• Applied Biological Chemistry
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• 제32권2호
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• pp.116-125
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• 1989

대두로부터 추출, 정제한 Bowman-Birk형 protease inhibitor 들의 함량과 전기영동양상을 비교하고 정제된 inhibitor내에 존재하는 각 isoinhibitor들의 함량을 조사하였으며 종실내 총 chymotrypsin 저해활성도와 cysteine 함량과의 관계를 알아보았다. 8품종의 대두로부터 Sephadex G-75를 이용하여 얻은 정제된 Bowman-Birk형 protease inhibitor들의 함량은 단백질 100g당 $6.67{\sim}9.36g$으로 품종간에 큰 차이가 있었다. 정제된 Bowman-Birk형 protease inhibitor들의 전기영동 양상은 품종간에 많은 차이를 보였으며 각 band의 함량에도 차이가 있었다. 8품종의 정제된 inhibitor에서 나타나는 총 14개의 전기영동 band 중 10개의 band가 protease 저해활성도를 보유하였고 그중 chymotrypsin 저해활성도가 높은 것은 band 7이었으며 그 함량은 단백질 100g당 $0.768{\sim}1.271g$으로 품종간에 차이를 보여 종실내 chymotrypsin 저해활성도가 높은 품종에서 함량이 많았다. 대두품종별 chymotrypsin 및 trypsin저해활성도는 각각 종실 g당 $52,200{\sim}15,225$와 $164,700{\sim}37,500$으로 품종간에 3배 및 4배의 차이를 보였고 단백질 g당으로 환산한 값은 $158,662{\sim}40,033$ 및 500, $608{\sim}120,347$로서 종실 g당 저해활성도와 같은 경향이었으며 3배 이상의 차이를 보였다. 품종별 cysteine 함량은 단백질 g당 $0.1258{\sim}0.0763-mmoles$로서 품종간에 차이를 나타내었으며 이는 실내 총 chymotrypsin 저해활성도와 정의상관관계가 있었다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제33권4호
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• pp.287-292
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• 1990

황금종 대두로 부터 8종의 Bowman-Birk형 proteinase inhibitor들을 DEAE-Sephadex A-50으로 전기영동상 단일 band로 순수하게 분리하였다. 이중 inhibitor VII cysteine함량이 17%로 높고 trypsin 및 chymotrypsin에 대해 각각 독립적인 결합부위를 가지고 있으며 상기 두 효소에 대한 저해활성도의 비(TIA/CIA)가 1.0으로 전형적인 Bowman-Birk trypsin inhibitor(BBTI)로 확인되었다. 본 inhibitor와 trypsin 및 chymotrypsin complex의 dissociation constant는 각각 $9.17{\times}10^{-9}M$과 $5.14{\times}10^{-8}M$로 매우 안정하였다. 또한 inhibitor Vll은 열에 매우 안정한 단백질로 $100^{\circ}C$, 6시간 처리에도 저해활성도 감소가 50%밖에 안되었다. 순수분리된 7종의 다른 isoinhibitor중 inhibitor III만이 TIA/CIA값이 1.2로 BBTI와 비슷하였으나 그외 inhibitor I, II, IV, V,및 VIII은 그 값이 $3{\sim}29$로 BBTI와는 성질이 다른 isoinhibitnr로 추정되었다.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제25권1호
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• pp.115-121
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• 2012

The bumblebee Bombus terrestris is widely used in greenhouses to pollinate crops. Here, we report the molecular cloning and characterization of chymotrypsin inhibitor and chitin-binding protein homologs from B. terrestris. Two cDNAs encoding chymotrypsin inhibitor (Bt-CI) and chitin-binding protein (Bt-CBP) homologs were cloned from B. terrestris. Gene sequence analysis showed that Bt-CI gene consists of three exons encoding 75 amino acids, including a predicted 20-amino acid signal peptide, while Bt-CBP consists of two exons encoding 78 amino acids, including a predicted 26-amino acid signal peptide. The mature Bt-CI and Bt-CBP peptides contain ten and six conserved cysteine residues, respectively. Database searches using the deduced sequences of Bt-CI and Bt-CBP showed similarity to those from B. impatiens (96% peptide sequence identities). Bt-CI and Bt-CBP were expressed in both the venom gland and fat body of B. terrestris worker bees. The recombinant Bt-CI and Bt-CBP peptides were expressed in baculovirus-infected insect cells. Taken together, our findings describe the molecular characterization of Bt-CI and Bt-CBP from B. terrestris.

• 미생물학회지
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• 제28권3호
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• pp.264-267
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• 1990

The objectives of the current studies were to establish the optimal conditions for the production of extracellular protease inhibitor in a strain of Streptomyces fradiae. As results, it was found that cell specific growth rate was very critical for the production of protease inhibitor and the optimum specific growth rate was found to be 0.05 h$^{-1}$ . Dissolved oxygen tension and pH were also important to regulate the inhibitor production. The inhibitory mode of the purified inhibitor to .alpha.-chymotrypsin was found to be competitive (K$_{i}$=5.5*10$^{-7}$ M). One mole of inhibitor could bind two moles of .alpha.-chymotrypsin and the complex has very low dissociation constant.t.

• Applied Biological Chemistry
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• 제42권4호
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• pp.310-316
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• 1999

대두가공제품 중에 존재하는 Bowman-Birk protease inhibitor(BBPI) 함량을 protease 저해활성 측정 및 경합 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay(ELISA)로 살펴보았다. 항체제조를 위한 BBPI는 ion exchange chromatography와 전기영동 후 gel slicing 방법으로 시판 soybean trypsin-chymotrypsin inhibitor로부터 순수, 분리하였다. 순수분리한 BBPI를 면역원으로 rabbit anti-BBPI antibody를 조제하였으며 단백질 농도별 titration방법으로 BBP에 비교적 선택적으로 결합하는 항체임을 확인하였다. 이를 이용한 경합 ELISA 방법으로 BBPI를 정량하기 위한 표준 정량곡선을 작성하였으며 시료용액중의 BBPI 함량이 $0.03{\sim}30\;{\mu}g/ml$ 범위일 경우에 정량적인 분석이 가능하였다. 대두품종별 chymotrypsin 저해활성은 $8,462{\sim}12,428\;U/g$이었으며 BBPI 함량은 $482{\sim}692\;mg%$ 이었다. 시판 대두 가공제품 중에서 5종의 콩나물은 건물량 기준으로 $10,695{\sim}13,249\;U/g$의 chymotrypsin 저해활성과 $529{\sim}803\;mg%$의 BBPI 함량을 나타내었으며 일부 두부제품에서도 68.9 mg%정도의 BBPI가 검출되었다. 그 밖의 두유, 된장, 고추장 및 간장 등의 대두발효식품, 탈지대두박 등에서는 chymotrypsin 저해활성 및 BBPI가 거의 검출되지 않았다.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제24권10호
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• pp.1531-1534
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• 2003

• Applied Biological Chemistry
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• 제38권5호
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• pp.382-386
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• 1995

감자의 단백질 분해효소 억제제-II(PI-II)단백질은 카이모트립신 저해부위와 트립신 저해부위로 나뉘어 있는데 PI-II 유전자중의 하나인 PI-IIT 유전자의 염기서열에서 비롯된 아미노산 서열이 폴리펩타이드 카이모트립신 저해제(PCI) 단백질의 아미노산 서열과 84%의 높은 동질성을 가지고 있으므로 감자의 단백질 분해효소 억제제유전자 집단 (family) 중의 하나인 PCI와 homology가 있는 유전자단편을 클로닝하기 위하여 이미 클론된 PI-IIT 유전자로부터 PCR을 행하여 얻어진 DNA 단편을 백터에 클로닝하고 염기서열을 결정하였다. 염기서열을 확인한 유전자 단편을 박테리오파아지 T7 promoter와 terminator를 갖고있는 플라스미드 pET3a에 옮겨 대장균 BL2l(DE3)에서 발현시켰던바 IPTG의 부가에 따라 유기되는 것을 확인 하였으나 발현수준은 기대했던것에 미치지 못하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제10권1호
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• pp.81-85
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• 2000

An elastase inhibitor, SMFEI02, was isolated from culture broth of Streptomyces lavendulae SMF11. The inhibitor was purified by ultrafiltration followed by XAD-7 column and Dowex-1 anion-exchange chromatographies, and preparative HPLC. The molecular formula was determined to be $C_{14}H_{16}N_2O_2$ (MW244) by HRFAB-MS analysis. The inhibitor was identified to be a diketopiperazine cyclo(S-Phe-S-Pro) by the optical rotation value and MNR spectral data, and showed inhibitory activities for trypsin, chymotrypsin, cathepsin B, and papain as well as elastase with the Ki values ranging from 1.78mM to $2.86{\;}\mu\textrm{m}$. The inhibition showed a competitive mode for elastase, chymotrypsin, and cathepsin B, whereas it showed a noncompetitive mode for trypsin and papain.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제43권3호
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• pp.359-366
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• 1996

연구배경 : 기관지천식 등의 알레르기 질환의 병인에 호산구는 중요한 역할을 하며 화학주성의 연구는 새로운 변조성분에 대한 호산구의 반응을 평가하는데 in vivo 실험에 앞서 유용한 방법론으로 쓰이고 있다. 탈과립화된 비만세포와 활성화된 T 림프구가 기관지 천식의 병태생리에 관계하며 tryptase는 비만세포의 활성화후 분비되는 단백분해효소 중 하나로써 호산구의 화학주성과 활성화에 영향을 미칠 것으로 생각된다. 본 연구의 목적은 단백분해효소의 대표격인 trypsin과 chymotrypsin이 호산구의 화학주성과 활성화에 어떤 역할을 하는지 알고자 함에 있다. 방법 : 호산구의 분리는 혼합된 과립구로부터 호중구를 제거하는 면역자기방법으로 하였고 화학주성은 multi-well micro-Boyden chamber로 정량하였으며 ECP 유리정량은 fluoroimmunoassay를 이용하였다. 결과 : 호산구는 trypsin에 화학주성을 보였고 최대의 반응이 $1000{\mu}g/ml$에서 $56.52{\pm}14.50$/HPF로 양성대조군인 PAF에 필적하였다. 반면 chymotrypsin에 대해서는 화학주성을 보이지 않았다. Trypsin으로 처리한 호산구의 ECP 분비능은 trypsin 10, 100, $1000{\mu}g/ml$ 농도에서 음성대조군에 비하여 각각 2.7, 3.7, 6배 높았다. Soybean trypsin inhibitor로 전처치하였을 때 ECP의 분비능은 감소되었으며 $1000{\mu}g/ml$ 농도에서 음성대조군과 유의차이가 없었다. 결론 : trypsin은 호산구에 화학주성을 일으킬 수 있으며 호산구를 활성화하여 호산구 과립단백의 하나인 ECP를 분비하게 한다고 사료된다. 반면 chymotrypsin은 호산구에 대한 직접적인 작용은 없는 것으로 보인다.

• Food Science and Biotechnology
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• 제15권1호
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• pp.28-32
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• 2006

Protease inhibitor of 72.6 kDa was successively purified from chum salmon (Oncorhynchus keta) eggs by ion exchange, gel permeation, and affinity chromatographies. Protease inhibitor was purified with yield and purification fold of 1.50% and 58.11, respectively. SDS-PAGE results showed purified protease inhibitor consisted of two protein subunits of 54.0 and 18.6 kDa. Chum salmon inhibitor exhibited stability between 20 and $40^{\circ}C$ in weak acid environment (PH 6), and inhibited papain and cathepsin, members of cysteine protease, but not chymotrypsin. The protein inhibited cathepsin more effectively than did egg white protease inhibitor, whereas the reverse was true for papain. These results indicate chum salmon egg inhibitor is heterodimer, thus the inhibitor was classified as cysteine protease inhibitor.