• Applied Biological Chemistry
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• 제42권3호
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• pp.181-187
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• 1999

경주지역의 토양으로부터 Fusarium 속 식물병원균에 길항력을 갖는 chitinase 생산성 길항미생물을 분리할 수 있었으며, 이를 분류학적으로 동정하여 본 결과 Serratia proteamaculans 3095로 동정할 수 있었다. 이 균주가 생성하는 chitinase의 생성조건을 조사한 결과 탄소원으로 colloidal chitin이 가장 좋았으며 그 최적 농도는 0.15%이었고, glucose에 의해 chitinase 생산 유도를 억제받는 효소임을 알 수 있었다. 질소원에 의한 영향은 $(NH_4)_2SO_4,\;(NH_4)Cl$, peptone 등에 의해 chitinase 생산성이 증가되었고, $(NH_4)_2SO_4$와 peptone을 각각 0.1%씩 첨가하였을 때 chitinase 생산이 가장 좋았다. 또한 시드름병균 Fusarium oxysporum을 대상으로 in vitro, in vivo pot 실험을 통해 Serratia sp. 3095의 강한 방제력을 검증할 수 있었다.

• Mycobiology
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• 제41권4호
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• pp.221-224
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• 2013

Aphids are one of the most destructive pests in crop production such as pepper, cucumber, and eggplants. The importance of entomopathogenic fungi as alternative pest control agents is increasing. Conidia of entomopathogenic fungi are influenced by environmental conditions, such as temperature and relative humidity, and cause slow and fluctuating mortality. These factors have prevented wider application and use of biocontrol agents. For investigation of means of mitigation of such problems, we conducted bioassays with 47 fungal culture filtrates in order to evaluate the potential of secondary metabolites produced by entomopathogenic fungi for use in aphid control. Among 47 culture filtrates cultured potato dextrose broth, filtrate of Beauveria bassiana Bb08 showed the highest mortality (78%) against green peach aphid three days after treatments. Filtrate of Bb08 cultured in Adamek's medium showed higher toxicity as 100% to third instar nymphs of the aphid compared with seven other filtrates cultured in different broths amended with colloidal chitin or oil. The culture filtrates and fungal cultures from media amended with colloidal chitin or oil had lower control efficacies than filtrates without these additives in three different media. These results indicate that the fungal culture fluid or culture filtrate of B. bassiana Bb08 cultured in Adamek's medium has potential for development as a mycopesticide for aphid control.

• 생명과학회지
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• 제12권1호
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• pp.77-86
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• 2002

토양으로부터 chitinase를 생성하는 균주를 분리하여 동정한 결과 Bacillus subtilis로 판명되었으며, 분리한 균주를 Bacillus subtilis JK-56이라 명명하였다. B. subtilis JK-56의 chitinase 생산 최적 조건을 검토한 결과 1% chitin, 0.5% polypeptone, 0.1% KCI, 0.05% MnS $O_4$.4$H_2O$이며 초발 pH 7.0, 배양온도 37$^{\circ}C$에서 가장 많은 효소를 생산하였다. 본 균주가 생산하는 chitinase를 정제하기 위해서 native-PAGE를 이용해 효소활성 band를 확인한 결과, 1개의 강한 활성 band와 2개의 약한 활성 band를 가지는 isozyme으로 확인되었다. 확인된 isozyme을 정제한 결과, isozyme 중 1개의 강한 활성 band를 정제하였고 정제된 효소를 Chi-56A라고 명명하였다 Chi-56A의 효소 특성에 관해서 실험한 결과 분자량은 약 53kDa, pI는 4.3으로 확인되었다. 본 효소는 $65^{\circ}C$까지 상당히 안정하였으며 효소의 최대활성 온도도 $65^{\circ}C$로 확인되는 등 열에 대해 상당히 안정한 효소로 확인되었다. Collidal chitin에 대한 정제효소 Chi-56A의 $K_{m}$ 값은 17.33g/L였다. 그리고 pH 6.0에서 최대의 활성을 나타내었고, 산성범위보다 알칼리범위에서 안정한 것으로 나타났다. 또한 $Mn^{2+}$ 존재 하에서 높은 활성을 나타내었고 C $O^{2+}$와 $Mg^{2+}$ 존재 하에서도 활성이 약간 증가한 반면에 H $g^{2+}$ 존재 하에서는 상당한 저해를 받았다. Chito 올리고당에 대한 분해 산물을 HPLC로 확인해 본 결과 짝수개의 올리고당의 분해산물은 (GlcNAc)$_2$만을 생산하였고 홀수개의 올리고당에 대해서는 GlcNAc와 (GlcNAc)$_2$를 생산하는 것으로 비환원성 말단으로부터 이당체인 diacetyl chitobiose ((GlcNAc)$_2$)를 생산하는 exo형 chitinase로 추정 된다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제29권3호
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• pp.142-148
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• 2001

경주 인근 지역의 토양으로부터 식물병원성 진균 Fusarium oxysprum과 phytophthora capsici를 동시에 길항할수있는 항진균성 항생물질 생산성 생물방제균을 분리하고, 성분을 함유한 병원진균의 세포벽을 분해하는 chitinase 생산성이 우수한 균주를 분리하고자 하였다. 분리된 생물방제균의 형태학적, 생화학적 및 배양학적으로 동정하여 잠정적으로 Bacillus amyloliquefaciens 7079로 동정하였다. 이 생물방제균이 생산하는 chitinase 생산의 최적 조건을 검토하여 본 결과 Chitin-yeast extract 배지(0.7% $K_2$$HPO_4$ 0.2% $KH_2$$PO_4$ 0.1%($NH_4$)$_2$$SO_4$ 0.05% sodium citrate 0.01% MgSO$_4$$7H_2$O 0.1% yeast extract, 0.1% coloida chitin)에서 pH는 7.0 배양온도는 3$0^{\circ}C$였고 배양한 후 3일 이 되었을 때 가장 많은 chitinase를 생산하였다. 또한 0.1% colloida chitin을 탄소원으로 하여 배양하였을 때 chitinase 생산성이 가장 좋았으며 0.15% proteose peptone NO .3 또는 0.1% tryptone 을 질소원으로 하여 배양하였을 때 효소 생산이 높게 나타났다. 선발된 생물방제균의 고추를 기주식물로한 in vivo pot 시험 결과 고추역병균 Phytophthora capsici에 좋은 길항력을 확인할 수 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제24권5호
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• pp.567-573
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• 1996

Chitinase (EC 3.2.1.14) from culture fluid of Bacillus licheniformis KFB-C14 was purified 66-folds to homogenity in overall yield of 21% by ammonium sulfate fractionation, DEAE-Toyopearl, Butyl-Toyopearl and TSK-Gel HW-55F column chromatography. The enzyme protein had a molecular weight of about 86,000 and was composed of one subunit. The enzyme was significantly stable not only at high temperature but also on treatment with organic solvents and protein denaturants such as SDS, urea and guanidine-HC1. The optimum temperature and pH for reaction was 60$\circ $C and 6.0, respectively. The enzyme activity was inhibited by only Mn$^{2+}$ ion, but not inhibited by EDTA, N- ethylmaleimide and pCMB. The enzyme had high activity with colloidal chitin (V$_{max}$: 421) and commercial chitin (V$_{max}$: 480), but not with typical substrates of exo type chitinase. The thermostable chitinase had an useful reactivity for producing functional chitooligosaccharide, showing the production of (GlcNAc)$_{1}, (GlcNAc)$_{3}$, and (GlcNAc)$_{2}$ as major product.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제21권1호
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• pp.6-12
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• 1993

토양에서 분리한 294균주 중에서 chitinase 생산성이 우수한 균주를 선택하였으며 형태학적, 생화학적 및 배양학적 실험과 Bergey's Manual of systematic Bacteriology의 색인을 통하여 Streptomyces lydicus로 동정하였다. 효소 생산의 최적 조건을 검토하여 본 결과 배양 후 6일이 경과하였을 때, 배지의 초기 pH는 8, 배양 온도는 $30^{\circ}C$, 배지에 2의 chitin을 첨가하여 배양하였을때 효소가 가장 많이 생산되었다. 또한 soluble starch, dextrin을 탄소원으로 하여 배양하였을 때, ammonium oxalazte, tryptone, casamino acid를 질소원으로 하여 배양하였을 때 효소 생산이 높게 일어났다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제14권2호
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• pp.337-343
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• 2004

A bacterial strain concurrently producing extracellular chitosanase and chitinase was isolated from soil and identified as a member of the $\beta$-subgroup of Proteobacteria through its 16S rRNA analysis and some biochemical analyses. The newly discovered strain, named as KNU3, had 99% homology of its 16S rRNA sequence with chitinolytic $\beta$-Proteobacterium CTE108. Strain KNU3 produced 34 kDa of chitosanase in addition to two chitinases of 68 kDa and 30 kDa, respectively. The purified chitosanase protein (ChoK) showed activity toward soluble, colloidal, and glycol chitosan, but did not exhibit any activity toward colloidal chitin. The optimum pH and temperature of ChoK were 6.0 and $70^{\circ}C$, respectively. The chitosanase was stable in the pH 4.0 to 8.0 range at $70^{\circ}C$, while enzyme activity was relatively stable at below $45^{\circ}C$. MALDI-TOF MS and N-terminal amino acid sequence analyses indicated that ChoK protein is related to chitosanases from Matsuebacter sp. and Sphingobacterium multivorum. HPLC analysis of chitosan lysates revealed that glucosamine tetramers and hexamers were the major products of hydrolysis.

• BMB Reports
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• 제36권2호
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• pp.185-189
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• 2003

Chitinase (EC 3.2.1.14) was isolated from the culture filtrate of Streptomyces sp. M-20 and purified by ammonium sulfate precipitation, DEAE-cellulose ion-exchange chromatography, and Sephadex G-100 gel filtration. No exochitinase activity was found in the culture filtrate. The molecular mass of the purified chitinase was 20 kDa, estimated by a sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, and was confirmed by activity staining with Calcofluor White M2R. Chitinase was optimally active at pH of 5.0 and at $30^{\circ}C$. The enzyme was stable from pH 4 to 8, and up to $40^{\circ}C$. Among the metals and inhibitors that were tested, the $Hg^+$, $Hg^{2+}$, and p-chloromercuribenzoic acid completely inhibited the enzyme activity. The chitinase activity was high on colloidal chitin, chitotriose, and chitooligosaccharide. The purified chitinase showed antifungal activity against Botrytis cinerea, and lysozyme activity against the cell wall of Botrytis cinerea.

• 한국수산과학회지
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• 제32권2호
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• pp.121-126
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• 1999

Chitin deacetylase 추출을 위한 M. rouxii균의 성장 및 분해활성효소의 생산을 위한 공급원 중, 탄소원으로는 glucose 및 fructose 등이 가장 우수한 것으로 나타났고, 질소원으로는 yeast extract 및 pepton이 3:2의 비율로 총 $2\%$ 정도의 농도가 가장 효과적이었다. 성장 최적 pH는 4.5, 배양온도는 $25^{\circ}C$ 부근이었고 약산성 및 7.5이상의 영역에서는 균체의 성장 및 분해활성 효소의 활성이 급격히 저하되었으며 $35^{\circ}C$ 이상의 온도영역에서는 거의 생육하지 못하였다. 정제효소의 최적활성 pH 영역은 pH 5.5 부근이었으며 pH 4.0이하와 pH 8.0 이상의 반응조건에서는 급격한 활성저하를 초래하였고 반응 온도 $35^{\circ}C\~40^{\circ}C$ 영역에서 최고의 활성을 나타내었다. pH안정성에 있어서 pH 4.5 이하 및 pH 7.5 이상의 영역에서는 상당히 불안정한 것으로 나타났으며 $CaCl_2$ 및 $ZnC1_2$ 첨가에 의하여 약 $10\~20\%$의 활성이 증가되었으나 $Li^{2+}$ 및 $Hg^{2+}$ 등에 의해서는 현저한 활성저하현상을 나타내었다. 정제효소는 SH-화합물인 L-cysteine 과 S-S결합 절단제인 2-mercaptoethanol에 의해서는 활성이 증대되었고, SH 차단제인 $\sigma$-phenanthroline, CMB 및 금속 chelate제인 EDTA와 iodoacetate에 의해서는 활성이 현저히 저하되었다. 그리고, 정제효소의 $K_m$은 $1.2\%$였으며, $V_{max}$는 59.5U/mg 이었고, 20, 40, 60, 80mesh의 크기로 제조되어 진 분말 chitin에 대한 정제효소와의 반응에서 반응생성물인 acetic acid는 검출되지 않았다.

• 한국토양비료학회지
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• 제21권2호
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• pp.129-134
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• 1988

토양(土壤)으로부터 분리(分離)한 Streptomyces sp. S-45 균주(菌株)의 효소학적(酵素學的) 성질(性質)을 검토(檢討)한 결과(結果)는 다음과 같다. 1. 분리균(分離菌) Streptomyces sp. S-45의 Chitinase activity는 $3.01({\mu}/m{\ell})$이고 ${\beta}$-1.3-Glucanase activity는 $2.49({\mu}/m{\ell})$이었다. 2. 탄소원(炭素原)으로서 Colloidal chitin 0.7%, Glucose 0.3%, 질소원(窒素原)으로서 Asparagine 0.5%, Peptone 0.2% 존재(存在)가 효소생산(酵素生産)에 효과적(效果的)이었다. 3. 최적(最適) 효소생성(酵素生成) 조건(條件)으로 pH 7.0, $30^{\circ}C$에서 6일간(日間) 진탕배양시(培養時) 최고(最高)의 효소생성(酵素生成)을 나타내었다. 4. 효소(酵素)의 활성(活性)에 미치는 최적(最適) 작용조건(作用條件)은 pH 6.5~7.0, 온도(溫度)는 $45{\sim}50^{\circ}C$였다. 5. 본(本) 효소(酵素)는 pH6.0~7.0에서 안정성(安定性)이 가장 높았고, $80^{\circ}C$로 10분(分) 처리시(處理時) Chitinase는 10%, ${\beta}$-1.3-Glucanase는 12%로 잔존활성(殘存活性)이 감소(減少)하였다. 6. 금속(金屬)이온에 대한 효소(酵素)의 영향(影響)은 $Co^{{+}{+}}$, $Cu^{{+}{+}}$, $Mn^{{+}{+}}$, $Al^{{+}{+}{+}}$의 $10^{-2}M$과 $Sn^{{+}{+}}\;10^{-3}M$에서 활성(活性)이 증대(增大)하였고, $Ag^{{+}{+}}$, $Hg^{{+}{+}}$는 현저(顯著)한 저해작용을 하였다.