어병 세균으로부터 분리된 R-plasmid의 특성과 그 DNA 구조는 Aeromonas hydrophila, A. salmonicida, Edwardsiella tarda, Enterococcus seriolicida, Pasteurella piscicida, Vibrio onguillarum등 세균의 종류에 따라 다르다. 그러나 A. hydrophila와 E. tarda로부터 그리고 A. hydrophila와 A. salmonicida로부터 분리된 몇몇 R-plasmid는 같은 내성형을 가지면서 유사한 DNA 구조를 보였다, V. anguillarum에서 분리된 R-plasmid는 1977년 이전, 1980년과 1983년 사이 그리고 1989년과 1991년 사이에 분리된 것이 그 DNA 구조에 차이를 보여 각각 그룹 1, 2, 3으로 구분되어졌다. P. piscicida의 경우에는 연도와 지역에 관계없이 동일한 DNA 구조를 갖는 R-plasmid가 분리되었다. Macrolide계 항생제(MLs), lincomycin(LM), tetracycline(TC) 그리고 MLs, LIM, chloramphenicol(CP) 내성을 나타내는 R-plasmid를 갖는 E. seriolicida가 각 지역의 Yellowtail 어장에 분포되어 있었다. P. piscicida의 R-plasmid에는 type I의 chloramphenicol acetyltransferase(CAT)에 의하여 CP 내성을 나타내는 유전자(cat)가, 그리고 E. tarda, A. salmonicida와 1980년 이후에 분리된 V. anguillarum의 R-plasmid에는 CAT type II에 해당하는 car 유전자가 분포되어 있었다. TC 내성 유전자(tet)의 경우에는 1977년 이전과 1980년 이후에 분리된 V. anguillarum으로부터 class B, G의 tet 유전자가 확인되었으나, E. tarda, P. piscicida, A. hydrophila 그리고 1989년 이후에 분리된 V. anguillarum등 어병세균의 R-plasmid에는 class D의 tet 유전자가 널리 분포하고 있는 것으로 나타났다.
Pnicillinase를 분필하는 Streptomyces bobili YS-40균주의 plasmid DNA를 phemol방법으로 유출하여 Bocillus subtilis IAM 12118균주에 형질 전환시켜서 penicillin 내성 plasmid DNA가 표현되게 하였다. 형질전환에 미치는 최적 pH와 온도는 각각 7.0, 3$0^{\circ}C$으로 나타났다. DNA와 Competent cell을 20분 이상 접촉시킴으로서 형질전환이 잘 일어났으며 DNA의 농도가 증가할수록 transformant의 수도 증가했다. DNA inhibitor 로 사용되는 lysine 의 첨가로 형질전환의 빈도가 약 6배정도 상승되었으며 chloramphenicol은 형질전환의 빈도에 별 영향을 미치지 않았다.
알코올 생산성이 높은 Zymomonas 균주의 기질 이용성을 넓히기 위한 목적으로 natural replicon을 포함하며 적당한 항생제 저항표지를 갖는 plasmid vector의 제조를 시도하였다. Z. mobilis ATCC10988에서 분리된 몇 개의 plasmid중 3.9kb의 적당한 크기를 갖는 pZM3를 선정하여 수종의 제한효소로 처리하여 절편의 크기에 따라 유전자 지도를 작성하였다. pZM 3의 replicon과 pBR 325의 chloramphenicol 저항유전자를 포함한 재조합 plasmid인 pHZ22를 개발하고 이 plasmid vector가 숙주세포인 Z. mobilis ATCC31821에서 독립적으로 replication됨을 확인하였다. 또 하나의 항생제 저항표지로서 RP4의 tetracycline 저항유전자를 분리하여 pHZ22에 도입함으로써 pHZT224를 제조하였는데 이 plasmid vector도 Zymomonas로 conjugation에 의해 전이되어 안정하게 유지 되었다. 본 연구를 통하여 개발된 plasmid vector는 Z. mobilis와 E. coli에 공히 작용하는 shuttle vector 로서 외부 유전자를 Zymomonas에 도입시킬 수 있는 유용한 유전자 운반체임이 확인되었다.
In this study, we aim to find the presence of virulence-related plasmid in Salmonella isolates from poultry, and the difference between S pullorum and S gallinarum on the plasmid profile and antibiotics resistance. We used seventeen isolates of Salmonella spp that were isolated from poultry. Thirteen isolates, S typhimurium(ST), S pullorum(SP) and S gallinarum(SG), contained virulence-related plasmids. These are 95Kd plasmid in ST and 85Kd plasmid in SP and SG. Three(1/4 of ST, 1/1 of SE, and 1/9 of SP) isolates have no detectable plasmids. The isolates of ST have relatively variable plasmid profile but the isolates of S pullorum except No 12(additional 3.0Kb plasmid) have common 85K6, 8.1Kb, 4.0Kb and 2.3Kb plasmid and two of three isolates of S gallinarum have common 85Kb, 4.0Kb and 2.3Kb plasmid but the rest has only 85Kb plasmid. Interestingly, all of the isolates of SP have 8.1Kb plasmid, and same size of plasmid is also found in one of ST isolates. All of the isolates have the resistance to penicillin, chloramphenicol, rifampicin, streptomycin, sulfamethazine and some isolates show the resistance to ampicillin and tetracycline. There is no relatedness between plasmid profile and antibiotics resistance and no differences between SP and SG in antibiotics resistance. Therefore further differentiation of each isolates by restriction enzyme assay and, if possible, charaterization of each plasmid, especially, 8.1Kb plasmid in SP and ST, may be necessary.
양식넙치에서 분리된 Edwardsiella tarda가 갖는 약제내성을 전달하는 R plasmid의 특성을 알아보기 위하여, 16종의 화학요법제에 대한 E. tarda의 감수성 정도를 비교하였으며, 내성형태 및 내성전달을 확인하고 transferable R plasmid를 분리하였다. E. tarda는 ampicillin, amoxicillin, erythromycin, flumequine, doxycycline(DOXY), nalidixic acid, novobiocin, oxolinic acid, oxytetracycline(OTC), thiamphenicol(TP) 그리고 sulfonamide의 11약제에 대하여 다양한 조합으로 복합내성을 보였으며, DOXY, OTC, TP 내성이 Escherichia coli로 전달되었다. 복합내성의 두 균주에서 transconjugant가 형성되었으며 이들로부터 분리된 transferable R plasmid는 서로 상이한 DNA 구조였다. 이는 넙치에서 분리되는 E. tarda에는 적어도 두 종류 이상의 thansferable R plasmid가 분포한다는 것을 의미한다.
이 실험은 제주도내 양식장으로부터 유입수와 방출수의 다제내성(MDR)을 가진 Vibrio 균의 plasmid profiling을 위해 진행하였다. Plasmid profiling을 위해 사용한 다제내성을 가진 균주는 디스크 확산법을 통해 확인하였고, 유입수와 방출수으로부터 각각 150개의 Vibrio 균주를 분리하였다. 모든 다제내성 균주를 대상으로 plasmid profiling을 실시하였으며, 유입수와 비교하여 방출수에서 많은Vibrio 균이 열거되었다(유입수 39%, 방출수 61%). 방출수에서는 neomycin, sulfamethoxazole, amoxicillin 및 oxytetracycline의 내성을 가진 균주가 유의적으로 많은 것으로 확인되었고, 대조적으로 Vibrio 균주는 florfenicol, chloramphenicol, ciprofloxacin 및 nalidixic acid에 더 민감한 것으로 확인이 되었다. 99종의 다제내성 균주(유입수 39종과 방출수 60종) 중에서 총 58종(유입수 38종과 방출수 20종)이 1.7 kb에서 10 kb 이상의 플라스미드를 가지고 있는 것을 확인하였으며 플라스미드 크기마다 19가지의 다른 다제내성 패턴을 보였다. 6종의 유입수와 4종의 방출수에서 다제내성 균주는 특이적인 plasmid profile이 확인되었다. 방출수 샘플은 보다 많은 플라스미드를 가진 다제내성 Vibrio 균주와 다양한 plasmid profile들과 다제내성 패턴을 가지고 있었고 이는 양식장의 저장탱크가 항생제내성 유전자의 저장소 역할을 할 수 있다는 점을 시사한다. 양식장의 방출수에서 plasmid를 가진 다제내성 Vibrio 균주의 존재는 항생제 내성 유전자의 전파에 기여할 수 있으며 이로 인해 인간의 건강을 위협할 수 있다.
This study was conducted to investigate the antibiotic resistance and plasmid profiles of 58 salmonella spp isolated from mesenteric lymphnodes of slaughter pigs in Kyoungbuk province during the period from September 1997 to June 1998. The results obtained are as follow that all isolates were susceptible to amikacin, gentamicin, ciprofloxacin and enrofloxacin, and the majority of isolates were highly susceptible to norfloxacin, colistin, nalidixic acid and apramycin while they were moderately susceptible to kanamycin, cephalothin, chloramphenicol, ampicillin, trimethoprim and penicillin. The majority of isolates were over 90% resistant rates to lincomycin, sulfadimethoxine, vancomycin, methicillin and erythromycin. The plasmid profiles of 58 salmonella spp are developed 1 to 4 fractions, 0.9 to 29.5 Kb molecular range sizes and U strains (45.5%) were showed plasmid profiles by agarose gel electrophoresis. 5 derby harbored 29.5 Kb and 7 Kb, and S schwarzengrund had 14 Kb and 0.9 Kb harboring sizes. Four of 10 S agona and 2 of 4 S typhimurium were harbored 3.1 Kb and n.5 Kb, respectively. Thirty-five untypable strains are developed variable size fractions its showed small size plasmid profile less than 6 Kb and 22 (62.8%) of them had no detectable plasmids.
Streptomyces bobili (YS-40) 의 Hg, Ag, penicillin-G, ampicillin, chloramphenicol, oxytetracycline, streptomycin, kanamycin에 대한 생육최소저해농도는 각각 15, 10, >3,000, >100, >1,000. >100. <5, <5 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$였으며 본 균주의 R-plasmid를 제거시키기 위하여 ethidium bromide, acriflavine, sodium dodecyl sulfate 등의 curing agent를 처리시킨 결과를 요약하면 다음과 같다. Ethidium bromide를 10$\mu\textrm{g}$/$m\ell$의 농도로 처리했을 때 98.0% 정도의 R-plasmid를 제거시킬 수 있었다. pH 7.0에서 curing시킴으로서 R-plasmid가 가장 잘 제거되었으며 분균을 24시간동안 배양해서 curing시킴으로서 R-plasmid의 제거율이 가장 높게 나타났다. Ethidium bromide에 의해서 R-plasmid가 제거된 균과 원균을 여러가지 색소생성배지에서 배양시켜 배양상의 특성을 조사해 본 결과 peptone-beef extract agar 배지에서 aerial mass color가 greyish pink에서 grey로 변했으며 tryptone-yeast extract broth에서 배지에서 soluble pigment가 pale brown에서 무색으로 변했다. 이 결과로는 aerial mycelium, melanin 생성과 R-plasmid 는 무관하다고 추측된다.
남해안에 위치한 원유저장기지내의 각 정점으로 부터 원유분해세균을 분리하여 동정한 결과 Pseudomonas fluorescens, Acinetobacter baumanii, Pseudomonas maltophila, Pseudomonas aeruginosa 등으로 동정되었다. 원유를 탄소원으로 첨가한 최소배지상에서 원유분해능을 나타내었으며, 0.5%에서 6%까지의 NaCl 농도변화에 대한 원유분해능을 비교한 결과 5종의 원유분해균이 NaCl의 농도가 증가하였을 경우에는 원유분해능이 상실됨을 확인하였다. 또한 원유는 복잡한 유기화합물로 구성이 되어 있어 분리된 원유분해균이 n-decane, n-hexane, n-octane, n-dodecane 등의 간단한 탄화수소를 자화하는지를 확인하였다. 분리된 원유분해균이 plasmid를 가지는 지를 확인한 결과 Pseudomonas fluorescens 및 Pseudomonas aeruginosa 등에서 분자량이 매우 큰 plasmid가 존재함을 확인하고 ampicillin, tetracycline 및 chloramphenicol등의 항생제에 대한 내성을 조사한 결과 내성을 나타내어 원유분해에 관련된 유전자와 항생제내성을 나타내는 유전자가 plasmid상에 존재할 가능성이 높음을 알수 있다.
The clinical isolate Staphylococcus aureus SA2 had four kinds of plasmids and was resistant to ampicillin, chloramphenicol, clindamycin, erythromycin, gentamicin, kanamycin, methicillin, streptomycin, tetracycline and tobramycin. Transformation experiment demonstrated that 4.44 kb plasmid(pKH6) encoded resistance to tetracycline. The cleavage map of pKH6 was determined by restriction enzyme mapping techniques. The cleavage map is given for EcoRV, HindIII, HpaI, HpaII, KpnI and Xbal. Restriction endonucleases BamHl, BglI, BGIII, BstEII, EcoRI, HaellI, PstI, PvuII, SalI, Smal, and Xhol have no site on this plasmid. The restriction map revealed extensive structural homology between pKH6 and pT181.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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