• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제61권1호
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• pp.59-67
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• 2018

본 연구는 경상남도 산청군 소재 경남과학기술대학교 학술림에서 채취한 토양으로부터 CMCase와 xylanase를 생산하는 3개의 Bacillus종을 분리하였다. API kit 분석과 16S rRNA 유전자 염기서열 분석을 통해 3개의 균 모두 Bacillus종에 속하였으며, Bacillus sp. EFL1, EFL2, EFP3로 명명하였다. Bacillus sp. EFL1, EFL2, EFP3의 최적 생장온도는 $37^{\circ}C$였으며, CMCase와 xylanase의 활성은 배양 후 12시간에 최고에 달하였다. Bacillus sp. EFL1의 CMCase 효소활성의 최적온도는 $50^{\circ}C$, pH는 5.0이었고, xylanase 효소활성의 최적온도는 $50^{\circ}C$, pH 6.0이었다. Bacillus sp. EFL2의 CMCase활성의 최적온도는 $60^{\circ}C$, pH는 5.0이었고, xylanase 효소활성의 최적온도는 $60^{\circ}C$였고, pH 3.0-9.0까지 비교적 높은 활성을 보였다. Bacillus sp. EFP3의 CMCase의 최적온도는 $50^{\circ}C$, pH는 5.0이었고, xylanase의 최적온도는 $50^{\circ}C$, pH 4.0이었다. Bacillus sp. EFL1, EFL2, EFP3의 CMCase는 모두 온도안정성이 낮았다. 또한 Bacillus sp. EFL1과 EFP3의 xylanase 역시 온도안정성이 낮았지만, Bacillus sp. EFL2의 xylanase는 온도안정성이 높았다.

• 한국균학회지
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• 제15권1호
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• pp.29-37
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• 1987

창덕궁의 유물고에 소장되어 있는 섬유질 문화재로부터 섬유소 분해균을 분리하기 위하여 두 단계의 선별을 거쳐서 섬유소 분해능이 강력한 Cellulolytic fungus를 분리하였다. 이 균주는 형태학적인 분류기준을 통하여 Aspergillus clavatus로 동정되었다. 이 균주에서 CMC 액체배지에서의 CMCase, avicelase와 salicinase의 생성은 $30^{\circ}C$의 shaking culture 조건에서 5 일에 가장 높았으며, 그 이후는 점차 감소하였다. crude extracellularenzyme 을 $70%(NH_4)_2SO_4$ 포화용액에서 침전시켜 20mM acetate buffer(pH 6.0)로 dialysis시킨후 효소에 대한 여러가지 성질을 비교하였다. CMCase와 avicelase의 최적 pH는 모두 pH6.0으로 중성에 가까왔으며 두 효소의 최적온도는 모두 $50^{\circ}C$이었다. 효소의 열에 대한 안정도에서는 CMCase, avicelase 모두 $30-50^{\circ}C$에서 안정성을 유지하였고 또한 효소의 활성에 미치는 기질농도의 영향을 보먼 CMCase는 1.5%에서 avicelase는 2.2%에서 최고의 활성을 나타냈다. 금속이온의 영향을 살펴본 결과 $Mg^{++}$와 $Ca^{++}$는 5mM에서 효소의 활성이 최고에 달하였으며 $Cu^{++}$와 $Zn^{++}$에서는 농도가 증가할수록 효소의 활성이 저해되었다. 또한 이 균주의 섬유소 분해효소는 2-mercaptoethanol, $I_2$, $NaN_3$ 등의 저해제에 의하여 활성이 크게 저해되었다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제48권4호
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• pp.322-325
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• 2005

Pseudomonas sp. JH1014는 세제 첨가용으로 사용 가능한 알칼리성 단백질 분해효소를 생산하는 균주로 하천수에서 분리되었다. 이 균주는 LB 배지에서는 CMCase를 생산하지 않았으나, 배지에 기질인 carboxymethyl cellulose를 첨가하면 분해효소인 CMCase의 생산이 유도되었으며, CMC 첨가에 따른 증식 양상의 변화는 없었다. CMC를 첨가한 배지로 $37^{\circ}C$에서 진탕배양 하였을 때 균의 증식은 $9{\sim}12$시간 후에 최대에 도달하였으며, 생산된 효소의 활성은 21시간 후에 최대에 도달하였다. 조효소액의 CMCase 활성 최적 pH는 6.0, 최적 온도는 $55^{\circ}C$였으며, $70^{\circ}C$에서 10분 동안 열처리한 후의 잔존활성은 70%였다. 부분 정제된 효소를 SDS-PAGE 후 활성염색한 결과 분자량이 54와 30 kDa인 두 개의 활성띠가 관찰되어, Pseudomonas sp. JH1014는 적어도 두 종류의 CMCase를 생산하는 것으로 보인다.

• 한국균학회지
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• 제26권1호통권84호
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• pp.127-133
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• 1998

Trichoderma reesei QM 9414를 N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine으로 처리하여 얻은 돌연변이주들을 여러 탄소원에서 배양했을 때 carboxymethylcellulose(CMC), fiter paper 등의 기질에 대한 활성측정결과 다음과 같은 결과를 얻었다. 모균주가 catabolite repression을 받는 반면에 돌연변이주들의 cellulase 활성은 glucose를 탄소원으로 사용한 배지에서 모균주에 비해 CMCase 8.4배, FPase가 $5.4{\sim}5.7$배 증가함으로써 glucose-derepression성질을 갖는 돌연변이주들을 얻었으며 glucose를 탄소원으로 사용하고 lactose로 효소의 생산을 유도시켜본 결과 모균주에 비해 효소의 생산에 안정성을 갖는 것으로 나타났으며 돌연변이주 1이 상대적으로 더 우수한 돌연변이주로 나타났다. 돌연변이주들에 의해 생산된 효소는 모균주와 마찬가지로 pH 4.8, $60^{\circ}C$에서 최적활성을 나타내었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권4호
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• pp.365-369
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• 1989

Tyichoderma viride가 생산하는 cellobiohydrolase의 열불활화 특성을 잔류효소역가 측정방법과 면역학적 정량방법으로 측정하였다. 정제된 cellobiohydrolase의 열불활 곡선은 Arrhenius plots에서 직선관계를 가졌고 이 때의 Z-값은 carboxymethyl cellulase의 정량시 5.2$^{\circ}C$, filter pa per degradation activity 정량시 6.4$^{\circ}C$, Immunoassay시 5.8$^{\circ}C$로 각기 나타났다. 열역학 상수 산출시는 immunoassay 와 filter paper degradation activity 측정이 carboxymethyl cellulase의 역가 측정보다 잘 일치하는 것을 알 수 있었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제3권2호
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• pp.86-90
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• 1993

CMCase positive clones were screened from Cellulomonas sp. YE-5 and named pCE1, pCE2 and pCE3. Among the positive clones pCE1 was used for this study, because it has the smallest insert and the highest CMCase activity among the 3 clones, and its nucleotide sequence was determined. The CMCase gene in pCE1 was composed of 1071 bp of nucleotides coding 357 amino acids. Computer analysis showed that the pCE1 has 65% sequence homology with the endoglucanase from Cellulomonas fimi.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제10권6호
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• pp.770-775
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• 2000

Several process parameters were studied to ascertain the effect on degradation of sugar cane bagasse in relation to the production of cellulase enzyme and reducing sugars by Solid Substrate Fermentation (SSF) and Submerged Culture Fermentation (SCF) of Aspergillus terreus SUK-1. The effect of air-flow rate (0-1.3 v/v/m), of different ratios of substrate weight to liquid volume (1:6, 1:10, 1:20, and 1:30 w/v, g/ml), scale-up effect (10, 20, and 100 times of 1:10 ration, w/v) and the effect of temperature (30, 40, 50, and $60^{\circ}C$) in SSF were studied. Air-flow rate of 1.0 v/v/m gave the highest enzyme activity (FPase 0.25 IU/ml, CMCase 1.24 IU/ml) and reducing sugars concentration (0.72 mg/ml). Experiment using 1:10 ratio (w/v) was found to support maximum cellulase activity (FPase 0.58 IU/ml, CMCase 1.97 IU/ml) and reducing sugar concentration (1.23 mg/ml). Scaling-up the ratio of 1:10(w/v) by a factor of 20 gave the highest cellulase activity (FPase 0.71 IU/ml, CMCase 2.25 IU/ml) and reducing sugar concentration (3.67 mg/ml). The optimum temperature for cellulase activity and reducing sugar production was $50^{\circ}C$(FPase 0.792 IU/ml, CMCase 2.25 IU/ml and 3.85 mg/ml for reducing sugar concentration). For SCF, the activity of cellulase enzyme and reducing sugar concentration was found to be lower than that obtained for SSF. The highest cellulase activity obtained in SCF was 50% lower than the highest cellulase activity in SSF, while for reducing sugar concentration, the highest concentration obtained in SCF was 90% lower than that obtained in SSF.

• 한국균학회지
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• 제26권2호통권85호
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• pp.239-245
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• 1998

섬유소를 분해하여 이용하기 위해서는 섬유소 분해효소를 대량으로 생산하는 것이 중요하며 이를 위해서는 적절한 탄소원을 이용하여 섬유소 분해효소의 대량생산을 유도하는 것이 중요하다. 본 실험에서는 Trichoderma reesei Rut C-30을 섬유소 분해효소의 생산 균주로 solka floc을 탄소원으로 사용하여 섬유소 분해효소의 활성을 증가시키기 위한 배지내 최적 농도가 1%이고 포도당이 0.5%이상 배지에 첨가 될 경우 섬유소 분해효소의 생산이 저해됨을 알 수 있었다. 정제된 섬유소인 solka floc이 목질섬유소인 wheat bran과 함께 탄소원으로 사용되었을 때 각각을 섬유소 분해효소 생산의 유도 물질로 이용했을 때보다 더 높은 CMCase 활성과 FPase 활성을 보였다. Solka floe 1%와 wheat bran 3%을 탄소원으로 사용한 배지의 CMCase 활성이 76 U/ml, FPase 활성이 12.6 U/ml로 가장 높은 값을 나타내었다.

• 미생물학회지
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• 제35권4호
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• pp.277-282
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• 1999

우분으로부터 cellulase를 생산하는 미생물을 congo red 염색과 활성측정을 통해 선발하여 cellulase 활성이 우수한 균을 분리하였다. 분리균은 생화학적, 형태학적, 균체 지방산 조성을 근거로 Bacillus subtilis CH-10으로 동정하였다. 분리균이 분비하는 효소학적 특성 중 효소생산 조건은 초기 pH7.5 및 배양돈도 50${\circ}C$ 그리고 48시간 배양이 가장 적합하였다. 조효소액에서 CMCase 최적 온도는 75${\circ}C$이었고, 온도안정성은 50${\circ}C$까지 70%의 효소활성을 유지하였다. 조효소액에서 CMCase 최적 pH는 7.5이었고, pH 안정성은 pH7.5~9.0 영역에서 70%의 효소활성을 유지하였다. 분리균을 CMC 배지에서 37${\circ}C$, 24시간 배양시 나타난 CMCase와 Fpase 활성은 각각 1.13 U/㎖와 0.16U/㎖ 였으나 avicelase와 ${\beta}$-glucosidase의 활성은 검출되지 않았다. CMC-SDS-PAGE 방법으로 3개의 효소활성 band를 확인하였고, Cel 1 및 2 그리고 Cel 3의 분자량은 각각 약 39 및 41 그리고 57kDa이었다.

• 한국균학회지
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• 제24권3호통권78호
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• pp.206-213
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• 1996

Talaromyces luteus 6112 균주에 돌연변이원 N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine을 처리하여 고온성 돌연변이주인 T. luteus 2004를 선별하였다. T. luteus 2004 균주는 고온성 섬유소 분해 효소인 carboxymethylcellulase(CMCase)와 그 외의 다당류 분해효소인 avicellase, xylanase, ${\beta}-glucosidase$ 등을 생성하였다. 고온성 섬유소 분해효소의 생성은 3% carboxymethylcellulose(CMC) 최소배지에서 가장 높게 유도되었으므로 CMC가 CMCase 생성의 유도물질임을 알 수 있었다. 고온성 섬유소분해효소의 생성에 있어서 포도당과 D-cellobiose는 CMCase 생성에 catabolite repressor로 작용함을 보여 주었다. T. luteus 2004의 섬유소 분해효소의 효소학적 특성은 $70^{\circ}C$, pH 4에서 최고의 활성을 보여주는 고온성 효소이므로 대체에너지 개발에 활용 가능한 균주로 사료된다.