Fermentative hydrogen production by Citrobacter sp. Y 19 was investigated in batch culture. Optimal hydrogen production activity was observed at pH 6 - 7 and temperature of $36^{\circ}C$, and hydrogen yield and maximal hydrogen production rate were 1.12 mmol/mmol glucose and 32.3 mmol/g cell${\cdot}$h, respectively. With glucose as a substrate, the bacterium produced ethanol, acetate, and carbon dioxide as major glucose fermentation by-products. Y19 could utilize various sugars such as galactose, fructose, lactose, sucrose, and starch for cell growth and hydrogen production.
Citrobacter sp. is a cause of significant opportunistic nosocomial infection and is frequently found in human and animal feces, soil, and sewage water, and even in industrial waste or putrefaction. Biofilm formation is an important virulence trait of Citrobacter sp. pathogens but the process and characteristics of this formation are unclear. Therefore, we employed in vitro assays to study the nutritional and environmental parameters that might influence biofilm formation of C. werkmanii BF-6 using 96-well microtiter plates. In addition, we detected the relative transcript levels of biofilm formation genes by RT-PCR. Our results indicated that the capacity of C. werkmanii BF-6 to form biofilms was affected by culture temperature, media, time, pH, and the osmotic agents glucose, sucrose, NaCl, and KCl. Confocal laser scanning microscopy results illustrated that the structure of biofilms and extracellular polysaccharide was influenced by 100 mM NaCl or 100 mM KCl. In addition, nine biofilm formation genes (bsmA, bssR, bssS, csgD, csgE, csgF, mrkA, mrkB, and mrkE) were found to contribute to planktonic and biofilm growth. Our data suggest that biofilm formation by C. werkmanii BF-6 is affected by nutritional and environmental factors, which could pave the way to the prevention and elimination of biofilm formation using proper strategies.
Kim, Jung-Rae;Oh, You-Kwan;Yoon, Yeo-Joon;Lee, Eun-Yeol;Park, Sung-Hoon
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.13
no.5
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pp.717-724
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2003
A newly isolated Citrobacter sp. Y19 catalyzes the CO-dependent $H_2$ production (biological water-gas shift reaction) by the actions of CO dehydrogenase (CODH) and hydrogenase. Y 19 requires $O_2$ for fast growth, but its $H_2$ production activity is significantly inhibited by $O_2$. In the present study, the effect of $O_2$ on the activities of CODH ard hydrogenase was investigated quantitatively in both whole cells and broken cells, based on CO-dependent or methyl viologen (MV)-dependent $H_2$ production in addition to CO-dependent MV reduction. In crude cell extracts, CODH activity was mostly found in the soluble fraction. Inactivation of CODH and hydrogenase activities by $O_2$ followed the first-order decay kinetics, and the dependence of the rate constants on $O_2$ partial pressure could be expressed by the Michaelis-Menten equation. In whole cells, the maximum deactivation rate constants ($k_{d,max}$ of hydrogenase and CODH were quite similar: $0.07{\pm}0.03 min^{-1}\;and\;0.10{\pm}0.04 min^{-1}$, respectively. However, the first-order rate constant ($k_{d,max}/K_s$) of CODH ($0.25\;min^{-1}\;atm^{-1}$) at low $O_2$ partial pressures was about 3-fold higher than that of the hydrogenase, since the half-saturation constant ($K_s$) of CODH was about half of that of hydrogenase. In broken cells, both enzymes became significantly more sensitive to $O_2$ compared to the unbroken cells, while $k_{d,max}/K_s$ increased 37-fold for hydrogenase and 6.7-fold for CODH. When whole cells were incubated under anaerobic conditions after being exposed to air for 1 h, hydrogenase activity was recovered more than 90% in 2 h suggesting that the deactivation of hydrogenase by $O_2$ was reversible. On the contrary, CODH activity was not recovered once deactivated by $O_2$ and the only way to recover the activity was to synthesize new CODH. This study indicates that $O_2$ sensitivity of $H_2$ production activity of Citrobacter sp. Y19 is an important drawback as in other $H_2-producing$ bactria.
To identify genes involved in the decolorization of brilliant green, we isolated random mutants generated by transposon insertion in brilliant green-decolorizing bacterium, Citrobacter sp. The resulting mutant bank yielded 19 mutants with a complete defect in terms of the brilliant green color removing ability. Southern hybridization with a Tn5 fragment as a probe showed a single hybridized band in 7 mutants and these mutants appeared to have insertions at different sites of the chromosome. Tn5-inserted genes were isolated and the DNA sequence flanking Tn5 was determined. By comparing these with a sequence database, putative protein products encoded by bg genes were identified as follows: bg 3 as a LysR-type regulatory protein; bg 11 as a MalG protein in the maltose transport system; bg 14 as an oxidoreductase; and bg 17 as an ABC transporter. The sequences deduced from the three bg genes, bg 2, bg 7 and bg 16, showed no significant similarity to any protein with a known function, suggesting that these three bg genes may encode unidentified proteins responsible for the decolorization of brilliant green.
The 6.8 kb Xhol fragment of chromosomal ONA of Pseudomonas sp. 0177 contains the phnDEFG genes involved in the degradation of polyaromatic hydrocarbons and chlorinated aromatics. Here, we report the nucleotide sequence of the ORF encoding a polypeptide consisted of 143 amino acids with a Mr of 13,859. The nucleotide sequence of the ORF is 99% and 68.6% identical to the downstream region of catE of Sphingomonas sp. strain HV3 and the ORF between xylE and xylG of Sphingomonas yanoikuyae Bl, respectively. The deduced amino acid sequence of the PhnF has 62.3% identity with the amino acid encoded hy orfY region of Citrobacter freundii DSM30040. We now confirm that the ORF is located between the catechol 2,3-dioxygenase (C230), phnE, and 2-hydroxymuconic semialdehyde dehydrogenase (2HMSO), phnG.
Naengmyon is a Korean buckwheat noodle with chilld broth, and the juice of dongchimi, a Korean radish pickle fermented with wild lactic acid bacteria, has been used as the broth for naengmyon traditionally. The purpose of this study was to demonstrate the inhibitory effect of dongchimi-juice against coliform bacteria in model system of naengmyon-broth. Dongchimi-juice was made from radish juice by the cultivation of lactic acid bacteria which had been isolated from kimchi. Three types of naengmyon-broth, beef-broth type, dongchimi-juice type and the mixed type, were made as model systems, and then the changes in viable cell counts of seven coliform bacteria, Klebsiella planticola Bo2, X. terrigena CO8, K. pneumoniae DOI, K. ozaenae DO4, Enterobacter sp. AO2, Enterobacter sp. CO7, Citrobacter sp. BO7 and Escherichia sp. DO3, which had been added to each type of naengmyon-broth in advance, were investigated during storage at 3$0^{\circ}C$ All coliforms grew rapidly in naengmyon-broth of beef-broth type, while none grew in dongchimi-juice type or in the mixed type. All coliforms died out far more rapidly in dongchimi-juice type than in mixed type. The decreasing slopes of Citrobacter sp. Bo7, K. planticola BO2, X. terrigena CO8 and K. ozaenae DO4 were more steep than those of the rest. It was thought that the preparation method of Korean traditional naengmyon such as dongchimi-naengmyon or Pyongyang style-naengmyon, which uses oxy dongchimi-) juice or the mixture of dongchimi-juice and beef-broth, would be very effective for preventing the growth of coliform bacteria from naengmyon.
This study was conducted to obtain information of the oral dose acute toxicity of PGB-2, a novel polyglucosamine polymer produced from Citrobacter sp. BL-4 (a new strain) in male and female mice. Mortality, body weight changes, clinical signs were monitored during 14 days after single oral dose of test article at dose levels of 2000, 1000, 500, 250 and 125 ml/kg. Gross lesions, organ weight and histopathology of principal organs were examined after necropsy. As the results, we could not find any mortalities, clinical signs, changes in the body weight and gross findings except for white foci in the liver. In addition, no PGB-2-treatment related abnormal changes on the organ weight and histopathology of principle organs were detected except for atypical signs of liver. White liver foci were confirmed as focal infiltration of inflammatory cells. The results suggest that the PGB-2 is relatively safe in mice but the possibility of hepatotoxicity could not be excluded. The $LD_{50}$ and approximate LD in mice after single oral dose of PGB-2 were considered over 2000 mg/kg, respectively. In future, the potential hepatotoxicity of PGB-2 should be evaluated through the repeat dose toxicity test prior to develop as a new agent.
Disease monitoring was conducted to investigate the recent disease occurrence in Japanese eels (Anguilla japonica). Between May 2021 and March 2022, an investigation was conducted on eels from seven farms experiencing mortality. JEECV (Japanese eel endothelial cells-infecting virus) was detected in all examined farms, each exhibiting co-infections with 1 or 2 bacteria, including Edwardsiella anguillarum, E. piscisida, Aeromonas sp., Citrobacter freundii, Lactococcus garviae, or Vibrio sp. From March 2022 to October 2023, monthly periodic inspections were carried out at a farm in Yeonggwang, Jeollanam-do, for a total of 22 times. JEECV was detected in 10 out of 22 times, even when mortality was not recorded. Bacteria such as E. anguillarum, C. freundii, Aeromonas sp., and Vibrio sp. were isolated, but consistent clinical signs of liver abscess and hemorrhagic lesions were only recognized in fish infected with E. anguillarum. Other bacteria were often isolated from apparently healthy fish. In conclusion, mortality in eel farms frequently occurs due to co-infections of JEECV with bacteria rather than JEECV alone. Therefore, to reduce eel mortality, it is crucial to decrease co-infections, with a particular emphasis of JEECV and E. anguillarum.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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