커피에 작두콩 추출물의 혼합에 따른 항염증 효과를 평가하였다. 커피 추출물과 작두콩 추출물을 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5 (v/v)의 비율로 혼합한 시료를 대상으로 DPPH를 이용한 항산화 활성평가와 세포독성 평가 및 LPS로 염증이 유도된 RAW 264.7 세포에서 염증 매개물질인 NO, 염증성 cytokine인 TNF-α와 IL-6의 생성 및 iNOS 단백질의 발현을 측정하였다. 그 결과, DPPH radical-scavenging 활성은 작두콩 추출물의 농도에 의존적으로 높게 나타났으며, 커피와 작두콩 1:4 (v/v)의 혼합 비율에서 대략 80%의 DPPH radical-scavenging 활성을 보였다. MTS assay로 세포 생존율을 분석한 결과, 커피와 작두콩 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5(v/v) 혼합 추출물 모두에서 세포독성이 나타나지 않았다. LPS로 염증이 유도된 RAW 264.7 세포에서 TNF-α의 발현 저해 효과는 관찰되지 않았지만, iNOS 단백질 발현과 그에 따른 NO와 IL-6의 생성은 효과적으로 억제됨이 확인되었다. 특히, 커피와 작두콩 1:2 (v/v) 혼합 비율에서 IL-6와 iNOS의 발현이 유의하게 감소하였다. 이와 같은 결과를 종합하여볼 때, 작두콩을 커피의 블렌딩 소재로 이용함으로써 항산화와 항염증 기능이 향상된 커피음료의 제조에 응용할 수 있을 것으로 시사되었다.
커피의 풍미와 기호에 부정적인 영향을 미친다고 알려진 결점두의 활용가능성을 알아보고자 생두와 원두상태의 정상두와 결점두의 이화학적 특성을 분석하였다. 추출액의 pH와 가용성 고형분 함량은 로스팅 공정을 거친 후 감소하는 경향을 보였으며 색도는 $L^*$ value는 감소하고 $a^*$ value와 $b^*$ value는 증가하였다. DPPH radical 소거능은 로스팅 공정을 거친 후 감소하였으며 생두 추출물에서 결점두의 radical 소거능이 정상두보다 높았으며 Immature의 생두 추출물이 49.54%로 가장 높은 소거능을 나타냈다. 로스팅을 한 후 DPPH radical 소거능 원두 추출물간에는 유의적인 차이를 보이지 않았다. FRAP 활성 또한 생두 추출물이 15.28~21.80 mM TE 로 14.81~16.38 mM TE 의 활성을 나타낸 원두 추출물보다 높았으며 Sour의 원두 추출물을 제외하고 정상두에 비해 결점두의 FRAP 활성이 높게 나타났다. 총 페놀성 화합물 함량은 생두 추출물이 191.06~256.25 mg% GAE의 범위로 161.91~173.44 mg% GAE 의 범위를 나타낸 원두 추출물보다 높은 함량을 보였으며 Immature의 생두 추출물이 256.25 mg%로 가장 높게 나타났다. Trigonelline, caffeine, chlorogenic acid 함량은 Immature의 생두 추출물이 각각 895.20 mg/L, 825.85 mg/L, 3,836.94 mg/L로 가장 높은 수치를 나타내었고, 로스팅 공정을 거친 후 감소하였으며 특히 chlorogenic acid의 함량은 급격히 감소하였다. 이상의 실험결과로 미루어 보아 결점두의 항산화능과 기능성을 활용할 수 있을 것으로 판단되며 특히 활용할 시 생두의 형태가 더 적합하다고 판단된다.
Recently, coffee is the most popular beverage for modern people. A great number of substances are found in coffee beans and have been studied for many years such as aliphatic and aromatic compounds. However, studies on the physiological activity of coffee extracts are insufficient. This study was performed to determine the contents of caffeine and chlorogenic acid in coffee extracts according to the solvent and to investigate the physiological activity of coffee extracts. Coffee extracts were extracted by ultrasonication method with various types of solvents including distilled water, ethanol, and other organic solvents under $50^{\circ}C$ and $80^{\circ}C$. The contents of caffeine and chlorogenic acid in coffee extracts were determined by Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LC-MS). Also, cytotoxic and antioxidative effects of coffee extracts were evaluated with MTT and DPPH assays to analyze the physiological activity. As a result, it was confirmed that caffeine and chlorogenic acid contents were extracted in distilled water with the highest rate. Antioxidative activity was observed below 10-fold dilute of coffee extracts, however cytotoxicity was not observed. In conclusion, distilled water was the best solvent for extracting caffeine and chlorogenic acids from coffee bean with ultrasonication and these coffee extracts are less cytotoxic in human skin cell lines and have antioxidant effect.
본 연구에서는 커피 생두의 활용성 증대 및 기능성 식품 소재로 개발하기 위하여 커피 생두를 80% 에탄올로 추출한 후 동결건조 및 분무건조를 실시하여 분말의 물리화학적 품질특성을 조사하였다. 수율은 동결건조 분말이 91.46%로 분무건조 분말(71.63~87.98%)보다 높았으며, 수분함량은 사이클로 덱스트린을 10% 첨가한 분무건조분말에서 1.39%로가장 낮은 함량을 나타내었다. 분무건조 분말의 색도는 동결건조 분말에 비해 L값, a값 및 b값이 전체적으로 증가하였으며, 입자크기는 사이클로덱스트린을 10% 첨가한 분무건조 분말에서 $54.23{\mu}m$로 가장 작게 나타났다. 수분흡수지수 및 수분용해 지수는 사이클로덱스트린을 10% 첨가한 분무건조 분말이 각각 0.51 및 90.07%를 나타내었다. 총 페놀 및 총 플라보노이드 함량은 사이클로덱스트린을 10% 첨가한 분무건조 분말이 20.67 g/100 g 및 8.92 g/100 g을 나타내었으며, chlorogenic acid 함량은 사이클로덱스트린을 10% 첨가한 분무건조 분말에서 12.04 g/100 g을 나타내었다. 분무건조 분말의 DPPH 및 superoxide radical 소거활성은 사이클로덱스트린을 10% 첨가한 분무건조 분말 $1,000{\mu}g/mL$ 농도에서 각각 88.02% 및 86.89%를 나타내 가장 우수하였다. 폐 정상세포인 L-132 세포에 커피 생두 추출물 분무건조 분말을 처리하여 세포 사멸에 대한 보호효과를 측정한 결과, 모든 시료에서 농도의존적으로 세포생존률이 증가하였으며, 특히 사이클로덱스트린을 10% 첨가한 분무건조 분말에서 87.33%로 세포 활성이 증가하여 우수한 세포 보호효과를 확인하였다.
효소 및 미생물 복합제를 사용하여 인비트로 발효 루왁커피를 제조하여 non-fermented coffee beans(NFC)과 fermented coffee beans(FC)의 커피 품질을 비교하였다. 총유리아미노산 함량은 NFC가 254.01±4.89 mg/mL, FC가 264.15±16.80 mg/mL로 FC의 함량이 다소 높은 것으로 확인되었다. 이때 NFC는 glutamic acid, γ-aminon-butyric acid 등이 높았으나, FC는 lysine, leucine, valine 등 필수아미노산의 함량이 높았다. 커피 생두의 발효과정은 sucrose의 감소와 fructose 및 glucose의 유의적인 증가를 가져왔다. 커피 추출물의 색도는 NFC에 비해 FC 시료에서 높은 명도(L)와 적색도(a) 및 황색도(b)를 보였다. 카페인 함량은 NFC 1,130.22±1.55 ㎍/mL, FC 696.94±0.04 ㎍/mL로써 발효 후 약 38%의 카페인이 감소되었다. 폴리페놀 및 클로로겐산 함량은 NFC에서 각각 2.31±0.01 mg GAE/mL와 531.81±27.32 ㎍/mL, FC에서 각각 2.03±0.07 mg GAE/mL와 264.46±2.47 ㎍/mL로 발효에 따라 떫은맛 관련 성분의 함량이 유의적으로 감소됨을 알 수 있었다. 전자코 분석에서 NFC와 FC의 휘발성 향성분의 차이가 뚜렷함이 확인되었고, methylethyl formate, 2-methyl-1, 3-cyclopentadiene, 2-chloro-2-methylbutane, 2-methylbutanal 등의 휘발성 화합물이 발효 후 높은 강도로 감지되었다. 관능 평가에서는 NFC 추출물보다 FC 추출물의 aroma, body, aftertaste, overall에서 높은 관능 평점을 보여주었다(p<0.001). 이상의 결과에서 효소 및 미생물 복합제를 사용한 커피 생두의 발효는 유효 성분들의 변화를 일으켜 커피 원두의 로스팅 과정 중 Maillard 반응을 촉진함으로써, 향미가 증가되고 카페인 함량이 감소된 인비트로 루왁 커피의 제조 가능성을 시사하였다.
본 연구는 그린커피빈추출물이 「건강기능식품의 기준 및 규격」에 추가로 등재될 경우를 대비하여 표준화된 클로로겐산 시험법을 설정하고, 카페인이 동시 분석되도록 최적화하는 연구를 진행하였다. 최적화된 시험법을 마련하기 위해 기기분석 및 전처리 조건을 비교·분석하여 클로로겐산과 카페인을 30% 메탄올 추출하여 인산용액과 인산 함유 아세토니트릴으로 액체크로마토그래프를 통해 330 nm, 280 nm에서 분석하도록 시험법을 설정하였다. 시험법 밸리데이션 결과, 직선성 정량범위 내에서 상관계수(R2) 0.999 이상의 유의수준을 보였고, 클로로겐산과 카페인 검출한계는 0.5와 0.2 ㎍/mL, 정량한계는 1.4와 0.4 ㎍/mL로 나타났다. 정밀도와 정확도 결과는 AOAC 밸리데이션 가이드라인를 통해 적합함을 확인하였고, 클로로겐산 및 카페인 동시분석법을 최종적으로 마련하였다. 또한, 시제품과 유통제품을 통해 제형별 적용성 검토하여 클로로겐산과 카페인을 동시에 정량 가능한 시험법임을 재확인하였다. 최적화된 시험법은 클로로겐산을 함유한 건강기능식품 품질관리에 대한 신뢰성을 더 높일 것으로 본다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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