The cell-free cellulolytic enzyme was separated into 3 different enzyme proteins by gel-filtration and ion-exchange chromatography. These fractions were named enzyme A, enzyme B and enzyme C. The mode of action of each of the separated enzymes on crystalline cellulose was examined using infrared spectroscopy and X-ray crystallography. It was concluded that enzyme B is of the $C_1-type$ and reduces the crystallinity of the subatrate by generation an unstable glucopyranose ring structure, whilst enzymes A and C are of the $C_x-type$ and hydrolyse the reaction product of enzyme B to constituent sugars. A reaction scheme for this cellulase system is proposed and discussed.
With the aim to explore the possible role of phosphate-solubilizing bacteria in soil, we conducted a survey of phosphate-solubilizing microorganisms colonizing in upland and plastic film house soils. Soil EC, pH, organic matter, available phosphate, exchangeable cation such as potassium, calcium and magnesium, and total P of plastic film house soils were higher than those of upland soils. Phosphate-solubilizing bacteria population was higher in plastic film house soils than upland soils, but species of phosphate-solubilizing bacteria was more diverse in the upland soils than the plastic film house soils. There was significant positive correlation between phosphate solubilization and phosphate-solubilizing bacteria in soils. Bacillus, Cedecea, Brevibacillus, Paenibacillus, Pseudomonas, Serratia spp. were isolated from upland soils and Bacillus and Cellulomonas spp. were from plastic film house soils.
In order to produce L-lysine from cellulosic substrates by the intergeneric protoplast fusion between cellulolytic bacteria, Cellulomonas flavigena KFCC31221 and amino acid producing bacteria, Brevibacterium flavum ATCC14067, Corynebacteriurn glutamicum ATCC13032, conditions for protoplast formation and regeneration of these strains were investigated. After the strains were mutated with 500$\mu\textrm{g}$/$m\ell$ N-methyl-N'-nitro N-nitrosoguanidine for 30 min and the mutants were enriched by treating 300$\mu\textrm{g}$/$m\ell$ penicillin-G for 2 hrs, B. flavum Hse- Str$^{r}$ , C. glutamicum Met$^{-}$Thr$^{-}$ Rif$^{r}$ and Cellulomonas flavigena Thr$^{-}$Val$^{-}$Kan$^{r}$ were isolated. The rate of protoplast formation ranged from 95 to 98% when strains were treated at the concentration of 500$\mu\textrm{g}$/$m\ell$ of lysozyme, pH 6.5, 33$^{\circ}C$, for 6 hrs. in Tris- malate buffer supplemented with 0.4M sucrose as osmotic stabilizer. Approximately 30-33% protoplast was regenerated on the regeneration complete medium(RCM) containing 1.5% agar and 0.5M sodium succinate overlaid with the same medium except 0.7% agar.
Proceedings of the Korean Society for Applied Microbiology Conference
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1974.06a
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pp.124.3-124
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1974
규정농도의 $NH_4OH로$ 처리한 볏짚을 기질로 분리ㆍ동경 한 섬유소 자화세균 Cellulomonas flavige na KIST 321 및 C. aurogena nov species KIST 11을 배양하여 구체단백을 생산할 때 최적 조건을 살펴 본 결과 다음과 같다.(중략)
Proceedings of the Korean Society for Applied Microbiology Conference
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1976.04a
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pp.183.1-183
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1976
우리나라에서 쉽게 얻을 수 있는 각종 섬유소 폐기물을 유일한 탄소원으로 하여 전보에서 분리 동정한 섬유소 자화 세균 Cellulomonas flavigena KIST 321을 배양하여 균단백의 생산에 대하여 살펴본 결과는 다음과 같다. 1) 당류를 탄소원으로 했을 때 cellulose꼭 xylose에서 균체생성량이 제일 많았다.(중략)
As an investigation on the catabolite repression system in cellulase production by Cellulomons sp. CS1-1, the organism was tested on the avicel overlay plates containing glucose or cellobiose at a range of concentration and was grown in continuous culture vessel, supplied by cellobiose medium, aiming the enhanced production of extracellular CM-cellulase at low dilution rates. Product inhibition of cellulase action by cellobiose was also tested. The results obtained are: i) no inhibition of CM-cellulase was observed up to 10 mM(3.4mg/ml) cellobiose in the reaction mixture, however 30% inhibition was observed at 20mM and 55% at 50mM, ii) the tests of catabolite repression on the solid media were successful, and avicel degradation was markedly repressed by glucose or cellobiose, iii) at low concentrations of cellobiose, dilution rate 0.05 and $1.0hour^{-1}$, no significant increase was observed in the production of either intra or extracellular CM-cellulase.
For the production of microbial cells from cellulosie materials by cellulore-assimilating bacteria, Cellulomonas flavigena GFB 24-1, isolated by authors, utilization of this organism on some microbiological properties was investigated. The results of these studies were summarized at follows; 1. When the organism was incubated in the growth medium at pH 7.0 for 50 hours, its growth was the most effective and the level of excreted total protein in the menstruum increased continuously during the stationary phase of cell growth. 2. The optimal enzyme activity was observed in the pH region of 5 to 7 and culture period of 40 to 50 hours. 3. The microbial degestibility of cellulosic wastes such as sawdust, rice hull, rice straw, peanut hull and used newspaper was less than 30%, whereas that of cellulose powder was 47.1% and rice straw was digested 77% by NaOH treatment. 4. Bacterial cells incubated in the growth medium were increased up to 8% of sustrate concentration and showed a decrease on further concentration. 5. The production of microbial cells from NaOH treated rice straw was obtained 10.6mg/ml of culture medium.
Journal of the Korea Organic Resources Recycling Association
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v.19
no.4
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pp.84-89
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2011
Cellulose-degrading bacteria were isolated and identified from cocopeat which has a good quality as a bulking agent in composting. Various bacteria from different sourecs of cocopeat were detected on CMC agar media, and these were found to be Burkholderi2a sp., Bacillu subtilis, Sphingomonas sp., Rhodotorula sp. & Pseudomonas sp. etc. Among these, four bacteria were further selected and analyzed for their biochemical characteristics and CMCase activities. CMCase activities of four bacteria, P. aeruginosa, P. stutzeri, B. subtilis, and P. luteola were found to be 83%, 40%, 8%, 6%, respectively, compared with that of the standard strain Cellulomonas sp.
Overproduction of intracellular ${\beta}$-glucosidase was attempted by modifying the promoter region of a ${\beta}$-glucosidase gene cloned from Cellulomonas fimi and expressing it in Bacillus subtilis DB 104. A strong engineered promoter, BJ27UΔ88, was fused to the ${\beta}$-glucosidase gene after removing its native promoter. An effective Shine-Dalgamo sequence (genel0 of phage T7) was inserted between the promoter and the ${\beta}$-glucosidase structural gene. The modified gene was overexpressed in B. subtilis and produced 1121.5 units of ${\beta}$-glucosidase per mg protein which is about $12\%$ of total intracellular protein. Secretion of overproduced intracellular ${\beta}$-glucosidase was attempted by using the signal sequence of the Bacillus endoglucanase gene as well as an in-frame hybrid protein of endoglucanase. The hybrid protein was normally secreted into the culture medium and still retained ${\beta}$-glucosidase activity.
Proceedings of the Korean Society for Applied Microbiology Conference
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1986.12a
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pp.527.3-527
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1986
Several factors predicted to affect the protoplast formation and regeneration were investigated. The optimum lysozyme, casamino acid and PVP concentration were 0.5 (mg/$m\ell$), 0.1 (%) and 1.5(%). In B. pumilus, Penicillin-G treatment concentration was 0.3 (U/$m\ell$) and optimum treatment period was transit log. phase. And in the case of Celm. fimi, 0.3 (U/$m\ell$) and initial log. phase. Osmotic stabilizer and di-cation for OSM medium of B.pumilus and Gelm .fimi were 25mM CaCl2, 0.5M sodium sucinate and 50mM MgCl$_2$, 100mM CaCl$_2$, 0.4M sodium succinate. The regeneration frequency of B.pumilus and Celm. fimi were 14.6(%) and 6.9(%).
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