This study was carried out to investigate the antioxidative and antitumor activities of Saussurea lappa for the purpose of developing a functional food. The methanol extract of Saussurea lappa was fractionated with five solvents (hexane, chloroform, EtOAc, BuOH, water) and examined for antioxidative activities and xanthine oxidase inhibitory activity in addition to growth inhibitory activity of human cancer cell (HT-29, SNU-1, HeLa). Total phenol compound contents were higher in EtOAC fraction than other fractions. Also, electron donating ability was over 90% at $500{\mu}g/ml$ (93.1 %) and $1000{\mu}g/ml$ (94.3%). The hexane fraction revealed stronger nitrite scavenging ability than the positive control (ascorbic acid) and its abilities were 22.4% and 42.8% at $500{\mu}g/ml$ and $1000{\mu}g/ml$, respectively. Xanthine oxidase inhibitory activity had similar tendency to electron donating ability. The EtOAc fraction showed high inhibition to xanthien oxidase activities at $500{\mu}g/ml$(81.9%) and $1000{\mu}g/ml$(90.4%). In the antitumor activity test, the hexane fraction exhibited potent growth inhibition activity against HT-29, SNU-1 and HeLa cells. Therefore, we believe that Saussurea lappa can be developed into a functional food with antioxidant activity. Additional studies are required for the hexane and chloroform fractions of Saussurea lappa to develop them into therapeutic supplements for stomach cancer, colon cancer, and cervical cancer.
Abu Affan, Md.;Karawita, Rohan;Jeon, You-Jin;Lee, Joon-Baek;Kang, Do-Hyung;Park, Heung-Sik
한국해양바이오학회지
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제2권3호
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pp.174-186
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2007
Amphora coffeaeformis and Achnanthes longipes are commonly found as dominant benthic microalgae in Jeju coastal water throughout the year. In order to investigate pharmaceutical uses of these diatoms, each single species was isolated with micropipette under phase contrast microscope and subcultured with synthetic seawater media which was enriched with F/2 media, trace metal solution and $Na_2SiO_3$). Growth characteristics of these species were also determined with different combination of salinity, nutrients concentration and temperature. Thereafter, mass culture of each species was done based on the maximum growth condition. Biomass was collected after two weeks of mass culture and freeze dried for antioxidant study. The antioxidant properties of different fractions (n-hexane, chloroform and ethylacetate) obtained by solvent fractionation of 80% methanolic extract of two microalgae were investigated for free radical, reactive oxygen species scavenging (Super oxide, Hydrogen peroxide, Hydroxyl radical and Nitric oxide), metal chelating and lipid peroxidation inhibition activities. All fractions of A. longipes showed higher $DPPH^{\cdot}$ (free radical) scavenging activities (n-hexane: 89.0%, Chloroform: 76.0%, Ethylacetate: 66.0%, Methanol: 90.6% and aqueous residue: 63.0%). N-hexane fraction of A. longipes showed significantly higher activity (49.0%) on nitric-oxide. Ethylacetate fraction of A. longipes and aqueous residue of A. coffeaeformis exhibited 64.0% and 75.6% metal chelating activity which was higher than commercial antioxidants (${\alpha}$-tocopherol: 18.0% and BHT: 16.0%). The n-hexane fraction of A. coffeaeformis had 67.5% activity on $DPPH^{\cdot}$. Chloroform and n-hexane fractions of A. coffeaeformis exhibited 46.2% and 47.6% $H_2O_2$ scavenging effects which were closely similar to commercial antioxidants (${\alpha}$-tocopherol: 49.2% and BHT: 58.6%). Chloroform and ethylacetate fractions of A. longipes and fraction of n-hexane and chloroform of A. coffeaeformis showed better lipid peroxidation activities than ${\alpha}$-tocopherol. These data suggest that both organic and aqueous fractions have good antioxidative compounds with different antioxidant properties.
율무와 현율무의 total methanol 추출물과 분획 한 후의 각 획분에서의 DPPH 라디칼 소거작용 및 tyrosinase 저해작용을 검색 비교하여 그 함량-작용간의 dose-dependent한 결과를 얻었다. 라디칼 소거작용은 율무의 n-butanol 분획이 가장 활성이 높아 standard로 사용한 BHT의 6.7배 정도의 농도에서 같은 $IC_{50}$값을 나타내었으며 $600\;{\mu}g/ml$ 이상의 고농도에서는 BHT와 거의 동등한 저해율을 보였다. 그러나 현율무에서는 total methanol 추출물을 분획한 후의 모든 획분이 total methanole 추출물의 활성보다 작아 분획에 따른 작용의 편재화를 이루지 못했다. Tyrosinase 저해작용도 모든 분획이 거의 유사한 저해율을 보여 역시 분획에 따른 activity의 편재화가 이루어지지 않았음을 알 수 있었으나 현율무의 chloroform 분획이 비교적 높은 활성을 보여 $IC_{50}$값이 $321.5\;{\mu}g/ml$이었다. 이는 활성이 확인된 trans-p-coumaric acid의 $IC_{50}$값이 $25\;{\mu}g/ml$, Kazinol E의 $IC_{50}$값이 $111.3\;{\mu}g/ml$임을 참조 할 때 분획으로서는 좋은 활성을 보였음을 알 수 있었다.
천연생리활성 물질로서의 국내산 무화과의 특성을 검색하고자 성숙시기별로 미숙과 I, 미숙과 II, 완숙과를 메탄올로 추출하고, 메탄을 추출물을 극성에 따라 계통분획하여, 각각의 분획물에 대해 미생물의 성장저해활성을 확인하였다. 식중독균 8종에 대한 생육정도를 측정한 결과, 모든 대상균주에 대부분에 대해 무화과 메탄올추출물 및 용매 분획물들에서 농도가 증가함에 따라 유의적으로 성장이 억제되는 것으로 나타났다(p<0.001). 무화과 메탄올 추출물은 완숙과보다는 미숙과 I 및 미숙과 II에서 활성이 우수하여, L. monocytogenes을 비롯한 모든 사용균주에 대해 10 mg/mL에서부터 강한 억제활성을 보였다. 무화과 용매계통분획물에 의한 항균활성은 성숙정도와 대상균주에 따라 차이는 있었으나 0.1$\~$5.0mg/mL농도범위에서 극성이 낮은 헥산과 클로로포름 분획이 강한 항균활성을 나타내는 반면, 극성이 비교적 높은 부탄을 분획은 그보다 낮은 활성을 보였으며, 에틸아세테이트 분획과 물 분획에서는 항균활성을 거의 보이지 않았다. 추출 용매에 대한 항균력은 계통분획물들이 메탄을 추출물보다는 낮은 농도에서 항균활성이 나타났으나, 메탄을 추출물이 좀더 광범위한 균주들에 대해 억제활성이 있었으며, 계통분획물들은 분획에 따라 성숙시기에 따라 활성이 있는 균주가 특이적으로 다양하게 나타났다. 헥산분획물에서는 메탄올 추출물과는 달리 L. monocytogenes, E. coli O157:H7, Y. enterocolitica와 V. parahaemolyticus에 대해완숙과가 미숙과 I 또는 II보다 항균활성이 우수하게 나타났으며, 클로로포름 분획에서는 모든 성숙단계에서 E. coli O157:H7과 V. parahaemolyticus에 대해 저해활성이 매우 우수하였다. 또한 부탄올분획물에서는 메탄올추출물과 같이 미숙과 I, II에서 완숙과보다 더 우수한 항균활성을 보이는 균주들이 많았다. 본 실험에서 무화과 추출물 또는 계통분획물들은 식중독균에 대해 항균활성이 있는 것으로 확인되었고, 특히 전반적으로 판단하여 볼 때 성숙직전의 미숙과 II에서 항균활성이 보다 우수한 것으로 나타났다.
아직 국내에서는 드물게 경작되고 있지만 이미 옛 고서적에 나와 있는 초석잠 (Stachys sieboldii MIQ.)에는 많은 유용한 물질이 있음을 알 수 있었다. 줄기의 메탄을 추출물 100 mg을 메탄을 20 mL에 녹여 만든 샘플에서 total poplyphenol과 flavonoid가 각각 9.33 $\mu\textrm{g}$/mL (1.97%), 3.77 $\mu\textrm{g}$/mL (0.75%)씩 함유되고 있음을 알 수 있으며 각 유기 용매층의 추출물의 항산화 활성도를 비교해 본 결과 DPPH법을 통해 기존의 항산화제인 $\alpha$-tocopherol (21.8 $\mu\textrm{g}$), BHT (100 $\mu\textrm{g}$) 그리고 BHA (20.6 $\mu\textrm{g}$)와 비교해도 에틸아세테이트 (15 $\mu\textrm{g}$), 부탄올 (50 $\mu\textrm{g}$) 추출물의 항산화능이 뒤지지 않음을 알 수 있었다. 또한 과산화 지질 형성 억제능과 아질산염 소거능 조사에서 에틸아세테이트의 추출물이 가장 높은 활성도를 나타내었으며 기존의 항산화제들과 비슷한 효능을 나타내었다. 이를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피를 이용해 다시 분획하였고 UV/VIS 흡광광도계를 통해 최대 흡광도의 파장은 280-330 nm 사이에 나타내었다. 그 중 최대 흡광도가 284 nm인 ES-1에서 가장 높은 항산화 활성을 보였다. 이는 일반적으로 알려져 있는 phenolic compounds의 UV-VIS spectral data와 일치하며 다양한 phenolic compounds가 초석잠 (Stachys sieboldii MIQ.) 속에 함유되어 있음을 알 수 있었다.
닥나무 추출물의 항암효과를 검토하기 위하여 닥나무뿌리 껍질 methanol 추출물로부터 얻은 분획물(hexane, chloroform, ethylacetate, butanol, aqueous 층)들의 0.05∼1.0mg/ml 농도에 대해서 MTT assay를 통한 세포독성 측정 및 암세포 증식억제 효과를 in vitro로 검색하였고, in vivo에서 BALB/c mouse를 이용한 고형암 성장저지 실험 및 비장 장기 중량변화의 항암실험을 행하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 세포독성 실험에 의한 MTT assay 결과 모든 분획물들은 농도 의존성으로 효과가 나타났으며 1.0 mg/ml 농도에서 ethylacetate층은 sarcoma 180 cell에 대하여 75.7%의 가장 높은 세포독성 효과를 나타내었고 그 다음 aqueous, hexane, butanol, chloroform 층 순으로 각각 62.7%, 58.7%, 52.6%, 40.1%의 효과를 보였다. 각 분획물들에 의한 sarcoma 180 cell에 증식억제 효과는 배양일(1, 2, 3, 6일)이 증가함에 따라 암세포수는 증가하였으며 처음 1일째에 암세포 증식억제가 가장 많이 되었다. 1.0mg/ml 농도로 시료를 첨가하여 6일간 배양했을 때 ethylacetate 층은 60%의 억제율로 가장 현저 한 활성을 보였고 aqueous(42%), hexane(31%), butanol(30%), chloroform(19%)층 순으로 암세포 증식억제율을 나타내었다. 또한 암세포 증식에 대한 현미경 관찰을 해 본 결과 ethylacetate층은 대조군에 비하여 암세포 증식억제 정도와 형태 변화가 두드러지게 나타났다. BALB/c mouse에서 sarcoma 180 cell에 대한 각 분획물들의 고형암 성장저지효과는 1.0mg/kg으로 시료투여했을 때 ethylacetate 층은 대조군에 비하여 41%의 유의적인 저지율을 나타냈으며(p<0.05), 그 다음은 유의적이지는 않으나 aqueous 층 처리구가 39%,의 저지율을 나타내었다. 비장의 체중에 대한 중량변화는 대조군의 경우 1.08%인데 비해, ethylacetate층 처리군은 2.10%로 증가하였고 나머지 처리군에서는 대조군과 차이를 나타내지 않았다(p<0.05). 한편, mouse의 체중 변화는 대조군과큰 차이가 없었으므로 시료 추출물로 인한 체중 및 장기의 독성 문제는 없을 것으로 사료된다. 이상의 연구 결과로 닥나무 뿌리 껍질 methanol 추출물로부터 얻은 분획물중 ethylacetate와 aqueous 층은 세포독성 효과와 암세포 성장억제 효과 및 고형암 성장 저지 효과가 크게나타났으며, 체중에 대한 면역관련 장기인 비장의 중량증가로부터 면역계 활성과도 관계가 있을 것으로 사료된다. 따라서 닥나무 뿌리 껍질의 효능이 큰 분획물로부터 항암활성 물질을 분리 정제하고 기전확립의 연구가 앞으로 더욱 보충되어야 할 것이며, 암예방을 위한 기능성 식품 및 치료제의 개발에 대한 가능성 확인을 본 연구를 통하여 확인할 수 있었다.
42가지의 천연물 시료 중 세신, 호두(열수), 골쇄보, 뽕잎, 로즈마리에서 S. aureus ATCC 25923 및 MRSA KCCM 40511에 대해 우수한 항균활성을 나타냈다. 이들 시료 중 가장 우수한 항균활성을 가지는 로즈마리를 순차 분획하여 각 분획물을 이용한 MRSA에 대한 항균활성을 알아본 결과 hexane, chloroform 분획물에서 항균활성을 나타냈으며, 각 분획물 중 hexane 분획물이 가장 높은 저해활성을 나타내었다. 또한 SEM을 통한 형태학적 관찰을 통해 분획물 처리 시 MRSA의 세포벽이 파괴되는 것을 확인할 수 있었다. 로즈마리 메탄올추출물 및 hexane 분획물은 MRSA KCCM 40511의 내성 단백질인 MecA와 MecA에 의해 합성되는 세포벽 단백질 penicillinase의 발현을 억제시킴으로써 고도 내성균의 내성을 억제시키는 것으로 나타났다.
울금 분말을 methanol로 추출하여 여러 용매로 분획하여 식품부패미생물의 증식억제 효과를 검색하고 그 항균성 물질을 분리하였다. 울금의 ethyl acetate 분획 추출물은 낮은 농도인 1,000 ${\mu}g$/disc의 농도에서 B. subtilis, S. aureus, L. monocytogenes, E. coli, V. parahaemolyticus에 대하여 8.5 $\sim$13 mm의 clear zone을 형성하여 우수한 항균성을 나타내었다. 울금의 ethyl acetate 추출물을 silica gel column chromatography와 TLC로 monitoring 하여 항균성을 실험하였다. 이 결과 우수한 항균성을 보인 sub fraction을 재차 분리하여 yellow oil의 항균성물질을 얻었고 이를 GC/MS, $^1H$-NMR로 구조 분석한 결과 화학식이 $C_8H_8O$이며 분자량이 120.154의 2,3-dihydrobenzofuran(coumaran)으로 동정 되었다.
각종 식용유지에 대한 갈근 추출물의 항산화 효과를 검토하기 위하여, 수종의 유기용매를 사용하여 갈근으로 부터 항산화성 획분을 추출, 분리하여 돈지, 우지, 대두유 및 팜유에 첨가하고 $60^{\circ}C$, $100^{\circ}C$, $145^{\circ}C$에서 열처리하면서 POV, COV, TBA value 및 지방산 조성의 변화를 검토한 결과는 다음과 같다. 1. 갈근 분말을 ethanol, methanol : isopropyl al-cohol(1 : 4) 및 chloroform : methanol(95 : 5)로 항산화성 획분을 추출한 결과 얻어진 추출물의 수율은 2.5%이었다. 2. 각종 식용유지에 대하여 갈근 추출물을 0.1% 첨가하였을 때, $\alpha$-tocopherol 100ppm 첨가구 보다 다소 높은 항산화 효과를 나타내었다. 3. $60^{\circ}C$ 및 $100^{\circ}C$에서 가열처리 하였을 때 갈근추출물의 항산화 효과는 우지>팜유>돈지>대두유의 순이었다. 4. $145^{\circ}C$에서 갈근 추출물의 항산화 효과는 우지에서 미약 하였으며, 돈지, 팜유 및 대두유에 대해서는 거의 인정되지 않았다. 5. 구성 지방산중 포화 지방산 함량은 가열처리에 의하여 적게 변화하였으나 불포화 지방산의 함량은 크게 감소 하였다.
뽕나무 어린줄기를 이용하여 새로운 기능성 추출 음료개발을 위한 목적으로 뽕나무 줄기의 화학성분, 항산화 및 항균활성을 조사하였다. 일반성분은 조섬유 51.12%, 회분 13.46%, 총당 10.38%, 조지방 9.10% 및 조단백 5.01% 순으로 나타났다 뽕나무 어린줄기에 가장 많은 무기성분으로는 P(295.9 mg%)으로 나타났으며, 그 외 Ca 289.6 mg%, K 209.6 mg%, Na 58.3 mg%, Mg 45.0 mg% and Fe 4.6 mg% 순으로 나타났다. 유리당은 총 4종이 분리, 동정되었으며, 그 중 glucose가 1.08%로 높게 나타났고, galactose 0.22%, sucrose 0.20% 및 fructose 0.16%로 함유되어 있었다. 지방산은 8종이 분리되었으며, 주된 지방산으로는 linoleic acid, palmitic acid 및 linolenic acid로 나타났다. 분리된 18종의 총 아미노산 중 proline이 313.7mg%로 가장 높은 함량을 차지하였으며, 총 아미노산함량은2,450.5 mg%로 나타났다. 항산화 효과는 용매별 추출물에서는 methanol 추출물이 77.24%, 용매분획별 추출물에서는 ethyl acetate 분획층에서 80.08%로 각각 높게 나타났다. 뽕나무 어린 줄기의 메탄올 추출물은 Bacillus subtilis와 Bacillu scereus에 대하여 강한 항균활성을 나타내었다. 메탄을 추출물의 chloroform 분획층과 ethyl acetate분획층에서 병원성 미생물에 대하여 9.0~l9.0 mm의 저해활성을 나타내었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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