본 연구는 EGF가 체외수정 및 체외배양에 의해 생산된 생쥐배의 체내 발달에 미치는 영향을 조사하고자 실시하였다. 본 실험에 사용된 난자는 체외수정 후 얻어진 2-세포기배를 EGF 첨가유무에 따라 배양 (5-6 embryos/25${\mu}l$/drop)하여 얻어진 4일령의 배반포기배로서, 각 처리군의 배반포기배는 가임신 3일된 대리모의 자궁내에 이식되어졌다. 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1,2-세포기배를 EGF의 첨가유무에 따라 배양하여 배반포기배로의 발달율과 세포수를 조사하였던 바, 처리군간의 유의한 차이는 나타나지 않았다. 2. 하지만, 각 처리군에서 회수된 배반포기배의 체내 발달을 조사하였던 바, 총 수태율의 결과에 있어서는 대조군과 EGF 처리군 각각 64.4%와 69.8%로서 두 군간에 유의한 차이를 나타내지 않았지만, 정상태아 발생율에 있어서는 EGF 처리군 (51.2%)이 대조군 (31.1%)보다 매우 높게 나타냈다. 따라서, 비록 EGF 처리군이 대조군과 비교하여 볼 때 체외수정 및 체외배양에 의해 생산된 난자의 유의한 발달은 나타내지 않았지만 난자의 질적인 향상을 통해서 체내발달을 증진시킬 수 있을 것으로 사료된다.
본 연구는 체외에서 한우 난포란의 핵성숙과 그 후의 초기 배발달에 있어서 체외성숙 배지에 아미노산의 첨가가 난포란의 제1극체(PB) 출현율, 배발달율 그리고 배반포의 세포수에 미치는 영향을 검토하였다. 첨가하는 아미노산의 종류와 농도는 각각 MEM 배지의 non-essential amino acids (NEAA)와 BME 배지의 essential amino acids(EAA)는 1, 2, 4배 및 유청중의 lactalbumine hydrolysate(LAH)는 1, 5, 10 mg/$m\ell$이었다. 그 결과 NEAA와 EAA의 경우 PB 출현율은 1배 첨가군이 미첨가군보다 유의하게 높았지만(p<0.05), 첨가량이 증가할수록 오히려 감소하였다. 그러나 배반포로의 배발달율은 모든 군에서 비슷한 경향이었다. 그리고 배반포의 총 세포수와 총 세포수중 TE 세포수는 2배 처리군이 가장 높았으며, ICM 세포수는 아미노산 첨가량이 증가할수록 많아졌다. 한편 LAH의 경우 PB 출현율은 5mg 첨가군이 가장높았으며, 배반포로의 발달율은 미첨가군과 1 mg 첨가군이 5 mg 첨가군과 10 mg 첨가군보다 각각 유의하게 높았다(p<0.05). 그리고 배반포의 세포수는 NEAA와 EAA를 이용하였을 경우와 비슷한 경향이었다. 이상의 결과로부터 체외성숙용 배지에 아미노산의 첨가는 생산된 배반포의 품질을 향상시킬 수 있기 때문에 배반포의 체외생산에 이용할 수 있는 새로운 아미노산의 종류 및 농도를 탐색할 필요가 있다고 사료된다.
Objective: Present study was aimed to verify the effect of granulocyte macrophage-colony stimulating factor (GM-CSF) in the preimplantation development of mouse embryos and the involvement of the mitogen activated protein kiase (MAPK) in the GM-CSF signaling. Methods: Two-cell embryos were cultured for 96 h in the presence or absence of GM-CSF (0, 0.4, 2, 10 ng/ml) and PD98059, a MEK inhibitor (10 ${\mu}M$). Morphological development, cell number per blastocyst, and apoptotic nuclei, were eamined. MAPK activity of embryonic immunoprecipitate by MAPK (ERK1/2) antibody was measured by in vitro phosphorylation of myelin basic protein. Results: At post hCG 122 h the embryonic development among the experimental groups was significantly different (p=0.018). The rate of blastocyst development and cell number per embryo were the highest in 2 ng/ml GM-CSF treatment group. The percent of apoptotic cells of the GM-CSF-treated embryos was the lowest among the group. In blastocysts, GM-CSF treatment transiently increased MAPK activity. PD098059 attenuated the effect of GM-CSF on the morphological development, increase in cell number per blastocyst, down regulation of apoptosis, and upregulation of MAPK activity, suggesting that activation of MAPK cascade possibly mediated the embryotropic effect of GM-CSF. Conclusion: This result suggested that GM-CSF potentiated the development of preimplantation mouse embryos by activation of MAPK.
본 연구는 수정란을 수란우에 이식하기 이전에 형질전환가능 수정란을 선발할 수 있다면 형질전환동물의 생산에 크게 도움이 되므로 3.2 kb $\beta$-actin promoter (lacZ/n대) DNA를 미세주입하여 배반포기배에서의 발현을 확인하여 이들을 선발할 수 있는가를 규명하고자 하엿다. 채란된 난포란은 10%FBS, 5$\mu\textrm{g}$/ml LH, 0.5$\mu\textrm{g}$/ml FSH, 100 unit/ml penicillin 및 100 $\mu\textrm{g}$/ml streptomycin이 함유된 TCM199에 22~24 시간동안 체외성숙을 유도후 5$\mu\textrm{g}$/ml heparin으로 수정능획득을 유도한 1$\times$106 sperm/ml의 정자로 체외수정을 시켰다. 체외수정후 18~20시간째에 vortexing에 의해 과립막세포를 제거하고 원심분리시켜 자/웅전핵이 확인되는 수정란의 핵에 3~4 ng/${\mu}\ell$ lacZ/neo DNA를 미세주입하였다. 모든 수정란의 배양은 3 mg/ml BSA, 20${\mu}\ell$/ml NEM AMINO acids 및 40${\mu}\ell$/ml BME amino acids가 함유되어 있는 CR1aa 배양액에 neo/DNA로 transfected 된 BRL 단층에서 실시하였다. G418에 대한 적정농도를 찾기 위하여 정상적인 수정란에 0, 50, 100 및 200 $\mu\textrm{g}$/ml G418를 첨가하여 배양한 결과 8일째에 30.3%(44/145), 8.7%(13/150), 0.7%(1/151) 및 0% (0/134)의 수정란이 배반포기까지 발달하였다. 그래서 본 실험에서는 일정하게 100$\mu\textrm{g}$/ml G418을 첨가하여 배양하였다. 총 1,127개의 수정란을 미세주입후 G418 없는 배양액에서 710개 (63.0%)가 분할하였다. 미세주입후 48시간째에 2-세포기이상 분할된 수정란을 대조구 및 100$\mu\textrm{g}$/ml G418처리구를 무작위로 할당하여 배양하였으며, 또한 740개의 정상수정란도 같은 반복수로 배양을 실시하였다. 미세주입한 수정란은 8일 후 11.6%(26/255) 및 5.2% (14/267)가 대조구 및 G418 처리구에서 배반포기까지 발달하였으며 정상수정란은 27.2% (151/740)가 배반포기 배까지 발달하였다. 미세주입후 대조구에서는 23.1$\pm$2.6/70.7$\pm$4.7 (32.7%)의 할구가 $\beta$-Gal 활력을 보였고, 반면에 100$\mu\textrm{g}$/ml G418 처리구에서는 40.3$\pm$4.1/48.8$\pm$7.5 (82.6%)가 $\beta$-Gal 활력을 보였다. 비록 mosaic 형태로 외래유전자가 발현되었지만 대조구에서 87.0% (26/30개) 배반포기가 $\beta$-Gal 활력을 보인 반면, G418 처리구에서는 모든 배반포기가 $\beta$-Gal 활력을 보였다 (P<0.05). 그러나 대조구 및 G418 처리구의 ICM colony에서는 영양배엽과 내배엽을 제외한 epiblast에서는 확인되지 않았다. 그러나 이 결과로부터 $\beta$-actin promoter/lacZ gene이 integration되지 않는 것인지 또는 다만 염색 확인이 되지 않는 것인지를 판단할 수는 없다. 이상의 결과는 미세주입후 G418에서 배양한 배반포기배에서는 대부분의 할구에서 주입된 gene을 발현하고 있었으나 ICM colony에서는 특히 epiblast에서는 발현되지 않거나 침묵하고 있었다. 비록 G418 처리구에서 훨씬 더 높은 비율로 주입된 gene이 발현되고 있으나 총세포수는 유의적으로 감소하여 이후 형질전환동물의 생산과 ES like-cell의 설립에는 감소될 것으로 사려된다. 그러나 형질전환 수정란의 선발 및 형질전환동물의 생산능력에 관해서는 더 많은 연구가 필요하다고 사려된다.
Ohboshi, S.;Hanada, K.;Zhao, J.;Hattori, M.;Fujihara, N.;Umetsu, R.;Yoshida, T.;Tomogane, H.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
/
제9권5호
/
pp.583-590
/
1996
The purpose of this study was to evaluate some factors in the bovine embryonic development from one-cell to blastocyst using modified synthetic oviduct fluid medium (mSOFM), after maturation and in vitro fertilization of the oocytes. The embryonic development to the blastocyst stage was assessed at 7-10 days after in vitro fertilization, and the total cells in the blastocysts were counted by staining nuclei with fluorochrome. Some commercial calf sera (CS) and a superovulated cow serum had different effects on the embryonic development to the blastocyst stage (8.6-21.4%), dependent upon their product lots, although the development might not be affected at least by serum progesterone levels. ${\beta}$-Mercaptoethanol (${\beta}$-ME) supplemented into mSOFM was effective to the embryonic development (27.8%), as well as the co-culture system with cumulus cells (19.5%). In a serum- and feeder cell-free culture using mSOFM containing several growth factors and ${\beta}$-ME instead of CS plus co-cultured cumulus cells, bovine serum albumin (BSA, fraction V), but not polyvinyl alcohol (PVA), was highly effective in embryonic development to the blastocyst stage, almost comparable to CS in the serum-contained culture (CS, BSA and PVA; 27.8, 19.5 and 5.7%, respectively). However, fatty acid free BSA rather reduced the number of developed blastocysts, compared with fraction V BSA (7.3 vs 29.4%). In the serum- and feeder cell-free culture, supplement of glucose to the medium (final 2.0 mM) stimulated the cell proliferation of developing embryos 120 hr after in vitro fertilization. These results indicated that a serum-free medium supplemented with ${\beta}$-ME could successfully support the development of bovine one-cell embryos to the blastocyst stage. Moreover, supplement of glucose and fatty acids to the medium might support preferably the development and cell proliferation of embryos.
To investigate the effect of EDTA on the in vitro development of blastomeres isolated from 2, 4, and 8-cell embryos(termed 1 /2, 1 /4 and 1 /8 blastomeres, respectively) of ICR strain mice, those were cultured in vitro in 35 mm culture dishes containing NaHCO$_3$-BMOC-3 medium supplemented with 10, 50, 100, or 500 $\mu$M of EDTA at 37$^{\circ}C$ for 72hrs. under the atmosphere of 5% $CO_2$and 95% air. EDTA supplementation of 10, 50, or 100 $\mu$M to medium significantly(P<0.01) increased blastocyst formation rate compared with controls in 1 /2(58.3, 63.7, and 61.3% vs 21.6%), 1 /4(54.7, 57.5 and 62.2% vs. 2L3%), and 1 /8 blastomeres(46.2, 48.7, and 57.7% vs. 19.1%). Whereas, it was significantly(P<0.01) decreased to 4.5, 2.3, and 2.0% for 1 /2, 1 /4 and 1 /8 blastomeres, respectively by the EDTA supplementation of 500 M Both the nuclear number(P<0.05) and diameter of blastocysts(P<0.01) developed from balstomeres were significantly affected by the origin of blastomeres. The nuclear number of blastocysrs developed from 1/2, 1/4, and 1/8 blastomeres ranged 28.3i1.3, 24.18i1.2, and 19.84$\pm$0.9, respectively. And the diameter of those blastocysts was 87.2$\pm$1.1, 56.4$\pm$0.9, and 39.2$\geq$0.8 $\mu$M, respectively.
The present study compares development of rabbit embryos generated using different oocyte activation protocols and reconstructed with embryonic or cumulus cells as nuclear donor. In vivo matured oocytes were collected from New Zealand White rabbits at 16 h after ovulation treatment and were activated at18 h of post-ovulation treatment. The following schemes of oocytes activation were tested: 1) single electric pulse (EP, 3.2 kV/cm, 3${\times}$20 $\mu$s, 0.3 M mannitol)+5 min culture in the presence of 5 mM Ionomycin, 2) single electric pulse (EP, 3.2 kV/cm, (${\times}$20 $\mu$s, 0.3 M mannitol)+1 h culture in the presence of 2 mM 6-DMAP, and 3) three electric pulses 30 min apart. Cleavage rate, percentage of expanded and hatched blastocysts as well as total cell number of blastomeres of parthenogenetic embryos were significantly higher using either EP+6-DMAP or 3${\times}$EP schemes, comparing with EP+Ionomycin. Development rate up to hatched blastocyst stage of cloned rabbit embryos using the EP+6-DMAP for activation of nuclei were 19% for embryonic cell nuclei and 36% for cumulus cell nuclei. The best activation protocol optimalized in this study was the combined treatment "P+6-DMAP" which may be potentially used for nuclear transfer protocol.
Alpha lipoic acid (ALA) is a biological membranes compound. As the antioxidant, it decreases the oxidized forms of other antioxidant substances such as vitamin C, vitamin E, and glutathione (GSH). To examine the effect of ALA on the in vitro maturation (IVM) of porcine oocytes, we investigated intracellular GSH and reactive oxygen species (ROS) levels, and subsequent embryonic development after parthenogenetic activation (PA). Intracellular GSH levels in oocytes treated with 50uM ALA increased significantly (P < 0.05) and exhibited a significant (P < 0.05) decrease in intracellular ROS levels compared with the control group. Oocytes matured with 50 uM of ALA during IVM displayed significantly higher cleavage rates (67.8% vs. 83.4%, respectively), and higher blastocyst formation rates and total cell number of blastocysts after PA (31.6%, 58.49 vs. 46.8%, 68.58, respectively) than the control group. In conclusion, these results suggest that treatment with ALA during IVM improves the cytoplasmic maturation of porcine oocytes by increasing the intracellular GSH levels, thereby decreasing the intracellular ROS levels and subsequent embryonic developmental potential of PA.
본 연구는 30% Ficoll과 0.3M sucrose가 함유된 mDPBS 용액에 40%의 ethylene glycol을 첨가함으로서 제조된 EFS40을 이용하여 1-세포기의 생쥐수정란을 효율적으로 동결할 수 있는 적정 조건을 확립하기 위하여 실시하였다. 체외수정에 의해 생산된 생쥐수정란은 1단계 동결법 혹은 2단계 동결법, 두 가지 동결 방법에 의해 각각 초자화 동결되었으며, 동결 후, 융해된 수정란의 생존율은 2-세포기로 분할율과 배양 5일째 탈출배반포기로의 발달율로 각각 검증하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1단계 동결법에서, 수정란을 직접 초자동결액에 1분 동안 노출시켰을 때, 수정란의 생존율은 85.5%, 발달율은 31.9%였다. 수정란을 먼저 20% ethylene glycol에 1, 3, 5분간 노출시킨 후, 1분동안 EFS40 용액으로 옮겨 동결하는 2단게 동결법에서는 1단게 동결법보다 낮은 생존율을 보였다(65.4, 53.6 및 29.6%). 가장 높은 생존율(95.9%)은 EFS40에서 30초동안 노출이 1단계 동결법에서 얻을 수 있었다. 이 조건하에서 2-세포기로 분할된 수정란의 63.8%가 탈출배반포기로 발달하였다. 또한, Differential labelling 기법을 이용하여 Total과 ICM(inner cell mass)의 세포수를 조사한 결과, 초자 동결 후 발달된 배반포의 Total과 ICM 세포수(63.2$\pm$16.9, 13.5$\pm$4.0)와 대조군 세포수(54.0$\pm$15.2, 12.3$\pm$4.6)간에는 각각 유의차가 인정되지 않았다. 이러한 결과는 동결로 인한 수정란의 발달율은 다소 낮았지만, 동결후 융해된 수정란은 정상적으로 배반포까지 발달함을 보여준다. 이러한 결과로 미루어 보아, 본 실험에 사용된 초자화 동결 방법은 1-세포기 생쥐 수정란을 성공적으로 동결시킬 수 있다는 것을 알 수 있었다.
Objective: The present study investigates pre- and post-implantation developmental competence of nuclear-transferred porcine embryos derived from male and female fetal fibroblasts. Methods: Male and female fetal fibroblasts were transferred to in vitro-matured enucleated oocytes and in vitro and in vivo developmental competence of reconstructed embryos was investigated. And, a total of 6,789 female fibroblast nuclear-transferred embryos were surgically transferred into 41 surrogate gilts and 4,746 male fibroblast nuclear-transferred embryos were surgically transferred into 25 surrogate gilts. Results: The competence to develop into blastocysts was not significantly different between the sexes. The mean cell number of female and male cloned blastocysts obtained by in vivo culture ($143.8{\pm}10.5$ to $159.2{\pm}14.8$) was higher than that of in vitro culture of somatic cell nuclear transfer (SCNT) groups ($31.4{\pm}8.3$ to $33.4{\pm}11.1$). After embryo transfer, 5 pregnant gilts from each treatment delivered 15 female and 22 male piglets. The average birth weight of the cloned piglets, gestation length, and the postnatal survival rates were not significantly different (p<0.05) between sexes. Conclusion: The present study found that the sex difference of the nuclear donor does not affect the developmental rate of porcine SCNT embryos. Furthermore, postnatal survivability of the cloned piglets was not affected by the sex of the donor cell.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.