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Development of Sperm MTT Assay for Its Application in Boar Semen

  • Jang, Hyun-Yong;Lee, Hee-Young;Cheong, Hee-Tae;Kim, Jong-Taek;Park, In-Chul;Park, Choon-Keun;Yang, Boo-Keun
    • 한국수정란이식학회지
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    • 제25권4호
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    • pp.229-235
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    • 2010
  • The MTT assay is one of superior evaluation methods widely used to analyze the viability of metabolically active cell. It can be used to determine the percentage of viable sperm through measurement of the reduction of MTT granules at mitochondria in sperm tail. The purpose of this study is to determine the optimal condition of a simple and easy MTT assay to validate boar sperm viability and compare the accuracy of this test with microscopic examination. The MTT reduction rate for sperm viability were analyzed in microtiter plates (96 well) from 1 hr to 5 hr incubation periods at $37^{\circ}C$ using spectrophotometer (microplate reader) at 550 nm wavelength. The remainder of semen sample was simultaneously examined to compare the correlation of accuracy between MTT assay and other sperm parameters. Those sperm parameters were included the motility, survival rates, membrane integrity, mitochondria activity and acrosome integrity. The OD values of MTT assay (MTT reduction rates) did not greatly change at 1 hr to 5 hr incubation periods in different proportion of live and freeze-killed sperms (dead sperm). The MTT reduction rates or survival rates were decreased according to the different concentration of live and dead sperm. The linear regression at 1 hr and 4 hr incubation periods in sperm MTT assay was y=291.55x-72.176 and y= 180.64x-44.569, respectively. There are high correlation between 1 hr and 4 hr incubation periods (p<0.001). The results of MTT assay and other sperm parameters has a positive correlation (p<0.01 or 0.05). The correlation coefficients for MTT assay was 0.88115 for motility, 0.89868 for survival rates, 0.91722 for membrane integrity and 0.77372 for acrosome integrity, respectively. In conclusion, the MTT assay can be used as a reliable and efficient evaluation method for boar sperm viability. It can be use practical means to evaluate the quality of boar sperm by a fast, inexpensive and easy method.

대조 추출물분획이 치은 섬유아세포의 생물학적 활성화에 미치는 영향 (EFFECT OF ZIZYPHI FRUCTUS EXTRACT ON THE BIOLOGICAL ACTIVITY OF GINGIVAL FIBROBLAST)

  • 양창호;이용무;조기영;배기환;정종평
    • Journal of Periodontal and Implant Science
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    • 제24권1호
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    • pp.144-154
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    • 1994
  • Final goal of periodontal treatment is to reconstruct the destructed periodontal tissue as well as to remove the necrotic pathologic elements. The purpose of this study is to investigate on the effect of Zizyphi extract to the inhibitory ability on collagenolytic activity of P gingivalis, biologic activity of gingival fibroblasts, and on the collagen and protein synthesis of gingival fibroblasts. Gingival fibroblast from giniva of first bicuspids from patient for orthodontic treatment were used and cultured. For the measurement of inhibitory ability of collagenolytic activity, crude enzyme was extracted and used on the basis of modified Ono's method. On the inhibition of collagenolytic enzyme from herbal extracts, collagenokit CLN-100 were used. The cellular activity of gingival fibroblast, were studied using MTT solution and measured optical density on 570mm by ELISA reader. To measure the effects on the ability of whole protein and collagen synthesis, cell membrane was destructed with ultrasonic grinder after culturing, centrifuged and counted by liquid scintilation counter. The inhibitory effects on producing of $IL-l{\beta}$ by monocyte, after promotion of producing $IL-l{\beta}$ by LPS, were compared with the mixture of herbal extracts and other drugs using thymocyte stimulation assay. About inhibitory effects of $PGF_2$. by gingival fibroblasts, herbal extract was compared with the addition of the other control groups using enzyme imunoassay. On the inhibition of collagenolytic activity by P. gingivalis, benzene extracts showed the most efficient inhibitory effects among the $19{\mu}g/ml$ of the compared extracts and 40.5% by Tetracycline. On the cellular activity promoting effects, compared extracts showed a bit of more effects than PDGF of $100{\mu}g/ml$ concentration and IGF of $20{\mu}g/ml$ concentration. All of the PDGF, IGF, Zizyphi Fructus extract should increase in collagen synthesis, but especially 70% ethylalcohol extracts of Zizyphi Fructus showed comparably high effects among the compared extracts. Effects on whole protein synthesis were slightly increased on every extract but especially 70% ethylalcohol extract showed significantly effective than any other estract. On the inhibitory effects of Zizyphi Fructus $IL-l{\beta}$ production by monocyte, compared extracts showed 70% of highly inhibitory effect than that of 60% inhibition effects on controlled group and each extracts showed no significant difference. In $PGF_2$ production inhibitroy effect of Zizyphi Fructus gingival fibroblasts, Herbal extracts showed 70% of inhibition comparing with tat of 90.2% of controlled group, but each extracts showed similar effects excluding the $H_2O$ extracts. These results suggested that Zizyphi Fructus might be useful medicine for inhibition of inflammatory mediator including $IL-l{\beta}$ and $PGF_2$.

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In vitro response of rat microglia and human polymorphonuclear cells (PMN) to immunoactive compounds

  • Lombardi, Valter RM;Eetcheverria, Ignacio;Fernandez-Novoa, Lucia;Diaz, Joaquin;Seoane, Silvia;Cacabelos, Ramon
    • Advances in Traditional Medicine
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    • 제5권3호
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    • pp.216-230
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    • 2005
  • Although the field of study in immune enhancing compounds is relatively new, natural products from plants represent a rich and promising source of novel molecules with immunomodulating properties, Microglial cells, the main immune effector cells of the brain, usually display a ramified morphology and low expression levels of immunologically relevant antigens such as MHC class I and class II. Since any compound which participates in activation of phagocytic cells contributes to the production of potentially toxic factors, the search for convenient in vitro test-systems and study of mechanisms of action of these agents are of great interest. Human blood polymorphonuclear (PMN) cells and primary microglial cells isolated from Sprague-Dawley rats were used as cellular screening tests for study of phagocytosis-stimulating action of immunomodulating agents. Numbers of phagocytic activity were evaluated by the phagocyte ingestion of yeast cells and NO-synthase activity, nitrite production, and nitroblue tetrazolium test were determined after phagocyte stimulation. It was possible to demonstrate that indexes of phagocytic activity can be used as quantitative indicators for measurement immunomodulating activity. As a positive control, Zymosan A-induced phagocytosis in both PMN cells and primary microglial cells was used. $IFN-{\gamma}$ (0.1 -1 U/ml) stimulated phagocytosis in PMN cells 1.2 times after 2 - 3 h incubation, although at higher concentrations (10 - 100 U/ml) it strongly inhibited phagocytosis. In a similar way, at higher concentrations, $IFN-{\gamma}$ (100 - 500 U/ml) suppressed phagocytosis in zymosan-A stimulated microglial cells. When Polypodium leucotomus, cambricum and vulgare extracts were tested alone, increased levels of phagocytosis were observed in PMN. In addition, microglial cells showed both increased phagocytosis and MHC class-II antigen expressions. Surprisingly, when PMN and microglia were treated with a combination of Polypodium and $IFN-{\gamma}$, phagocytosis was not inhibited. We did not find changes in NO-synthase activity and nitrite production in both microglia and PMN cells activated by different immunomodulating agents. These results indicate that primary microglial cell cultures as well as human PMN cells can provide reproducible quantitative results in screening phagocytic activity of different immunoactive compounds. Furthermore, both inhibitory or activation mechanisms might be studied using these in vitro experimental approaches.

교육시설의 공기환경 실측에 관한 연구 (A Study on the Measurement of Indoor Air Pollutants in High School Building)

  • 김선정;김병수
    • 대한설비공학회:학술대회논문집
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    • 대한설비공학회 2008년도 하계학술발표대회 논문집
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    • pp.1392-1397
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    • 2008
  • This study is to measure the change of the $CO_2$ and floating dust concentration depending on the volume of the ventilation and the state of on/off the ventilation for the estimation of the air pollution in classroom. The results could be summarized as follows: the test cell was the two full scaled model and the one is set up with ventilation system another was not. the volume of classroom is 170.1m3 and the number of persons are 35. 1)when the ventilation system was not installed, The experimental results of the $CO_2$ concentration showed the average of 2,150ppm and the maximum of 2,740ppm in the classroom. This was the higher than 1,000ppm, the standard value of ASHRAE and the enforcement regulations of School Sanitation Code in Ministry of Education & Human Resources Development, 1000ppm. The $CO_2$ concentration was relatively increasing during school hours. 3)In case of the volume of ventilation of $800m^3$/h, the $CO_2$ concentration of classroom showed the average of 962 ppm and the maximum of 1,380 ppm. This was higher than 1,000ppm, the standard of ASHRAE and the enforcement regulations of School Sanitation Code in Ministry of Education & Human Resources Development. 4)The floating dust(PM10) was the maximum of 0.52 mg/$m^3$, the minimum of 0.25 mg/$m^3$, and the average of 0.32 mg/$m^3$ in case of the ventilation system off. Those were higher than the standard value 0.15 mg/$m^3$. In case of the ventilation system on, the floating dust(PM10) was the maximum of 0.174 mg/$m^3$ , the minimum of 0.048 mg/$m^3$, and the average of 0.078 mg/$m^3$. These were the lower than 0.15 mg/$m^3$, the standard of the enforcement regulations of School Sanitation Code in Ministry of Education & Human Resources Development. 5)The concentrations of $CO_2$ and PM10 were largely depending on the number of students and the ventilation system, The installation of the ventilation system is necessary for the amenity environment and the management of the indoor air quality.

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폐 전지로부터 재활용 과정을 통한 란타넘, 네오디뮴 회수에 관한 연구 (A Study on the Recovery of Lantanum and Neodymium from Waste Battery Through the Recycling Process)

  • 채병만;이석환;김득현;서은주;김현일;이승환;이상우
    • 청정기술
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    • 제26권2호
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    • pp.116-121
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    • 2020
  • 본 연구에서는 유가금속 회수를 한 전기차 폐배터리 부산물의 재활용에 관하여 연구하였다. 폐배터리 부산물에는 희토류들이 남아있으나, 부산물의 형태로는 소재로서의 가치가 없기에 정제과정을 거쳐 희토류 산화물로 회수하였다. 희토류침전분말 형태의 부산물을 30% 수산화나트륨을 이용하여 가공이 편한 수산화물로 변환한 뒤, 옥살산의 용해도 차이를 이용하여 남아 있는 불순물을 정제한 뒤, D2EHPA (Di-(2-ethylhexyl) phosphoric acid)를 사용하여 이트륨을 분리하였다. 과망가니즈산 칼륨을 이용하여 세륨을 분리 후, PC88A (2-ethylhexylphosphonic acid mono-2-ethylhexyl ester)를 사용하여 란타넘과 네오디뮴을 분리하였다. 그 후 800 ℃의 온도에서 소성하여 란타넘, 네오디뮴 산화물로 재생하는 방법을 확인하였다.

Nicotine Dihydroiodide의 結晶構造 (The Crystal Structure of Nicotine Dihydroiodide)

  • 구정회;김훈섭
    • 대한화학회지
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    • 제9권3호
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    • pp.134-141
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    • 1965
  • 니코틴 二沃化水素酸鹽의 結晶은 直角非等軸結晶係(料方晶係)에 屬하며 空間群은 $p2_12_12_1$이다. 單位格子의 크기는 a=7.61, b=11.01 및 e=17.27${\AA}$이며 單位格子안에 들어있는 化學單位의 水는 4이다. 이 結晶의 構造를 X-線廻折法에 依하여 解析하였으며 R 値 ${\sum}{\mid}{\mid}F_{\circ}{\mid}-{\mid}F_c{\mid}{\mid}{\div}{\sum}{\mid}F_{\circ}{\mid}$$F_{orl}$$_{kol}$에 關하여 各各 0.16및 0.14의 값을 이룰 때까지 精密化 하였다. 原子間距離의 精密化를 試圖하지는 않았지만 피리딘 고리 안의 C-C 및 C-N의平均距離는 各各 1.40 및 $1.35{\AA}$의 값을 가진다. 피리딘 고리 內의 各原子는 實驗誤差內에서 同一平面上에 있으며 피롤리딘 고리에서는 $C_6,\;C_7,\;C_8$$N_2$原子는 大略 同一平面上에 있으나 $C_9$는 이 平面으로 부터 約0.22${\AA}$ 떨어져있다. 피리딘 고리의 平面과 $C_6,\;C_7,\;C_8$$N_2$가 이루는 平面의 各法線은 約 $94^{\circ}$를 이루고 있다. 이코틴 二沃化水素酸鹽의 한 分子內의 두個의 요오드 原子中 한개는 피리딘 고리의 窒素原子와 $3.55{\AA}$의 距離로 連結되여 있으며 다른 한개는 피콜리딘 고리의 窒素原子 와 $3.58{\AA}$의 距離로 連結되여 있다. 結晶內에서 各 分子는 Van der Waals force로 서로 接燭되여 있다.

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스티렌 유도체를 이용한 비불소계 고분자 전해질막의 산화적 안정성 개선 (Improvement of Oxidative Stability for Non-fluorinated Membranes Prepared by Substituted Styrene Monomers)

  • 문승현;우중제;푸롱창;서석준;윤성현
    • 멤브레인
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    • 제17권4호
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    • pp.294-301
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    • 2007
  • 비불소계 스티렌 고분자 전해질 막의 산화안정성을 개선하기 위해 p-methyl styrene, t-butyl styrene, ${\alpha}-methyl$ styrene과 같은 스티렌 유도체를 단독 또는 복합으로 도입하고 모노머 흡수법을 이용하여 막을 제조하였다. 제조된 막의 특성분석으로 중합무게비, 함수율, 이온교환용량, 수소이온 전도도 및 가속조건에서의 산화안정성을 조사하였다. 사용된 스티렌 유도체의 구조 및 특성에 따라 모노머 흡수, 중합 및 술폰화 단계가 영향을 받는 것으로 나타났다. 산화적으로 안정한 고분자를 형성하는 ${\alpha}-methyl$ styrene은 중합 단계가 어렵기 때문에 스티렌 또는p-methyl styrene과 공중합하여 제조하였고 p-methyl styrene과 공중합된 ${\alpha}-methyl$ styrene 막은 스티렌과 공중합한 막보다 높은 전도도 및 안정성을 나타내었으나 낮은 분자량으로 인해 안정성의 개선을 크게 보이지 못하였다. 벤젠 고리에 큰 치환기를 갖는 t-butyl styrene은 모노머 흡수 및 술폰화과정이 용이하지 않기 때문에 제조된 막의 성능이 감소하였으며 이를 p-methyl styrene과 공중합할 때 우수한 성능과 스티렌막보다 크게 개선된 안정성을 보였다.

청소년기에 발생한 ADAMTS-13 활성도 저하와 항체 양성을 보인 혈전저혈소판혈증자색반병 1례 (Thrombotic thrombocytopenic purpura with decreased level of ADAMTS-13 activity and increased level of ADAMTS-13 inhibitor in an adolescent)

  • 양은미;한동균;백희조;신명근;김영옥;국훈;황태주
    • Clinical and Experimental Pediatrics
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    • 제53권3호
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    • pp.428-431
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    • 2010
  • 혈전저혈소판혈증자색반병은 혈관 내피 세포 손상에 의한 혈전미세혈관병증으로 미세혈관병용혈빈혈, 혈소판감소증과 미세혈관 혈전에 의한 다양한 정도의 신경 및 신장 침범을 보인다. 이는 소아에서는 드물게 발생하며 종종 치명적인 경과를 보일 수 있다. 혈전저혈소판혈증자색반병은 ADAMTS-13 유전자 변이에 의한 결핍을 보인 선천성 그리고 ADAMTS-13 항체들에 의해 발생하는 후천성인 경우로 분류할 수 있다. ADAMTS-13 활성도 및 순환 항체검사, 그리고 항 ADAMTS-13 IgG와 ADAMTS-13 염기서열분석은 이 질환의 진단에 중요하다. 후천성 환자에게는 혈장교환술이 주된 치료이며, 스테로이드제나 면역억제제도 사용된다. 저자들은 청소년기에 발생한 ADAMTS-13 활성도 저하와 항체 양성을 보인 후천성 혈전저혈소판혈증자색반병을 진단 후 혈장교환술로 효과적으로 치료하였던 1례를 보고하는 바이다.

콘크리트내 염소이온량이 전기저항에 미치는 영향 (Influence of Chloride Content of on Electrical Resistivity in Concrete)

  • 윤인석;남진원
    • 한국구조물진단유지관리공학회 논문집
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    • 제18권6호
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    • pp.90-96
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    • 2014
  • 콘크리트의 전기저항은 철근부식 개시 이전인 잠복기와 철근부식되는 진전기 두과정과 유관된다. 염소이온에 노출된 콘크리트 구조물의 전기저항은 초기 부식율의 위험도를 표현할 수 있는데, 낮은 전기저항은 빠른 염소이온 침투와 높은 부식속도를 의미하기 때문이다. 콘크리트의 전기저항은 인가된 전압과 전류간의 비율인 전기저항으로 표현된다. 이전의 연구에 의하면 콘크리트의 전기저항은 콘크리트내 수분량, 미세구조 및 탄산화 등에 크게 의존하였다. 습윤량과 전기저항의 관계를 다룬 연구가 적지만 존재하는 반면, 염소이온이 전기저항에 미치는 연구를 행한 연구는 매우 드물다. 본 연구의 목적은 염소이온이 콘크리트의 전기저항에 미치는 영향을 고찰하는 것이다. 실험결과에 의하면 염소이온량은 전기저항을 떨어뜨리는 것으로 나타났으며 이는 선형의 관계가 성립되었다. 초기 양생 50일 이전까지 전기저항의 감소추세는 뚜렷하였으며, 이후로는 염소이온량과 상관없이 일정하였다. 결과적으로 본 연구는 염소이온량을 함유한 콘크리트의 전기저항을 표현하는데 결정적인 방법을 제안하였다.

전분반죽의 점도에 미치는 수분함량의 영향 (Effect of Moisture Content on Viscosity of Starch Dough)

  • 이부용;이창호;이철호
    • 한국식품과학회지
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    • 제27권4호
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    • pp.582-592
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    • 1995
  • 옥수수전분과 찰옥수수전분을 사용하여 중간 수분계의 수분함량으로 반죽을 제조하고 수분함량과 가열온도, 가열시간에 따른 전분 반죽의 물성 변화와 호화양상을 밝혀보고자 하였다. 이를 위하여 먼저 전분반죽과 같은 반고체(semi-solid) 물질의 물성을 측정할 수 있는 Extrusion Capillary Viscometer(ECV)를 자체 제작하였다. ECV를 사용하여 수분함량 $36{\sim}52%$ 범위로 제조된 옥수수전분과 찰옥수수전분 반죽의 물성측정 시 반죽의 열전달 특성은 가열온도 $60{\sim}100^{\circ}C$ 범위에서 수분함량이 36%에서 52%로 증가할수록 반죽의 중심온도가 원하는 가열온도에 도달하는데 걸리는 시간이 220초에서 140초로 크게 단축되었다. 가열 후 ECV로 물성을 측정한 결과, 수분함량과 가열온도의 모든 범위에서 반죽은 의가소성 유체의 흐름 특성을 나타내었다. 동일한 전단속도에서는 반죽 수분함량이 증가할수록 전단응력과 전단점도가 전체적으로 감소하여 수분함량 증가에 따른 반죽의 유동성(flowability) 증가 영향이 매우 큰 것으로 나타났다. 그러나 44% 이상의 동일 수분함량 내에서는 $80^{\circ}C$ 이상의 가열온도부터는 동일한 전단속도에서 $80^{\circ}C$ 이하로 가열한 반죽에 비해 전단응력과 전단점도가 증가하는 경향을 보여 주었다. 반죽의 점도에 미치는 수분함량의 영향은 수분함량이 증가할수록 반죽의 유동성의 크기가 증가하여 전체적으로 전단응력이나 점도가 감소하는 것으로 나타나지만, 가열온도가 호화온도 이상인 $80^{\circ}C$부터는 전분호화에 의한 점도 증가에 의하여 수분함량에 따른 농도 의존성지수(B)값이 크게 감소하고 $60^{\circ}C$$70^{\circ}C$ 가열온도보다도 수분함량의 영향이 적게 미치는 것으로 나타났다.

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