Objectives: Calpain, a calcium-dependent cysteine proteinase, may be one of the proteolytic enzymes that mediate cartilage degradation associated with rheumatoid arthritis. The object of this study is to ascertain immunohistochemically whether calpain is present in the inflamed joints of collagen-induced arthritis of rats, and examine the effect of Cortex Acanthopanacis Senticosi on the expression of calpain. Methods: Male Lewis rats, around 200g of body weight, were immunized with bovine type II collagen. After 3 weeks from first immunization, rats were divided into arthritic control (n=6) group and Cortex Acanthopanacis Senticosi-treated (n=6) group. Non-immunized rats served as the normal (n=6) group. All animals were sacrificed at 15 days post-treatment and tibiotarsal joints were removed. Calpain immunohistochemistry was performed on the midsagittal section of the tibiotarsal joint. Results: All animals of the control and treated groups showed ankylosing osteoarthritis. However, the animals of the treated group showed alleviation in the fibrous ankylosis, destruction of articular cartilage and destruction of subchondral bony tissue compared with the animals of the control group. Calpain was expressed in the chondrocyte lacunae of growing articular cartilage, in the skeletal muscle fibers, in the peripheral nerves, and in the vessel walls around the joints of all groups. In the control and treated groups, calpain was also expressed in proliferating synovial epithelia, subsynovial stroma cells, surface of articular cartilage, and fibrous pannus around destructive subchondral bony tissue. However, the expression density of calpain in the treated group was diminished compared with the control group, especially in surface of articular cartilage and fibrous pannus. Conclusions: These observations indicated that calpain plays an important role in the destruction of cartilage and bone in collagen-induced arthritis of rats, and also indicated that Cortex Acanthopanacis Senticosi inhibits the development of arthritis by decreasing the expression of calpain.
콜라겐은 포유동물의 가장 풍부한 동물성 단백짙로, 전체 단백질의 약 30 %를 차지하며, 결합 조직에 존재하며 대부분의 장기의 구조적 지지에 기여한다. Tripeptide (glycine-proline-hydroxyproline: INCI name Tripeptide-29) 는 collagen type 1의 주성분이며, palmitoyl tripeptide (palmitoyl-glycine-proline-hydroxyproline: INCI name Palmitoyl Tripeptide-29) 는 콜라겐의 합성을 촉진하는 항노화 불질로서 디자인된 합성소재이다 합성된 웹타이드 유도체는 HPLC를 이용하여 분식하였다. in vitro test를 통하여 콜라겐합성과 섬유아세포 증식 효능을 확인하였고, 비침습적 기기를 사용하여 피검자에 대한 8주간의 적용결과 피부주름과 탄력의 상당한 개선을 확인하였다. Palmitoyl tripeptide는 우수한 항노화 효능을 갖는 화장품 소재로 사료된다.
골재생을 위해 사용되는 골이식재로 자가골, 동종골, 이종골 등이 있다. 자가골은 가장 예지성이 높은 골이식재이지만, 부가적인 수술, 환자의 동통과 불편, 채취하는 양의 제한, 비용의 증가 등의 단점이 있다. 따라서 많은 연구자들은 오랫동안 자가골을 대체할 골이식재 개발에 힘써왔고, 다양한 연구가 있었다. 소로부터 유래한 이종골은 천연 다공성의 골 무기질로서, 인간의 골의 구조와 유사하면서, 골 전도성이 있고, 생체 적합성이 뛰어나다고 보고되었다. 이에 최근에 개발된 Ca-P 박막이 이종골과 조작성을 용이하게 하기 위해 부가적으로 type I collagen을 혼합한 골이식재를 토끼 두개골 결손부에 매식하여 골형성 능력 및 주변 조직의 반응을 보고자 하였다. 총 16마리의 New Zealand white rabbits를 사용하였고, 두개골에 4부위의 결손부를 형성한 후, 다음과 같이 적용하였다. 이식재를 넣지 않은 군을 음성대조군으로, 자가골 분말을 이식한 군을 양성대조군으로, Ca-P 박막 탈단백 우골 분말을 이식한 군을 실험1군으로, Ca-P 박막 탈단백 우골 분말과 type I collagen을 같은 부피로 혼합하여 이식한 군을 실험2군으로 하였다. 1, 2, 4, 8주째 4마리씩 희생하여, H-E 염색과 Masson's trichrome 염색을 시행한 후, 광학현미경을 사용하여 조직학적으로 관찰하였다. 토끼 두개골 결손부에 이식한 Ca-P 박막 탈단백 우골은 골성회복초기에 골결손부 변연에서 골전도성을 보였지만, 완전한 골성회복을 이루지 못하였고, 신생골과 직접적인 유합을 보이지 않았다. 또, collagen의 부가적인 사용은 조작성은 가장 우수했으나, 조직소견상 신생골의 형성을 보이지는 않았다. 반면 자가골을 이식한 부위는 신생골 형성양과 밀도에 있어서 가장 우수한 결과를 보였다.
Photobiomodulation (PBM) using organic light emitting diodes (OLEDs) surface light sources have recently been claimed to be the next generation of PBM light sources. However, the differences between light emitting diodes (LEDs) and OLED mechanisms in vitro and in vivo have not been well studied. In vivo mouse models were used to investigate the effects of OLED irradiation on cellular function and cutaneous wound healing compared to LED irradiation. Mice in the LED- and OLED-irradiated groups were subjected to irradiation with 6 J/㎠ LED and OLED (630 nm), respectively, for 14 days after wounding, and some mice were sacrificed for the experiments on days 3, 7, 10, and 14. To evaluate wound healing, we performed hematoxylin-eosin and Masson's trichrome staining and quantified collagen density by computerized image analysis. The results showed that the size of the wound, collagen density, neo-epidermis thickness, number of new blood vessels, and number of fibroblasts and neutrophils was significantly influenced by LED and OLED irradiation. The tissue levels of interleukin (IL)-β, IL-6 and tumor necrosis factor (TNF)-α were investigated by immunohistochemical staining. LED and OLED irradiation resulted in a significant increase in the tissue IL-β and IL-6 levels at the early stage of wound healing (P < 0.01), and a decrease in the tissue TNF-α level at all stages of wound healing (P < 0.05), compared to the no-treatment group. The expression levels of the genes encoding vascular endothelial growth factor and transforming growth factor-beta 1 were significantly increased in LED and OLED-irradiated wound tissue at the early stage of wound healing (P < 0.01) compared to the no-treatment group. Thus, OLED as well as LED irradiation accelerated wound healing by modulating the synthesis of anti-inflammatory cytokines and the expression levels of genes encoding growth factors, promoting collagen regeneration and reducing scarring. In conclusion, this suggests the possibility of OLED as a new light source to overcome the limitations of existing PBMs.
Purpose: The purpose of this study is to evaluate the remodeling process of the various skin substitutes in 4th and 6th weeks following the transplantation when transplanted onto nude mice. Methods: Three types of artificial skin substitutes, such as PLGA scaffold with keratinocyte sheets(group 1), acellular human dermis($Surederm^{(TM)}$) and keratinocyte sheet(group 2), bioengineered skin($Neoderm^{(TM)}$)(group 3), were applied to the wound on nude mice. All mice were killed in 2, 4 weeks and/or 6 weeks after grafting and tissue samples were harvested from the back of mice. The changes in wound size, degree of angiogenesis, formation of basement membrane and epidermis, density of collagen fibers and neural restoration were examined. Results: There was no significant changes in wound size among the three groups. However, the size of wound decreased in the non-substituted group due to contracture. Degree of angiogenesis and systhesis of collagen or neurofilaments were mostly increased in bioengineered skin($Neoderm^{(TM)}$)(group 3), followed by acellular human dermis($Surederm^{(TM)}$) and keratinocyte sheet(group 2), PLGA scaffold with keratinocyte sheets (group 1). However, group 3 and group 2 showed similar thickness of basement membrane and epidermis. Conclusion: We found that degree of angiogenesis, formation of basement membrane and skin appendages, density of collagen fibers and neurofilaments can be the categories to evaluate the success of artificial skin substitution in early stages.
Background and Objectives Presbyphonia is characterized by hoarse, breathy, weak vocal intensity. Extracellular matrix (ECM) in lamina propria (LP) of the vocal folds play an important role in voice production, and change of ECM according to the aging leads to the presbyphonia. The aim of this study was to investigate the histologic analysis of aging vocal fold of rat. Materials and Method Six and twenty two months old Sprague-Dawley rats (n=8, each group) were used and classified into young (six months old rats) and old (twenty two months old rats) group. Histologic analysis and immunohistochemical staining for ECM of LP were performed. Results Overall cellular density was significantly decreased in old rat group. Elastin fibers of LP were significantly decreased in old rat group. Type I collagen was significantly increased in old rat group. Type III collagen did not show significant difference. Hyaluronic acids did not show significant difference in Alcian blue staining and immunohistochemical staining. Conclusion Decreased general cellular density and elastin fiber and increased type I collagen were observed in the LP of vocal folds of aging rats. These ECM changes might to contribute the aging voice.
파슬리추출물이 피부에 미치는 개선효과를 조사하기 위하여, 배양 인체 섬유아세포에서 total Collagen, type I procollagen을 각질형성세포주인 HaCaT 세포에서 prostaglandin E$_2$(PGE$_2$), interleukin l$\alpha$ (IL-l$\alpha$)와 tumor necrosis factor $\alpha$ (TNF$\alpha$)를 무모생쥐(Female albino hairless mice, Skh:hr-1)에서는 진피의 두께와 밀도를 측정하였다. 그 결과, 1 $\mu\textrm{g}$/mL 농도의 파슬리 추출물은 total collagen은 23%, type I procollagen은 18% 증가시켰고, 자외선 B에 의한 PGE$_2$의 생합성은 약 60% 정도 감소시켰다. 10uM RA, 100 $\mu\textrm{g}$/mL SLS와 자외선 B 30 mJ/$\textrm{cm}^2$로 조사했을 때, IL-1$\alpha$ 및 TNF $\alpha$의 생합성 역시 1 $\mu\textrm{g}$/mL 파슬리추출물 처리 시 감소되었다. 4일 동안 1% 파슬리추출물로 폐쇄첩포한 무모생쥐의 진피 두께는 대조군에 비해 약 1.5배 정도 두꺼워지고, 밀도도 훨씬 촘촘해졌다. 본 연구의 결과는 파슬리추출물이 피부에서 노화방지 효과 및 자극완화 효과가 있음을 시사하고 있다.
Diabetes mellitus is a systemic disease with profound effects on oral health and periodontal wound healing. Uncontrolled diabetes adversely affects surgical wound healing and is often associated with abnormal proliferation of fibroblasts. Human gingival fibroblasts and PDL cells were chosen because they are intimately involved in periodontal therapy and are important for the success of surgical procedure such as guided tissue regeneration. The aim of the present study was to elucidate whether cellular activity and collagen synthesis by glucose pre-treated human gingival fibroblasts and PDL cells are influenced by insulin, and whether healthy cells differ from glucose treated cells. Cells were cultured with DMEM at $37^{\circ}C$, 5% $CO_2$, 100% humidified incubator. To evaluate the effect of glucose on gingival fibroblasts and periodontal ligament cells, the cells were seeded at a cell density of $1{\times}10^4\;cells/well$ culture plates and treated with 20 and 50mM of glucose for 5 days. Then MTT assay was carried out. To evaluate the effect of insulin on glucose-pretreated cells, the cells were seeded at a cell density of $1{\times}10^4\;cells/well$ culture plates and treated with 20 and 50mM of glucose for 5 days. After incubation, $10^3$, $10^4$ and $10^5mU/l$ of insulin were also added to the each well and incubated for 2 days, respectively. Then, MTT assay and collagen synthesis assay were carried out. The results indicate that cellular activity of gingival fibroblasts significantly increased by glucose while periodontal ligament cells were unaffected and cellular activity of gingival fibroblasts and periodontal ligament cells were unaffected by insulin. Collagen synthesis of gingival fibroblast with 20mM glucose and insulin unaffected, but 50mM glucose and insulin increased than control. Collagen synthesis of periodontal ligament cell with 20mM glucose and $10^5mU/l$ insulin significantly increased than other groups and 50mM glucose pretreated PDL cells significantly increased at $10^3mU/l$ insulin but decreased at $10^4mU/l$ insulin. Our findings indicated that these cell types differed in their growth response to glucose, and the increase in collagen synthesis was significantly raised at insulin level of $10^3mU/l$ in gingival fibroblasts and periodontal ligament cells except 20mM glucose pretreated periodontal ligament cells.
A series of biodegradable polymeric scaffolds was prepared by using a combination of natural (collagen) and synthetic (poly(caprolactone)) (PCL) polymers in various compositions. These scaffolds were soft, spongy, porous and transparent in nature and were characterized by thermogravimetric analysis (TGA) and Fourier transform infrared (FT-IR) spectroscopy. The entrapment efficiency and drug release activity of the scaffolds were analyzed using penicillin and tetracycline as antimicrobial drugs. The drug release activity of the scaffolds with various combinations of collagen and PCL were studied by measuring the optical density in a spectrophotometer at the following time intervals: 1,4, 24, 48 and 60 h. These scaffolds showed better and continuous drug release for up to 60 h. Even after such a long duration, a portion of the drug remained entrapped in the scaffolds, indicating that they can be utilized for wound healing applications.
To understand the corneal regeneration induced by bevacizumab, we investigated the structure changes of stroma and basement membrane regeneration. A Stick soaked in 0.5 N NaOH onto the mouse cornea and 2.5 mg/ml of bevacizumab was delivered into an alkali-burned cornea (2 ${\mu}l$) by subconjunctival injections at 1 hour and 4 days after injury. At 7 days after injury, basement membrane regeneration was observed by transmission electron microscope. Uneven and thin epithelial basement membrane, light density of hemidesmosomes, and edematous collagen fibril bundles are shown in the alkali-burned cornea. Injured epithelial basement membrane and hemidesmosomes and edematous collagen fibril bundles resulting from alkali-burned mouse cornea was repaired by bevacizumab treatment. This study demonstrates that bevacizumab can play an important role in wound healing in the cornea by accelerating the reestablishment of basement membrane integrity that leads to barriers for scar formation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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