JSTS:Journal of Semiconductor Technology and Science
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제7권3호
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pp.140-150
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2007
A simple, label-free microfluidic cell purification method is presented for separation of cancer cells by exploiting difference in cell adhesion. To maximize the adhesion difference, three types of polymeric nanostructures (50nm pillars, 50nm perpendicular and 50nm parallel lines with respect to the direction of flow) were fabricated using UV-assisted capillary moulding and included inside a polydimethylsiloxane (PDMS) microfluidic channel bonded onto glass substrate. The adhesion force of human breast epithelial cells (MCF10A) and human breast carcinoma (MCF7) was measured independently by injecting each cell line into the microfluidic device followed by culture for a period of time (e.g., one, two, and three hours). Then, the cells bound to the floor of a microfluidic channel were detached by increasing the flow rate of medium in a stepwise fashion. It was found that the adhesion force of MCF10A was always higher than that of MCF cells regardless of culture time and surface nanotopography at all flow rates, resulting in a label-free detection and separation of cancer cells. For the cell types used in our study, the optimum separation was found for 2 hours culture on 50nm parallel line pattern followed by flow-induced detachment at a flow rate of $300{\mu}l/min$.
The adhesion of probiotic bacteria to the intestinal mucosa is one of the desirable properties for their colonization in the intestinal tract, where these bacteria constantly compete with other bacteria. The adhesion of different strains of bifidobacteria to Caco-2 cells was compared. Among the strains examined, BGN-4 showed the highest adhesion level and the greatest cell surface hydrophobicity (CSH). No close relationship was found between the adhesion and CSH of the strains. Upon protease and heat treatment, the adhesion of the BGN-4 to the Caco-2 cells decreased significantly. The cells grown at $42^{\circ}C$ showed a lower CSH and self-aggregation levels than cells grown at $37^{\circ}C$. The treatment of EGTA did not have any effect on the adhesion. The degree of adhesion did not differ among the experimental groups in which galactose, mannose, or fucose were added in the adhesion assay mixture. The results suggest that the adhesion of the Bifidobacterium to the epithelial cells may be affected by the composition and structure of the cell membrane and interacting surfaces.
Background: Coating a culture plate with molecules that aid in cell adhesion is a technique widely used to produce animal cell cultures. Extracellular matrix (ECM) is known for its efficiency in promoting adhesion, survival, and proliferation of adherent cells. Gelatin, a cost-effective type of ECM, is widely used in animal cell cultures including feeder-free embryonic stem (ES) cells. However, the optimal concentration of gelatin is a point of debate among researchers, with no studies having established the optimal gelatin concentration. Methods: In this study, we coated plastic plates with gelatin in a concentration-dependent manner and assessed Young's modulus using atomic force microscopy (AFM) to investigate the microstructure of the surface of each plastic plate. The adhesion, proliferation, and differentiation of the ESCs were compared and analyzed revealing differences in surface microstructure dependent on coating concentration. Results: According to AFM analysis, there was a clear difference in the microstructure of the surface according to the presence or absence of the gelatin coating, and it was confirmed that there was no difference at a concentration of 0.5% or more. ES cell also confirmed the difference in cell adhesion, proliferation, and differentiation according to the presence or absence of gelatin coating, and also it showed no difference over the concentration of 0.5%. Conclusions: The optimum gelatin-coating for the maintenance and differentiation of ES cells is 0.5%, and the gelatin concentration-mediated microenvironment and ES cell signaling are closely correlated.
본 실험은 동백꽃의 효능을 알아보기 위하여, 동백꽃을 에틸알콜로써 추출한 후 극성이 다른 다양한 유기용매로 분획하여 나온 fraction으로 신생혈관생성 억제, cell cytotoxity, 세포부착분자에 대한 기능을 ELISA, westen blot 등으로 조사하였다. 신생혈관생성 억제 효과는 특히butanol 층에서 70.2%로 가장 높았으며, acetone층이 54.2%, 그리고 ethylacetate층이 37.0%, chloroform층이 21.2%로 유의성 있는 억제효과가 있었다. 특히 동백꽃의 butanol층은 신생혈관생성억제제로서 좋은 효과가 있는 것으로 판단된다. 그리고, 추출물의 농도별로 cell cytotoxity를 조사한 결과 농도가 200 ug/ml 이하에서 세포독성은 나타나지 않았다. Cell adhesion 저해율은 추출물의 농도 200 μg/mL 에서 ICAM-1은 52.9%, VCAM-1은 62.5%, 그리고 E-selectin은 35.7%로 나타났으며 동백꽃의 추출물의 성분 증가에 따라 발현이 감소됨으로써 cell adhesion을 저해하는 것으로 확인되었다. Westen blot 에서 첨가한 동백꽃 추출물의 농도가 높아질수록 신호전달분자의 발현이 약해지는 것을 관찰할 수 있었다. 따라서 신호전달 분자는 동백꽃 추출물에 의해서 신호전달이 차단되며, NF-KB를 억제함으로서 신생혈관생성을 저해하는 것으로 확인되었다. 따라서 동백꽃 추출물은 항암제 및 항비만제제로서 유용할 것으로 판단된다.
Ligand-receptor clustering event is the most important step in leukocyte adhesion and spreading on endothelial cells. Intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) has been shown to enhance leukocyte adhesion, but the molecular event during the process of adhesion is unclear. To visualize the dynamics of ICAM-1 movement during adhesion, we have engineered stable Chinese hamster ovary cell lines expressing ICAM-1 fused to a green fluorescent protein (IC1_GFP/CHO) and examined them under the fluorescence microscopy. The transfection of IC1_GFP alone in these cells was sufficient to support the adhesion of K562 cells that express $\alpha$L$\beta$2 (LFA-1) integrin stimulated by CBR LFA-1/2 mAb. This phenomenon was mediated by ICAM-1-LFA-1 interactions, as an mAb that specifically inhibits ICAM-1-LFA-1 interaction (RRl/l) completely abolished the adhesion of LFA-1* cells to IC1_ GFP/CHO cells. We found that the characteristic of adhesion was followed almost immediately (~10 min) by the rapid accumulation of ICAM-1 on CHO cells at a tight interface between the two cells. Interestingly, ICI_GFP/CHO cells projected plasma membrane and encircled approximately half surface of LFA-1+ cells, as defined by confocal microscopy. This unusual phenomenon was also confirmed on HUVEC after adhesion of LFA-1* cells. Neither cytochalasin D nor 2,3-butanedione 2-monoxime an inhibitor of myosin light chain kinase blocked LFA-1-mediated ICAM-1 clustering, indicating that actin cytoskeleton and myosin-dependent contractility are not necessary for ICAM-1 clustering. Taken together, we suggest that leukocyte adhesion to endothelial cells induces specialized form of ICAM-1 clustering that is distinct from immunological synapse mediated by T cell interaction with antigen presenting cells.
Histopathological vascular changes in hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) caused by Hantaan virus include increased vascular permeability, disseminated intravascular coagulation, thrombocytopenia and changes in coagulation activity. Although vascular endothelial cells of main target organs such as kidney infected with Hantaan virus are not damaged but swelling of endothelial cells, perivascular exudates and infiltration of mononuclear cells and fresh interstitial hemorrhages are common. However, the pathogenesis of cell infiltration and hemorrhages around vascular endothelial cells are not well understood. Some endothelial cell molecules or vascular adhesins that acts as adhesion moleulces for leukocyte are expressed on endothelial cells close to site of inflammation. However, whether the expression of endothelial adhesion molecules such as vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1), intercellular adhesion molecule (ICAM-1) and endothelial leukocyte adhesion molecule (ELAM) on vascular endothelial cells are increased by infection with Hantaan virus has not been studied. In this study, the relationship between the expression of VCAM-1, ICAM-1 and ELAM and adhesion of mononuclear cells on endothelial cells of human blood vessels infected with Hantaan virus was investigated. The endothelial cells of umbilical vein was passaged three times in culture medium and the monolayered cells were infected with $10^5\;pfu/ml$ of Hantaan virus grown in Vera E6 cell cultures. The multiplication of virus in cultured endothelial cells was monitored by immunohistochemistry and the expression of adhesion molecules was demonstrated by immunohistochemistry using monoclonal antibodies against VCAM-1, ICAM-1 and ELAM. And in situ hybriditation against ICAM-1 was also performed. The endothelial adhesion molecules, VCAM and ICAM, were expressed after 6 hours postinfection, respectively, and their expressions lasted for 72 hours. Similar expression of VCAM and ICAM appeared on endothelial cells by infection with virus, but the expression of ELAM was not recognized up to 72 hours postinfection. Microscopically, it was noted that many monocuclear cells adhered on endothelial cells infected with viruses. In an electronmicroscopic study, the transendothelial migration of mononuclear cells was observed on monolayered endothelial cells infected with virus. This results suggested that the endothelial adhesion molecules, particulary VCAM and ICAM, might be expressed on endothelial cells by infection with Hantaan virus and these molecules play a key role in the adhesion and extravasation of inflammatory cells around blood vessels.
Kaempferitrin, isolated from Kenaf (Hibiscus cannabinus), was examined to evaluate its modulatory effects on antigen-presenting cell functions of macrophages/monocytes such as phagocytosis of foreign materials, up-regulation of costimulatory molecules (CD40, CD80 and CD86), adhesion molecule activation, and antigen processing and presentation. Kaempferitrin strongly blocked up-regulation of CD40, CD80 and CD86, but not pattern recognition receptor (PRR) (e.g., TLR2). It also suppressed functional activation of CD29 (${\beta}1$-integrins), as assessed by cell-cell adhesion assay, required for T cell-antigen-presenting cell (APC) interaction. Furthermore, this compound did not block a simple activation of CD29, as assessed by cell-fibronectin adhesion assay. However, the compound did not diminish phagocytic uptake, an initial step for antigen processing, and ROS generation in RAW264.7 cells. In particular, to understand molecular mechanism of kaempferitrin-mediated inhibition, the regulatory role of LPS-induced signaling events was examined using immunoblotting analysis. Interestingly, this compound dose dependently suppressed the phosphorylation of $I{\kappa}B{\alpha}$, Src, Akt and Syk, demonstrating that it can negatively modulate the activation of these signaling enzymes. Therefore, our data suggested that kaempferitrin may be involved in regulating APC function-relevant immune responses of macrophages and monocytes by regulating intracellular signaling.
Osteoblast is one of cells related with osseointegration and many research have conducted the adhesion of osteoblast onto the surface of implant. In the osseointegration, biocompatibility of the implant and cell adhesion to the surface are important factors. The researches related to cell adhesion have a direction from micro-scaled surface roughness to nano-scaled surface roughness with advancing nanotechnology. A cell reacts and sense to stimuli from extracellular matrix (ECM) and topography of the ECM [1]. Thus, for better osseointegration, we should provide an environment similar to ECM. In this study, we synthesize TiO2 nanowires using hydrothermal reaction because TiO2 provides inertness to titanium on its surface and enables it used as an implant material for the orthopedic treatment such as fixation of the bone fracture [2]. Ti substrate is immersed into NaOH aqueous solution. The solution are heated at $140{\sim}200^{\circ}C$ for various time (10~720 minutes). After heat treatment, we take out the sample and immerse it into HCl aqueous solution for 1 hour. The acid treated sample is heated again at $500^{\circ}C$ for 3 hours [3]. Then, we culture osteoblast on the TiO2 nanowires. For investigating cell adhesion onto nanostructured surface, we conduct several tests such as MTT assay, ALP (Alkaline phosphatase) activity assay, measuring calcium expression, and so on. These preliminary results of the cell culture on the nanowires are foundation for investigating cell-material interaction especially with nanostructure interaction.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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