Background: Efficient gene editing technology is needed for successful knock-in. Homologous recombination (HR) is a major double-strand break repair pathway that can be utilized for accurately inserting foreign genes into the genome. HR occurs during the S/G2 phase, and the DNA mismatch repair (MMR) pathway is inextricably linked to HR to maintain HR fidelity. This study was conducted to investigate the effect of inhibiting MMR-related genes using CdCl2, an MMR-related gene inhibitor, on HR efficiency in HC11 cells. Methods: The mRNA and protein expression levels of MMR-related genes (Msh2, Msh3, Msh6, Mlh1, Pms2), the HR-related gene Rad51, and the NHEJ-related gene DNA Ligase IV were assessed in HC11 cells treated with 10 μM of CdCl2 for 48 hours. In addition, HC11 cells were transfected with a CRISPR/sgRNA expression vector and a knock-in vector targeting Exon3 of the mouse-beta casein locus, and treated with 10 μM cadmium for 48 hours. The knock-in efficiency was monitored through PCR. Results: The treatment of HC11 cells with a high-dose of CdCl2 decreased the mRNA expression of the HR-related gene Rad51 in HC11 cells. In addition, the inhibition of MMR-related genes through CdCl2 treatment did not lead to an increase in knock-in efficiency. Conclusions: The inhibition of MMR-related gene expression through high-dose CdCl2 treatment reduces the expression of the HR-related gene Rad51, which is active during recombination. Therefore, it was determined that CdCl2 is an inappropriate compound for improving HR efficiency.
Kim, Su-Jung;Shin, Youn-Hee;Kim, Kyung-Hoon;Park, Eun-Hee;Sa, Jae-Hoon;Lim, Chang-Jin
BMB Reports
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v.36
no.3
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pp.326-331
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2003
The fission yeast cells that contained the cloned glutathione synthetase (GS) gene showed 1.4-fold higher glutathione (GSB) content and 1.9-fold higher GS activity than the cells without the cloned GS gene. Interestingly, $\gamma$-glutamylcysteine synthetase activity increased 2.1-fold in the S. pombe cells that contained the cloned GS gene. The S. pombe cells that harbored the multi copy-number plasmid pRGS49 (containing the cloned GS gene) showed a higher level of survival on solid media with cadmium chloride (1 mM) or mercuric chloride ($10\;{\mu}M$) than the cells that harbored the YEp357R vector. The 506 bp upstream sequence from the translational initiation point and N-terminal8 amino acid-coding region were fused into the promoteriess $\beta$-galactosidase gene of the shuttle vector YEp367R to generate the fusion plasmid pUGS39. Synthesis of $\beta$-galactosidase from the fusion plasmid pUGS39 was significantly enhanced by cadmium chloride and NO-generating S-nitroso-N-acetylpenicillamine (SNAP) and sodium nitroprusside (SN). It was also induced by L-buthionine-(S,R)-sulfoximine, a specific inhibitor of $\gamma$-glutamylcysteine synthetase (GCS). We also found that the expression of the S. pombe GS gene is regulated by the Atf1-Spc1-Wis1 signal pathway.
This study was performed to investigate the effects of Korean native plant diets on lipid and cadmium (Cd) metabolisms and also antioxidative enzyme activities in rats. Seventy male Sprague-Dawley rats weighing 210.3$\pm$2.7g were blocked into ten groups according to body weight. Rats were raised for four weeks with diets containing 0 or 0.04%(w/w) cadmium chloride and 5%(w/w) plant powder-Ssook(Artemisia princeps var. orientalis HARA), Chamchwi(Aster scaber THUNB), Gomchwi(Lingularia fischeri TUBCZ). or Solbeerum (Portulaca oleracea LINNE). Food intake, weight gain, food efficiency ratio, and weights of liver, kidney, spleen and epididymal fat were significantly lower in Cd-exposed groups, food efficiency ratio, and weights of liver, kidney, spleen and epididymal fat were significanlty lower in Cd-exposed groups. Plasma total lipid level, liver total lipid, cholesterol and triglycerde concentrations, and fecal total lipid, cholesterol and triglyceride excretions were decreased by Cd administration. Total lipid and triglyceride concentration in plasma and liver were lower in Chamchwi groups together with increased fecal total lipid and triglyceride excretions. Cholesterol concentration in plasma and liver were lower in Gomchwi groups with increased fecal cholesterol excretions. Activities of red-blood-cell superoxide dismutase(SOD), and liver catalase, SOD and glutathione peroxidase (GSH-px) were decreased significantly by Cd administration. Thiobarbituric acid reactive substance(TBARS) concentrations of plasma and liver were increased by Cd administration. Thiobarbituric acid reactive substance(TBARS) concentration of plasma and liver were increased by Cd administration. Administration of plant diets decreased plasma and liver catalase, SOD and GSH-px activities in Cd-free diet groups and increased them in Cd-administered groups. Plasma and liver TBARS concentrations were decreased in animals fed plant diets, with Chamchwi showing the most effective antioxidative capacity. The concentration of Cd accumulated in blood and tissue decreased in Cd-exposed groups fed plant diets. Liver Cd concentration were lower in the Chamchwi and Gomchwi groups, and kidney Cd levels were lower in the Ssook and Chamchwi groups. Among them, Chamchwi was the most effective in Cd detoxification. In conclusion, Chamchwi and Gomchwi were effective in lowering tissue lipid levels, with Chamchwi having the greatest antioxidative and detoxifying effects.
Cadmium pentachlorophenolxanthate has been synthesized with pentachlorophenol, carbondisulfide sodium hydroxide and cadmium chloride and its fungicidal activity was tested to Pyricularia oryzae and Cochliobolus miyabeanus. The results are summarized as followes; 1) The sample V synthesized by acidifying the crude PCP-xanthate solution at pH 8, then treated with $BaCl_2\;and\;CaC_2$ showed the highest purity, and the yield was $85.1\%$. 2) The same sample of $50\%$ wettable dust formulation inhibited conidial germination of P. oryzae and C. miyabeanus completely at 10 and 20 ppm, respectively. (Fig. 1) 3) The sample of $1.5\%$ dust formulation inhibited mycelial growth of P. oryzae and C. miyabeanus with 96 and $65\%$, respectively. The results were similar to those obtained by Ceresan calcium (Fig. 2) 4) Both dust and wettable powder formulations had no phytotoxcity on rice seedlings.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.27
no.5
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pp.980-986
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1998
The effects of mungbean sprout juice on cadmium-induced hepatotoxicity in rats were investigated. Sprague-Dawley rats weighing about 90g were divided into 4 groups and raised for 6 weeks. ; control group(CON), mungbean sprouts juice-administered group(MSJ), cadmium-administered group(CAD) fed water containing 40 ppm cadmium chloride and mung bean sprouts juice and cadmium-administered group(MCD). The diet was supplied every day for the measurement of feed efficiency ratio(FER) and net weight gain was measured every 3 days. The activities of serum glutamic oxaloactic transaminase(GOT) and glutamic pyruvic transaminase(GPT), superoxide dimutase(SOD), catalase and glutathione peroxidase(GSH-Px) in the liver and the hepatic contents of glutathione were examined. The contents of Cd in liver and kidney of the rats were determined by using ICP(Inductively Coupled Plasma Emission Spectrophotometer). Growth rate and FER were decreased in CAD group, compared with CON group but the changes were not significant in MCD group. The activities of serum GOT and GPT, SOD, catalase and GSH-Px in the liver were increased by Cd administration, but the alterations were decreased by supplementation with mungbean sprouts juice. The level of glutathione decreased in CAD group(26.8$\pm$9.0mg/g liver), whereas it increased in MCD group(36.4$\pm$15.8mg gliver). The content of Cd in the liver and kidney in MCD group(9.57 ppm, 4.88 ppm) was decreased, compared with CAD group(12.81 ppm, 5.46 ppm). This result suggested that mungbean sprout juice has a lowering effect on the accumulation of Cd in the liver and kidney and it is believed that the juice has some protective effects to Cd-induced hepatotoxicity in rats, but the mechanism of these effects was obscure.
The beekeeping pest insect Galleria mellonella larvae(greater wax moth) were reared on an artificial diet contaminated indipendently with cadmium chloride($CdCl_2$) at different concentrations(1.25, 2.50, 5.00, 10.0 20.0, 40.0 ${\mu}g/g$ food fresh weight). Results of these studies suggested that Cd exposure of G. mellonella may influence its whole body lipid contents. We decided, therefore, to analyze lipid content of G. mellonella exposed to different concentrations of Cd. Lipid concentrations were measured photometrically by phosphovanillin method. Significant decrease in the total lipid content was found in Cd-contaminated larvae and pupae. In this study, six kinds of lipids were separated, and they were phospholipid, monoglyceride, diglyceride, sterol, fatty acids, triglyceride. And fatty acids were proved to consist of palmitic acid, stearic acid, oleic acid and linolenic acid. Palmitic acid, linoleic acid and oleic acid were found high rate in all groups, but stearic acid was low. In conclusion, lipid contents decreased in Cd-contaminated groups in comparison to the control group.
This study was to investigate the effects of chitin, chitosan , NOCC and cellulose on cadmium toxicity and lipid metabolism in rats. Fifty male rats of Sprague-Dawley strain weighing 155$\pm$17g were divided into 10 groups according to body weight, and were raised for 5 weeks. Levels of 0 and 400 ppm of cadmium chloride were in the diets. And chitin, chitosan , NOCC and cellulose were given at the level of 0 and 4%(w/w) of the diets. Chitosan and NOCC decreased Cd concentration of liver and kidney, and increased the fecal excretion of Cd. Although cellulose was less effective, cellulose also decreased Cd concentration of liver and increased fecal Cd excretion . However chitin had little effect on alleviating Cd toxicity. In addition, chitosan and NOCC lowered total lipid, cholesterol and triglyceride contents in serum and liver by decreasing the lipid absorption. The lowering of cholesterol especially had a remarkable effect. Although it was less effective than chitosan and NOCC, chitin decreased the lipid absorption ratio and lowered cholesterol contents in serum and liver. In conclusion , chitosan and NOCC showed effects of decreasing the absorption of Cd and lipid.
Kim, Shin-Ho;Lee, Yoon-Bok;Kim, Yong-Jin;Kim, Yang-Do;Kim, In-Bae
Korean Journal of Materials Research
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v.16
no.11
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pp.663-667
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2006
CTAB(cetyltrimethylammonium bromide)-capped CdSe nanoparticles were prepared by using a 4 : 1(v/v) distilled water-isopropyl alcohol mixture. The cadmium chloride and sodium selenosulfate were used as the cadmium and selenium source. By the analysis of XRD and XPS, the resultant particle was confirmed to be cubic CdSe phase. TEM image showed CdSe nanoparticles with empty core. The CTAB-capped sample showed an maximum absorption at 418nm, blue-shifting compared with bulk CdSe, which indicated stronger quantum confinement effect compared with uncapped sample. From FT-IR analysis, it was found that the presence of the new peaks in the $850{\sim}1250cm^{-1}$ range indicated the existence of chemical bonding between CTAB and surface of CdSe nanoparticles. Also TG analysis indicated that there were two weight-loss steps for the CTAB-capped CdSe nanoparticles. It was suggested that CTAB played a significant role in protecting CdSe nanoparticles.
Adelung, Sandra;Lohrengel, Burkhard;Nghiem, Long Duc
Membrane and Water Treatment
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v.3
no.2
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pp.123-131
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2012
This study investigated the extraction and stripping performance of PIMs consisting of PVC and Aliquat 336. Extraction and stripping of three representative heavy metals - namely $Cd^{2+}$, $Cu^{2+}$, and $Zn^{2+}$ - by the synthesized membranes were evaluated as a function of sodium chloride concentration and under different stripping solutions (0.01 M $HNO_3$, Milli-Q water, 0.01 M HCl and 0.01 M NaOH), respectively. Results reported here indicate that the formation of negatively charged metal chloride complex species was responsible for the extraction of the target metal to PIMs. Experimental results and thermodynamic modeling of the speciation of chloro metal complexes further confirm that the extraction selectivity between $Cd^{2+}$, $Cu^{2+}$ and $Zn^{2+}$ can be controlled by regulating the chloride concentration of the feed solution. An acidic solution without any chloride was the most effective stripping solution, followed by Milli-Q water, and a diluted hydrochloric acid solution. On the other hand, the stripping of metals from PIMs did not occur when a basic stripping solution was used.
Kim, M.H.;Kim, K.S.;Lee, H.B.;Chae, S.H.;Jung, A.Y.;Jo, Y.Y.;Kim, M.H.;Moon, C.K.
Proceedings of the PSK Conference
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2003.04a
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pp.158.2-159
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2003
Cadmium is well known as a toxic metal and has insulin mimicking effects in rat adipose tissue. To investigate the effect of CdCl2 on glucose transport and its mechanism, this study was performed in 3T3-L1 adipocytes. 10 and 25mM of CdCl2 exposed to cells for 12 hours increased 2-deoxyglucose uptake to 2.2 and 2.8 fold, respectively. Nifedipine, a calcium channel blocker, inhibited the 2-deoxyglucose uptake stimulated by CdCl2. (omitted)
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[게시일 2004년 10월 1일]
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