Abundant amount of Chiamydia trachomatis could be amplified in mammalian McCoy cells and purified using descontinuous Uroarafin gradient centrifugation. As a chemical means io increase the Chlamydia trachomatis inclusions in McCoy cells IUdR treatment was found to be more effective than the cycloheximide treatment and was recommendanble for the proliferation of Chlamydia trachomatis. Centrifugation promoted Chlamydia trachomatis adhesion to McCoy cell surface, and maximal percentage of infected cells was obtained at about 3000g. The purified Chlamydia trachomatis could be kept in SPG solution for 48 hours at +4$^{\circ}C$ but for longer storage freezing to -7$0^{\circ}C$ was necessary.
Ha, Jung-Soon;Lee, Do-Bu;Han, Sang-Hoon;Lim, Yoon-Kyu;Yoon, Byoung-Su
Korean Journal of Veterinary Research
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v.46
no.1
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pp.13-19
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2006
Generally known psittacosis or ornithosis is a disease of birds caused by the bacterium Chlamydia psittaci. Humans are accidential hosts and are most commonly infected from avian sources. It raises hepatitis or neurosis. As major outer membrane protein (MOMP) of Chlamydia psittaci has been known to play a role in the avoidance of host immune defenses, research on developing a Chlamydia vaccine has focused on the MOMP. In this study, the gene encoding the major outer membrane protein (MOMP) of the Chlamydia psittaci strain 6BC was cloned and expressed in Escherichia coli strain M-15. The recombinant DNA was cloned by fusion prokaryotic expression vector pQE30-GFPII. Expression of the recombinant protein was performed in E. coli and was induced by IPTG. The size of expressed recombinant protein is 74.220 kDa (MOMP, 43.260 kDa; GFP expression region, 30 kDa; $6{\times}His$ tag, 960Da). This protein was purified by using his-tagging-inclusion body. Recombinant protein was reconfirmed through ELISA test and western blot with antibody against pQE30-GFPII. It will be useful antibody development.
Pneumonia, which usually requires hospitalization for children, is caused by various pathogens. According to recent surveys, the prevalence of atypical pneumonia caused by Mycoplasma or Chlamydia has increased, especially in preschool children. Also, the evidence has been accumulated that Mycoplasma or Chlamydia infection is associated with asthma including both inception and exacerbation. Therefore, it is important to consider how the clinical aspects of Mycoplasma pneumonia have changed. In particular, Chlamydia pneumonia, which has not been prevalent in Korea, needs greater attention.
Chlamydiae, obligate intracellular bacteria, are associated with a variety of human diseases. The chlamydial life cycle undergoes a biphasic development: replicative reticulate bodies (RBs) phase and infectious elementary bodies (EBs) phase. At the end of the chlamydial intracellular life cycle, EBs have to be released to the surrounded cells. Therefore, the interactions between Chlamydiae and cell death pathways could greatly influence the outcomes of Chlamydia infection. However, the underlying molecular mechanisms remain elusive. Here, we investigated host cell death after Chlamydia infection in vitro, in L929 cells, and showed that Chlamydia infection induces cell necrosis, as detected by the propidium iodide (PI)-Annexin V double-staining flow-cytometric assay and Lactate dehydrogenase (LDH) release assay. The production of reactive oxygen species (ROS), an important factor in induction of necrosis, was increased after Chlamydia infection, and inhibition of ROS with specific pharmacological inhibitors, diphenylene iodonium (DPI) or butylated hydroxyanisole (BHA), led to significant suppression of necrosis. Interestingly, live-cell imaging revealed that Chlamydia infection induced lysosome membrane permeabilization (LMP). When an inhibitor upstream of LMP, CA-074-Me, was added to cells, the production of ROS was reduced with concomitant inhibition of necrosis. Taken together, our results indicate that Chlamydia infection elicits the production of ROS, which is dependent on LMP at least partially, followed by induction of host-cell necrosis. To our best knowledge, this is the first live-cell-imaging observation of LMP post Chlamydia infection and report on the link of LMP to ROS to necrosis during Chlamydia infection.
After application of silver nitrate on every newborn, the incidence of gonococcal conjunctivitis was markedly decreased. But recently neonatal conjunctivitis due to chlamydia infection is increasing, so clinical observation was made on 26 newborn infants who showed eye discharge from June 1st to August 31st 1989. The results were as follows. 1. The incidence of chlamydia infection among neonatal Conjunctivitis was 34.6%. 2. The most common age at diagnosis was 6-15days of life and there was no sexual prepondrance. 3. There was no significant difference on clinical symptoms between chlamydia conjunctivitis and other Conjunctivitis. 4. Of 26 infants examined. 16 cases revealed no growth on routine bacterial culture. Of the organism cultured, P. aeruginosa was the most common agent(19.2%) and followed by S. aureus(11.5%) and S. epidermidis(7.6%). In one case of chlamydia I conjunctivitis, there was concurrent S. aureus infections. 5. On this study, Giemsa stain did not give significant diagnostic aid of chlamydia conjunctivitis.
Chlamydia pneumoniae is a type of pathogenic gram-negative bacteria that causes various respiratory tract infections including asthma. Chlamydia species infect humans and cause respiratory infection by rupturing the lining of the respiratory which includes the throat, lungs and windpipe. Meanwhile, the function of interleukin-4 (IL-4) in Ch. pneumoniae respiratory infection and its association with the development of airway hyperresponsiveness (AHR) in adulthood and causing allergic airway disease (AAD) are not understood properly. We therefore investigated the role of IL-4 in respiratory infection and allergy caused by early life Chlamydia infection. In this study, Ch. pneumonia strain was propagated and cultured in HEp-2 cells according to standard protocol and infant C57BL/6 mice around 3-4 weeks old were infected to study the role of IL-4 in respiratory infection and allergy caused by early life Chlamydia infection. We observed that IL-4 is linked with Chlamydia respiratory infection and its absence lowers respiratory infection. IL-4R α2 is also responsible for controlling the IL-4 signaling pathway and averts the progression of infection and inflammation. Furthermore, the IL-4 signaling pathway also influences infection-induced AHR and aids in increasing AAD severity. STAT6 also promotes respiratory infection caused by Ch. pneumoniae and further enhanced its downstream process. Our study concluded that IL-4 is a potential target for preventing infection-induced AHR and severe asthma.
The Journal of the Korean Society for Microbiology
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v.21
no.3
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pp.393-397
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1986
Chlamydia trachomatis is one of the most common cause in non-gonococcal urethritis. There are several diagnostic methods for Chlamydia trachomatis; culture method using McCoy cell, enzyme immunoassay and direct immunofluorescence staining etc. We have studied a sensitivities of culture, chlamydiazyme and direct immunofluorescence staining(DIF). 85 male patients previously conformed to non-gonococcal urethritis have been selected in this study. Three samples were concurrently collected in the same patient. First sample was used to inoculation in McCoy cell, 2'nd sample was used to Chlamydiazyme test and 3'rd sample was used to direct immunofluorescence staining method. The results are following. 1. All culture, Chlamydiazyme and DIF positive cases are 15/85(17.7%). 2. Culture and Chlamydiazyme positive but DIF negative cases absent. 3. Culture and DIF positive, but Chlamydiazyme negative cases are 2/85(2.4%). 4. Chlamydiazyme and DIF positive, but culture negative cases are 9/85(10.6%). 5. Culture positive, but Chlamydiazyme and DIF negative cases are 6/85(7.1%). 6. Chlamydiazyme positive, but culture and DIF negative cases are 7/85(8.2%). 7. DIF positive, but culture and Chlamydiazyme negative cases are 3/85(3.5%). 8. All culture, Chlamydiazyme and DIF negative cases are 43/85(50.1%). In summarized, anyone positive cases of culture, Chlamydiazymc and DIF are 42/85(49.9%).
The present study was performed to identify pathogenic factors of Chlamydia trachomatis, which invade the host cell membrane. We prepared monoclonal antibody against C. trachomatis and searched for pathogenic factors using this antibody, and subsequently identified the surface components of the elementary body of C. trachomatis, i.e., major outer membrane protein (MOMP), lipopolysaccharide (LPS), and two other surface exposure proteins. These proteins are believed to be important in the pathogenesis of host cell chlamydial infection. Additionally, to identify factors related to the host cell and C. trachomatis, we prepared C. trachomatis infected and non-infected McCoy cell extracts, and reacted these with anti-chlamydial LPS monoclonal antibody. We found that anti-chlamydial LPS monoclonal antibody reacted with a 116 kDa proteinaceous McCoy cell membrane component.
Cervical cancer continues to be an important public health problem in Thailand. While the high risk human papillomavirus (HPV) types have been established as the principle causative agent of both malignancies and the precursor lesions, cervical intraepithelial neoplasia (CIN), other factors may also be involved like other sexually transmitted diseases, as well as smoking. Chlamydia trachomatis is an obligate intracellular Gramnegative bacterium which has a tendency to cause chronic infection featuring inflammation and therefore might be expected to increase the risk of cervical cancer. In the present nested case-control study, 61 cases of cervical cancer and 288 matched controls with original serum samples were identified from the Khon Kaen Cohort, established in the North-East of Thailand, by linkage to the Khon Kaen population based cancer registry. C. trachomatis specific IgG antibodies at recruitment were measured by microimmunofluorescence and assessed for association with cervical cancer using STATA release10. No significant link was noted either with all cancers or after removal of adenocarcinomas. The results suggest no association between Chlamydia infection and cervical cancer development in North-East Thailand, but possible influencing factors must be considered in any future research on this topic.
Background : Chlamydia pneumoniae is a clinically important pathogen, the diagnosis of such infection being based mainly on serology. Microimmunofluorescence (MIF) is the current standard diagnostic method, but is subjective and time-consuming, so the authors tested the serology of chronic cough patients using an EILSA method for the Chlamydial antibody, which is a more objective method, and compared the results with those of the standard method. Method : Thirty-five patients, who visited Kangwon National University Hospital between August 2003 and July 2004, were evaluated. A MIF and ELISA tests were used to determine C. pneumoniae antibody titers. Nasopharyngeal aspirates were examined by polymerase chain reaction (PCR). The Spearman rank correlation test was used for data analysis. Results : Sensitivities of ELISA for IgG, IgA and IgM, as judged by MIF, were 84.0, 84.0 and 40.0% and the specificities were 60.0, 60.0 and 96.7%, respectively. Three patients were Chlamydia PCR positive. Conclusion : ELISA can be a useful tool for studying the seroprevalence of Chlamydia pneumoniae. However, further studies will be required prior to its clinical use.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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