭취의 위해성 평가에서 사람의 PDI는, 일일섭취감내량(TDI, 0.15 ng/kg bw/day)보다 8.5배나 높은 값을 보였지만 외국의 연구결과와 비교하였을 때 대체로 비슷하게 나타났다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제18권3호
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• pp.95-100
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• 2003

된장과 고추장에 대해 cdELISA에 의한 $AFB_1$의 분석방법을 확립하고 국내에서 생산되는 재래식 및 개량식 된장과 고추자을 수거하여 $AFB_1$의 오염도를 조사하였다. 표준곡선을 작성하였을 때, 이의 검출 한계는 0.2 ng/m(ppb)이었다. 된장의 Spike test 후 회수율은 1~100 ng/g 범위에서 평균 71.5%로 나타나 이 범위에서 cdELISA에 의한 $AFB_1$의 측정이 가능함을 보여주었다. 이로부터 된장 및 고추장에서 cdELISA를 통한 $AFB_1$의 분석 방법을 확립하였다. 된장 및 고추장 시료의 $AFB_1$의 오염도는 총 30종의 고추장 시료에서는 $AFB_1$이 검출되지 않았고 총 30종의 된장 시료 중 6종에서 1.0~6.0 ng/g 수준으로 검출되었다. 이는 우리 나라의 허용 기준인 10 ng/g(ppb) 이하였다.

• Environmental Analysis Health and Toxicology
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• 제5권3_4호
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• pp.29-36
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• 1990

Aflatoxins, produced by strains of Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus, can be found worldwide in corn, barley, peanuts, and other commodities. Among this group of toxins, aflatoxin B$_1$was realized to be one of the most potent environmental carcinogens, mutagens and teratogens. It is routinely monitored by methods such as thin layer chromatography, liquid chromatography, fluorodensitometric technique and radioimmunoassay. However, these assays are expensive, necessitate radioactive reagents, and require overnight incubation. In this study, the determination of fungal flora in several sorts cereals has been carried out in order to obtain an appropriate information of the population of fungi. The quantitative analysis of aflatoxin B$_1$has been carried out by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) method and Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA). The results were summarized as follow: 1) From the 100 samples,313 colonies of fungi were isolated. Among the 313 colonies, 274 were possible to identify into 11 genera. The identified genera were Aspergillus Penicillium, Mucor, Rhizopus, Alternaria, Cladosorium, Fusarium, Circinella, Chrysosporium, Paecilomyces and Phoma. 2) Six of Aspergillus flavus were aflatoxin-producing strains. Aspergillus flavus isolated from sample barleys was contained the highest content (21.8 $\mu\textrm{g}$/ml) of aflatoxin B$_1$. 3) The yield of aflatoxin B$_1$-oxime compound was appromately 75%. Aflatoxin B$_1$-oxime-Human serum albumin was approved by formal consent as complete antigen. 4) Direct competitive ELISA permitted detection of 0.15 ng levels. In the quantitative microanalysis, ELISA was superior to HPLC method.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제4권3호
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• pp.171-176
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• 1989

영남지방 곡류에 오염되어 있는 Aflatoxin B1을 측정하기 위해 식속하고 정확한 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay(ELISA) 법을 응용하였다. 생산된 Antibody 는 aflatoxin B2와 강한 corss reaction을 보였고, 정량적으로 표준곡선을 보인 aflatoxin B1 범위는 1-100ppb이었으며, methanol-PBS-dimethylformamide로 spike시킨 쌀 추출물이 ELISA 반응에 약간의 간섭반응을 보였다. ELISA법에 의한 쌀 65종, 보리 116종의 aflatoxin 분석결과는 다음과 같다. 즉, 쌀시료 65개 중 3개의 시료가 positive 반응을 보였으며, 그중 R-18이 $7.5\;\mu\textrm{g}/kg$, R-30이 $3.6\;\mu\textrm{g}/kg$, R-59가 $3.3\;\mu\textrm{g}/kg$ 순으로 aflatoxin B1 함량을 나타내었고 시료의 4.6%가 aflatoxin B1에 오염되었음을 보였다. 보리 116종 중 겉보리에서 4개의 시료가 positive 반응을 나타내었으며, 그 중 겉보리 UB-37이 $9.6\;\mu\textrm{g}/kg$의 함량으로 가장 높은 함량을 나타내었고, 그의 UB-35, UB-54순이었으며 전체 시료의 3.4%가 aflatoxin B1에 오염되었음을 보였다.

• Journal of Veterinary Science
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• 제23권4호
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• pp.55.1-55.12
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• 2022

Background: ASF was first reported in Kenya in 1910 in 1921. In China, ASF spread to 31 provinces including Henan and Jiangsu within six months after it was first reported on August 3, 2018. The epidemic almost affected the whole China, causing direct economic losses of tens of billions of yuan. Cause great loss to our pig industry. As ELISA is cheap and easy to operate, OIE regards it as the preferred serological method for ASF detection. P54 protein has good antigenicity and is an ideal antigen for detection. Objective: To identify a conservative site in the African swine fever virus (ASFV) p54 protein and perform a Cloth-enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detecting the ASFV antibody in order to reduce risks posed by using the live virus in diagnostic assays. Method: We used bioinformatics methods to predict the antigen epitope of the ASFV p54 protein in combination with the antigenic index and artificially synthesized the predicted antigen epitope peptides. Using ASFV-positive serum and specific monoclonal antibodies (mAbs), we performed indirect ELISA and blocking ELISA to verify the immunological properties of the predicted epitope polypeptide. Results: The results of our prediction revealed that the possible antigen epitope regions were A23-29, A36-45, A72-94, A114-120, A124-130, and A137-150. The indirect ELISA showed that the peptides A23-29, A36-45, A72-94, A114-120, and A137-150 have good antigenicity. Moreover, the A36-45 polypeptide can react specifically with the mAb secreted by hybridoma cells, and its binding site contains a minimum number of essential amino acids in the sequence 37DIQFINPY44. Conclusions: Our study confirmed a conservative antigenic site in the ASFV p54 protein and its amino acid sequence. A competitive ELISA method for detecting ASFV antibodies was established based on recombinant p54 and matching mAb. Moreover, testing the protein sequence alignment verified that the method can theoretically detect antibodies produced by pigs affected by nearly all ASFVs worldwide.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제16권3호
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• pp.206-211
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• 2001

곰팡이독소 생성균과 비생성균의 혼합배양이 곰팡이독소 생성에 미치는 영향을 조사하기 위하여 Aspergillus flavus (aflatoxin 생성균), Aspergillus nigey(비생성균) 그리고 Penicillium griseofulvum (patulin 생성균)을 5 ml의 SLS 배지에서 15일동안 단독 혹은 혼합배양하였다. Afatoxin의 생성능의 측정은 직접경쟁 ELISA법으로, patulin은 HPLC 법으로 생성능을 측정하였으며, 균의 생육도, pH 그리고 산생성량을 상법에 따라 측정하였다. 그 결과 혼합배양은 전체적으로 균의 생육도를 크게 저하시키지 않은 반면, 산의 생성증가로 pH의 감소를 보였다. Aflatoxin은 12일간의 단독배양시 145 $\mu\textrm{g}$/ml이 생성되었으나 혼합배양으로 93%이상이 감소되어 10.26$\mu\textrm{g}$/ml을 생성하였다. Patulin의 경우도 혼합배양으로 단독배양시의 77.82$\mu\textrm{g}$/ml에 비하여 69.5%가 감소된 23.72$\mu\textrm{g}$/ml 수준을 나타내었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제19권1호
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• pp.83-92
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• 2009

Individual immunochromatographic assays (ICG) for ochratoxin A (OTA) and zearalenone (ZEA) were optimized and used in the development of a one-step simultaneous immunochromatographic assay (OS-ICG) for the rapid multianalysis of two mycotoxins in corn samples. The nitrocellulose membrane of the OS-ICG was treated with OTA-bovine serum albumin (BSA), ZEA-ovalbumin (OVA), and anti-mouse IgG in the OTA test, ZEA test, and control zones, respectively. Monoclonal antibody-gold conjugates (OTA3 MAb-gold and ZEA2C5 MAb-gold) were sprayed onto the conjugate pad. The visual detection limits were 2.5 and 5 ng/ml for OTA and ZEA, respectively, and the results were obtained within 15 min after starting the analysis. An efficient, simple, and rapid extraction method using 30% MeOH/PBS was established and validated by analyzing the corn samples spiked with OTA/ZEA mixtures (0/0, 5/10, 10/20, and $20/30\;{\mu}g/kg$). The cut-off values of the OS-ICG for the spiked corn were 5 and $10\;{\mu}g/kg$ for OTA and ZEA, respectively. Natural corn samples were analyzed by OS-ICG, direct competitive enzyme-linked immunosorbent assay (DC-ELISA), and HPLC. Results of the OS-ICG were in good agreement with those obtained by DC-ELISA and HPLC. The developed OS-ICG offers a rapid, easy-to-use, and portable analytical system and can be used as a convenient qualitative tool for the on-site simultaneous determination of OTA and ZEA in cereals, food, and agricultural products in one analytical cycle.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제16권4호
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• pp.274-279
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• 2001

일반적으로 메주나 된장 등의 한국 전통발효식품에는 Aspergillus aryzae나 A. nigar 등과 같은 곰팡이독소를 생성하지 않는 균이 주로 서식하는 것으로 알려져 있다. 그러나 때로는 A. flavus나 A. paraciticus와 같은 유해곰팡이가 오염되어 발효나 저장 중에 aflatoxin이 축적될 수 도 있다. 따라서 이들 전통발효식품에서의 aflatoxin 생성균의 검색이 이들 식품의 안전성 확보를 위해 매우 중요하다고 생각된다. 본 연구에서는 면역분석기법을 이용하여 서부경남 시판메주 및 된장에서 aflatoxin 생성균을 검색하였다. 시료로는 서부경남 9개 지역으로부터 메주 10개와 된장 20개를 수집하였고, 수집된 시료로부터 메주에서는 24개 그리고 된장에서는 22개의 Aspergillus속 균을 분리하였다. 분리균들은 SLS 배지에 접종하여 $25^{\circ}C$에서 15일간 배양한 다음, 배양액을 ethyl acetate로 추출하고, DC-ELISA법으로 배양물중의 AFB$_1$을 측정하였다. 그 결과 메주로부터 분리된 균주 중에는 6균주가, 된장에서 분리된 균주에는 2균주가 AFB$_1$을 생산하는 것으로 확인되었다. 메주에서 분리된 6균주의 AFB1 생성량은 평균 54.6$\pm$38.7ng/ml 이었고, 된장에서 분리한 2균주는 평균 11.1 $\pm$ 8.6 ng/ml 의 AFB$_1$을 생산하였다. 그 중 분리균 No. M-5-4는 98.26 ng/ml의 AFB$_1$을 생산하여 가장 높은 생성능을 보였다. 아울러 TLC에 의해 aflatoxin생성능을 재확인 한 결과 DC-ELISA의 결과와 유사하였다. 이상의 결과로 미루어 보아 식품의 안전성과 한국에서의 전통발효식품산업에의 HACCP 시스템 도입을 위해 발효식품에서의 유해곰팡이독소 생성균의 검색은 필요하다고 사료되는 바이다.

• Animal cells and systems
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• 제15권4호
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• pp.259-267
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• 2011

This study was undertaken to produce a $F_{ab}$ fragment of a human monoclonal antibody reactive to oxidized and carbamylated low-density lipoprotein (oxLDL and cLDL) using phage display technology. An analysis of DNA sequences of this $F_{ab}$, termed plaque 15,16-46 $F_{ab}$, revealed that the rearranged $V_H$ was highly mutated. Complementarity-determining regions of the $V_H$ showed a very high R/S ratio and contained many positively charged amino acids. In direct binding and competitive ELISA, the $F_{ab}$ reacted strongly with both MDA-LDL and Cu-oxLDL forms of oxLDL, and also showed high affinity for cLDL. Immunofluorescence and immunohistochemical analyses showed that this $F_{ab}$ positively stained atherosclerotic aortic plaques in $ApoE^{-/-}$ mice as well as those in patients with atherosclerosis. The $F_{ab}$ also showed positive staining in placental decidua from patients with preeclampsia. It is suggested that the plaque 15,16-46 $F_{ab}$ against oxLDL and cLDL might possibly be applicable for developing a diagnostic reagent for both human and rodent animal research to detect and characterize atherosclerotic disease progression in atherosclerotic lesions as well as exploring the pathogenesis of atherogenic diseases such as preeclampsia.