세포막의 국소 접착부 복합체에 있는 한 구성원으로써 Src은 비수용체 타이로신 인산화효소 중 하나로 세포부착과 세포 이동성을 조절한다. 그러나 extracellular matrix (ECM)의 구성에 따라 세포막 미세영역에서 어떻게 Src 활성이 조절되는지는 여전히 잘 알려져 있지 않다. 본 연구는 유전적으로 암호화된 FRET 기반 세포막 하위 도메인 표적 Src 바이오센서를 이용해서 3개의 각기 다른 대표적 ECM 단백질인 제1형 콜라겐, 피브로넥틴, 라미닌에 따른 Src의 활성도를 비교 및 조사하였다. FRET 기반 바이오센서는 살아있는 세포에서 단백질의 활성을 시공간적 고해상력을 토대로 실시간으로 분석할 수 있게 해준다. 결과적으로 모든 ECM 조건에서 지질유동섬(Lipid raft)에서 높은 Src 활성을 보였고 ECM 조건에 따라 큰 차이를 보이지 않았다. 반면에 비-지질유동섬(non-Lipid raft)에선 낮은 Src 활성을 보였다. 게다가 같은 ECM 조건일 때 지질유동섬에서 비-지질유동섬보다 높은 Src 활성을 보였다. 따라서 본 연구는 Src 활성이 지질유동섬과 비-지질유동섬에 따라 다르게 조절된다는 것을 보여주었다.
Backgrounds : Rheumatoid Arthritis(RA) is known as the chronic inflammatory diseasethat induces persistent inflammation in the joint cavity. The destruction of cartilage occurs as the result of bones destoyed by pannus, several influential cytokines induced by the synovial capsulitis, varieties of proteinases, $O_2$ radicals, and the secondary degenerative changes of articular cartilage. The type 2 collagen-induced arthritis model is used in recent experimental research on rheumatoid arthritis. Cervus elaphus sibiricus (Nockyong) has the effect of relieving pain by nourishing the muscles, joints, and bones. It is also known to be efficacious in promoting and enhancing the immune system. The objective of this study was to investigate the effect of Cervus elaphus sibiricus herbal acupuncture to inhibit the generation of proinflammatory enzyme on type 2 collagen-induced arthritis. I investigated the inhibition of mRNA transcription of MIF(macrophage migration inhibitory factor), $TNF-{\alpha}$(Tumor necrosis $factor-{\alpha}$) and MMP-9 (matrix metalloproteinase-9) of Cervus elaphus sibiricus herbal acupuncture using an in vitro test. Also investigated was the inhibition of differentiation of Th 1 cells and activation of cytokines(MIF, $TNF-{\alpha}$, IL-6, MMP-9), which are known to cause initial RA ,and are also related to the morphology of the synovial membranes of the joint capsule, by an in vivo test, using CIA(collagen induced arthritis) model mice. Materials & methods : The laboratory animals used in this experiment were 4 week-old DBA female mice, weighing approximately 20 grams, and adjusted to the laboratory environment. The experiment was divided into the normal group(NOR)-no treated group, control group(CON)-CIA induced group, and sample group(SAM)-Cervus elaphus sibiricus herbal acupuncture treated group. RA was induced in the mice via injection of $50{\mu}{\ell}$ C II mixed CFA. The Cervus elaphus sibiricus herbal acupuncture solution was applied on $GB_{35}$(陽陵泉) for 26 days from the 3rd day of RA inducement. The concentration of the solution was determined via a MTT assay. To research the effect on the expression of MIF, $TNF-{\alpha}$ and MMP-9 mRNA, RT-PCR was performed on synovial membrane cells from the knee joint of CIA mice. C II induced RA knee joint's histo-chemical synovial membrane was observed using a specimen model via the Hematoxilin and Eosin dying technique. Results : The expression of mRNA of RA-related cytokines such as MIF, $TNF-{\alpha}$, and MMP-9 dosedependently decreased in the cell from the synovial membranes of the joint, which is treated with Cervus elaphus sibiricus herbal acupuncture solution. In mice treated with Cervus elaphus sibiricusherbal acupuncture, the damage of synovial membranes of the joint was lessened, and differentiation of Th 1 cells was suppressed. The activation of RA-related cytokines such as MIF was suppressed, and the generation of $TNF-{\alpha}$ and MMP-9 showed a statistically significant decreas. Conclusions : It is speculated that Cervus elaphus sibiricus herbal acupuncture has the therapeutic effect of palliating the damage of the tissue impaired by RA by inhibition of the initial RA progression and by regulating excessive differentiation of Th 1 cell as it suppresses the generation of RA-related cytokines during the highest stage of RA by acting on pro-inflammatory enzymes.
The purpose of this study was to evaluate histomorphometrically a toothash - plaster of Paris mixture associated with collagen membrane ($Bio-Gide^{(R)}$), regarding new bone formation in the peri-implantitis defects in dogs. Three mandibular molars were removed from 1-year-old mongrel dogs. After 2 months of healing, 2 titanium implants with sandblasted with large grit and acid etched (SLA) surface were installed in each side of the mandible. Experimental peri-implantitis was induced with ligatures after successful osseointegration. Ligatures were removed after identification of bone defect beneath the level of 5th thread of fixture on radiographic image. The mucoperiosteal flaps were elevated and the contaminated fixtures were treated with chlorhexidine and saline. The bone defects were assigned to one of the following treatments: no guided bone regeneration (GBR) procedure (group 1), GBR with Bio-$Oss^{(R)}$ and Bio-$Gide^{(R)}$ (group 2), or GBR with toothash - plaster of Paris mixture (TPM) and Bio-$Gide^{(R)}$ (group 3). The dogs were sacrificed after 8 or 16 months. The mean percentages of new bone formation within the limits of the 5 most coronal threads were $17.83{\pm}10.69$ (8 weeks) and $20.13{\pm}13.65$ (16 weeks) in group 1, $34.25{\pm}13.32$ (8 weeks) and $36.33{\pm}14.21$ (16 weeks) in group 2, and $46.33{\pm}18.39$ (8 weeks) and $48.00{\pm}17.78$ (16 weeks) in group 3, respectively. The present study confirmed statistically considerable new bone formation within the threads in group 3 compared with group 1 at 8 and 16 weeks (P<0.05). Although, data analysis did not reveal significant differences between group 2 and 3, the latter showed better results during the period of 8 or 16 weeks. Our findings support the effectiveness of TPM as a GBR material in the treatment of peri-implantitis bone defect.
후천적진주종의 형성에 있어서 고막의 Shrapnell부분과 외이도후상부 상피의 상고 실내 침입 및 고막 중심성천공의 margin으로부터 상피가 침입하는 이른바 immigration설과 이밖에 metaplasia설이 있다. 임상적으로 진주종이 상고실에 형성된다는 사실은 알려져 왔으나 그 발생기전에 대한 해명은 충분하지 않는 실정이다. 연자 등은 최근에 중이수술을 시행한 진주종 170례에 대하여 검토를 가하였다. 수술소견에 있어서 진주종의 primary focus가 상고실에 있을 때 Shrapnell부위의 marginal 및 central perforation 2가지 형의 천공이 관찰되었으며 Prussak's space안으로 retraction 및 Rivinus notch의 골벽결손 등을 볼 수 있었고 진주종이 있었던 36례중 Shrapnell부위의 중심성천공을 동반한 경우 5례, Rivinus notch의 골벽이 결손된 경우와 Shrapnell부위의 후상부 marginal perforation이 있고 진주종을 형성한 경우 21례, 그중 Shrapnell부위의 중심성천공을 동반한 경우 3례였다. 결론적으로 상고실 진주종이 잘 생기는 이유는 1) 상고실은 염증성분필물을 배설하는 구씨관입구와의 거리가 있고 2) 고막 Shrapnell부위의 고유층은 collagen fiber가 긴장부에 비해서 엷고 탄력성섬유가 많기 때문에 표피층의 각화증식을 일으킬 경우 Prussak's space내로 retraction을 일으키기 쉽다. 3) Shrapnell부위의 상부에 위치한 Rivinus notch에 부착한 epidermis는 각화증식에 의하여 Rivinus notch margin과 여기에 부착하고 있는 고막연의 margin사이를 파괴하여 상고실로 상피가 침입하게 된다.
Objectives : The purpose of this study is to observe the inhibitory effects of $Chrthami$ semen oil pharmacopuncture(CSOP) on CIA (collagen-induced arthritis) mice. Materials and Methods : Two types of experiments were conducted: $in$$vitro$ assay, inhibition of MIF mRNA and TNF-${\alpha}$ mRNA expressions in synovial membranes was observed, and $in$$vivo$ assay, $1{\mu}{\ell}/kg$ CSOP was injected every day to the left $Weizhong$ ($BL_{40}$) from day 3 to 21 after induction of CIA, and changes in paw edema, apical surface morphology, neovascularization in synovial membranes, fibrosis, pro-inflammatory cytokines production, Th-1 differentiation, and anti-inflammatory effect were investigated. Results : 1. In synoviocytes of the CIA mice treated with CSOP, MIF mRNA and TNF-${\alpha}$ mRNA expressions were down-regulated in a dose-dependent manner. 2. Paw edema of the CIA mice treated with CSOP was diminished. 3. Tissue injury in the synovial membranes, capillary distribution and fibrosis were reduced in CSOP-treated mice. 4. MIF, TNF-${\alpha}$, IL-6, MMP-9 expressions were repressed in CSOP-treated mice during the experiment to observe the inhibitory effect on cytokines production in early stage RA. 5. IL-12 and CD28 were reduced in CSOP-treated mice during the observation of inhibitory effect on Th 1 differentiation. 6. PPAR-${\gamma}$ was increased during the experiment to observe the anti-inflammatory effect of CSOP. Conclusions : The results may suggest that administration treatment using $Chrthami$ semen oil pharmacopuncture decreases the inflammatory response on an Animal Model with CIA.
식물중에서 배당체 일종인 saponins을 다량 함유한 시호(Bupleurum falcatum)로부터 생체 조절 기능을 갖는 유효성분을 분리하여 혈소판 활성화 작용을 통하여 뇌심혈관계 질환 연구에 이용하고자 시호 용매 분획물에서 분리 및 동정한 Saikosapini을 thronbin, collagen, arachidonic acid 등의 효능제(agonist)와 세포의 $Ca^{2+}$ 의존성을 비교연구하였다. 시호 용매추출물 중에 acetone 추출물이 혈소판 응집작용이 강하며, 그 유효성분을 분리 및 동정한 saikosaponin a와 d는 C16 위치에 각각 ${\alpha}와\;{\beta}$형의 OH기를 갖는 이성체로, saikosapnin d가 a보다 강한 응집작용을 갖는 구조활성관계를 나타내고 있다. 각 효능제에 따라서 혈소판 활성화에 대한 세포의 $Ca^{2+}$ 의존성은 thrombin > colagen $\geq$ PAF>PMA> arachidonic acid $\geq$ Ionophore A23187순으로 나타났다. 시호 추출물 및 saikosaponin의 혈소판 활성화 작용은 기존 효능제와 다른 세포의 $Ca^{2+}$의존성을 나타내는 것으로 사료된다.
The primary goal of the wound healing is rapid wound closure. Recent advances in cellular and molecular biology have greatly expanded our understanding of the biologic processes involved in wound repair and tissue regeneration. This study was conducted to develop a new sponge type of biomaterial to be used for either wound dressing or scaffold for tissue engineering. We designed to make a comparative study of the wound healing effect of silk fibroin/hyaluronic acid (SF/HA) blend sponge in full-thickness dermal injury model of rat. Two full-thickness excisions were made on the back of the experimental animals. The excised wound was covered with either the silk fibroin (SF), hyaluronic acid (HA) or SF/HA (7 : 3 or 5 : 5 ratio) blend sponge. On the postoperative days of 3, 7, 10 and 14, the wound area was calculated by image analysis software. Simultaneously, the tissues were stained with Hematoxylin-Eosin and Masson's trichrome methods to measure the area of regenerated epithelium and collagen deposition. In addition, we evaluated the degree of the epithelial cell proliferation using immunohistochemistry for proliferating cell nuclear antigen (PCNA). We found that the half healing time ($HT_{50}$) of SF/HA blend sponge treated groups were significantly decreased as compared with either those of SF or HA treatment group. Furthermore, SF/HA blend sponges significantly increased the size of epithelialization and collagen deposition as well as the number of PCNA positive cells on epidermal basement membrane as compared with those of control treatment. Especially, the 5 : 5 ratio group of SF/HA among all treatment groups was most effective on wound healing rate and histological studies. These results suggest that SF/HA blend sponges could accelerate the wound healing process through the increase of epithelialization, collagen deposition and basal cell proliferation in full thickness skin injury.
Calcium sulfate has a long history of medical use as an implant material. The biocompatibiliry of the material has been clearly established. Bone ingrowth concomitant with resorption occurs rapidly with efficient conduction of bone from particle to particle. Calcium sulfate also has a potential for functioning as a good bamer membrane. The purpose of this study was to compare the biocompatibility of different types of calcium sulfate grafting materials including an expelimental calcium sulfate compound on periodontal ligament cells in vitro as a preliminary test towards the development of a more convenient and useful form of grafting material which could promote regeneration of periodontal tissue. Human periodontal ligament cells were collected from the premolar teeth extracted for orthodontic treatment. cells were cultured in a.MEM culture medium containing 20% FBS, at $37^{\circ}C$ and 100% humidity, in a 5% CO2 incubator. Cells were cultured into 96 well culture plate $1{\times}104$ cells per well with $\alpha$-MEM and incubated for 24 hours. After discarding the medium, those cells were cultured in $\alpha$-MEM contained with 10% FBS alone (control group), in medcal-grade calcium sulfate(MGCS group), in plaster(plaster group), experimental calcium sulfate paste(CS paste group) for 1, 2, 3 day respectively. And then each group was characterized by examining of the cell counting, MTI assay, collagen synthesis. The results \vere as follows. 1. In the analysis of cell proliferation by cell counting, both medical-grdde calcium sulfate group and plaster group showed no stastically significant difference at day 1, 2, 3 accept for plaster group at day 1 compared to control group, but there was stastically significant difference between CS paste group and all other groups at day 1, 2, 3(P<0.05). 2. In the analysis of cytotoxicity by MIT assay, both medical-grade calcium sJlfate group and plaster group showed no stastically significant difference compared to control group at day 1, 2, 3 but there was stastically significant difference between CS paste group and all other groups at day 1, 2, 3(P<0.OS). 3. In the analysis of collagen synthesis by immunoblotting assay, high level was detected for medical-grade calcium sulfate group and plaster group at day 1, 2, 3 compared to CS paste group. On the basis of these results, medical-grade calcium sulfate and plaster was shown to possess biocompatibility whereas the CS paste had unfavourable outcome. This observation shows a need for modification of the materials contained in calcium sulfate paste.
Allomatrix (Wright Medical Tech, Inc., Arlington, Tenn, USA), is a newly designed, injectable putty with a reliable demineralized bone matrix (DBM), derived from human bone. The compound contains 86% DBM and other bone growth factors such as bone morphogenic protein (BMP)-2, BMP-4, insulin-like growth factor (IGF)-1, and transforming growth factor (TGF)-${\beta}1$. It has excellent osteoinduction abilities. In addition, DBM is known to have osteoconduction capacity as a scaffold due to its collagen matrix. This product contains a powder, which is a mix of DBM and surgical grade calcium sulfate as a carrier. A practitioner can blend the powder with calcium sulfate solution, making a putty-type material which has the advantages of ease of handling, better fixation, and no need for a membrane, because it can function as membrane itself. This study reports the clinical and radiographic results of various guided bone regeneration cases using Allomatrix, demonstrating its strong potential as a graft material.
Osteoblast(OBL) cells were isolated from ICR Swiss neonatal mouse calvarial tissues and cultured in a CO2 incubator with minimum essential medium (MEM) containing 0.25g BSA. The cells were cultured for 7 days and were treated with bovine parathyroid hormone (bPTH, 1-34) and calcitonin(CT). Enzyme activities related to mineral metabolism and other biochemical actions within the bone cells including protein phosphorylation were investigated. In other experiments using cultured calvarial bone tissues, hormones were treated for 24, 48, 72 or 96 hours. The activities of $\beta$-glucuronidase enzymes involved in bone collagen synthesis and mineral deposits were increased by 8% with bPTH and were inhibited with CT treatment, while those were 67% increase treated with bPTH and CT together. On the other hand, alkaline phophatase(AP) activities were inhibited by PTH hormone at all the time courses observed. Protein phosphorylation reaction in OBL was mediated by bPTH, cAMP and ionized Ca. Phosphorylation was observed in different cell fractions including homogenate, membrane and cytosol. The number of proteins phosphorylated by PTH, cAMP, and Ca were 10, 5, and 9, respectively. Most of the protein kinases(PKs) were existed in cytosolic compartment. In membrane fractions, two bPTH-dependent-PKs (70K, 50K Da) were observed of which 70K Da protein was also Ca-dependent. Most of the cAMP-dependent PKs were regulated via bPTH. 70K, 50K, 5K, 19K, 16K, 10.5K phosphoproteins regulated by Ca share the same pathways as those by bPTH-dependent proteins. Ca seems to regulate PK activities differently from cAMP.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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