• 제목/요약/키워드: Canavalia lineata

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해녀콩(Canavalia lineata) 자엽에서 Homoserine Dehydrogenase의 정제 및 특성 (Purification and Properties of Homoseine Dehydrogenases in Canavalia Iineata Cotyledons)

  • 최영명
    • Journal of Plant Biology
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    • 제39권1호
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    • pp.41-48
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    • 1996

  • 발아 후 8일된 해녀콩 자엽에서 성질이 서로 다른 두 개의 homoserine dehydrogenase를 분리하였다. 자엽에서 얻은 조효소액을 열처리, 황산 암모늄 침전, DEAE-Sephacel 및 Sephacryl S-300 겔 크로마토그래피와 Procion red dye, Cibacron blue dye 및 Resource Q 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 겔 크로마토그래피에서 얻은 2개의 활성분획 중 T-형(트레오닌 감수성)과 K-형(트레오닌 비감수성)의 분자량은 각각 230 kD과 135 kD이었다. 10mM 트레오닌 첨가로 T-형 효소는 70% 이상의 활성저해를 받았으나 K-형 효소는 전혀 억제를 받지 않았다. Homoserine에 대한 Km은 T-형이 1.6mM, K-형이 0.3mM이었고, NAD에 대한 Km은 T-형이 2.34mM, K-형이 0.03mM이었으며 NADP에 대한 Km은 두 효소에서 동일하게 0.01mM로 산출되었다. 400mM KCl에서 T-형은 4.9배, K-형은 2.8배의 활성증가를 보였다. 부분정체(Sephacryl S-300 겔 크로마토그래피)된 상태의 T-형과 K-형은 조건에 따라 쉽게 상호전환되었다.

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해녀콩의 발아와 생장시 Canavanine의 이용과 Canavanase의 활성에 대하여 (On Utilization of Canavanine and Activity of Canavanase during Germination and Growth of Canavailia lineata (L.) DC)

  • 권영명
    • Journal of Plant Biology
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    • 제29권2호
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    • pp.85-94
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    • 1986

  • Canavanine content of the cotyledons of Canavalia lineata decreased gradually during germination and growth of seedlings but continued to increase in roots and leaves. After abscission of cotyledons, canavanine content of leaves depleted competely. The activity of canavanase could be detected in leaves and roots, but not in cotyledons. High arginase activity was observed in the cotyledons of seeds at the earlyimbibition period. During the growth of seedlings, cotyledonary canavanine appeared to be transported to the growing of seedlings where it could be utilized through nitrogen metabolic pathways. In crude cell-free extracts of leaves, maximum activities of canavanase or arginase appeared in 30mM Tris-HCl buffer (pH 9.0) or 30mM NaHCO3 buffer (pH 10.0), respectively. The activities of these two enzymes differed from each other when treated with Co2+ or Mn2+. These results support the idea that canavanase and arginase might be different enzymes.

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Rhizobium sp. SNU003의 nifHD 클로닝 (Molecular Cloning of nifHD from Rhizobium sp. SNU003)

  • 강명수;안정선
    • 미생물학회지
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    • 제31권2호
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    • pp.123-128
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    • 1993

  • 해녀콩 뿌리혹의 질소고정 공생균인 Rhizobium sp. SNU003 균주의 게놈내 7.9 kb 의 EcoRI, 6.5kb 의 SalI, 7.3 kb 의 HindIII 와 4.4 kb 의 PstI 절편에 nifHD 가 존재함을 확인하였다. 람다파아지 EMBL3-BamHI arm 을 사용하여 genomic library 를 제조하였으며 이로부터 nif-유전자를 포함하고 있는 9개의 재조합 파아지 클론을 선별하였다. 이들 중 15.3 kb 의 삽입 DNA 를 가지고 있는 Rnif-6 클론은 7.6 kb 의 BamHI/SacI 절편에 nifHD 가 위치하고 있었다. 따라서 이절편을 pUC19 에 sub cloning 하고 제한효소 지도를 작성한 결과 Rhizobium sp. SNU003 의 nifH 와 nifD 는 4.5 kb 의 BamHI/BglII 절편에 연속배열하고 있다.

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해녀콩 유식물 자엽내 BApNAase의 성질

  • 고석찬
    • Journal of Plant Biology
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    • 제37권2호
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    • pp.175-181
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    • 1994

  • 해녀콩(Canavalia lineata) 유식물 자엽에서 N-$\alpha$-benzoyl-DL-arginine p-nitroanilide hydrolase(BApNAase)를 부분정제하여 그 성질을 밝혔다. 부분정제한 BApNAase는 purification fold가 77.5이었고 회수율은 7%이었으며 비활성도는 7.75 unit/mg이었다. BApNAase의 분자량은 200 kD이고 젤라틴분해효소 P3인 것으로 밝혀졌으며 최적 pH는 9.5이었다. BApNAase의 Vmax와 Km은 각각 15.5 unit/mg와 1.6 mM로 최대반응속도가 동물의 트립신보다 7배 가량 낮은 반면에 N-$\alpha$-benzoyl-DL-arginine p-nitroanilide(BApNA)에 대한 기질 친화성은 4배 가량 높았다. 또한, BApNAse는 1 mM의 phenylmethanesulfonyl fluoride(PMSF)에 의해 90%나 크게 억제된 반면 aprotinin에 의해서는 크게 억제되지 않아 트립신과는 다른 serine proteinase로 판단되었으며, 효소활성은 Ca2+과 Mg2+에 의해 다소 증가하나 Mn2+, Hg2+, Zn2+에 의해 크게 억제되었다.

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