• 대한의생명과학회지
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• 제8권4호
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• pp.211-215
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• 2002

The baculovirus/Sf9 cell expression can be employed as a powerful system for producing large amounts of the human erythrocyte glucose transporter, GLUT1 heterologously In order to exploit the system further, it is necessary to develop a convenient method for demonstrating that the transporter expressed in insect cells is biologically active. To achieve this, we have expressed the human CLUT1 in insect cells and photolabelled the expressed protein with [$^3$H] cytochalasin B, a potent inhibitor of the human erythrocyte glucose transporter. Subsequently, the labelled proteins were analysed by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Membranes labelled with [$^3$H] cytochalasln B in the presence of L-Glucose yielded a single sharp peak of labelling of apparent $M_r$ 45,000 on SDS/polyacrylamide gels. The mobility of this peak corresponded exactly to that of the band detected by anti-glucose transporter antibodies on Western blots of membranes prepared from insect cells infected with recombinant virus. In addition, the sharpness of the radioactive peak provides further evidence for the conclusion that the expressed protein is much less heavily and heterogeneously glycosylated than its erythrocyte counterpart. No peak of labelling was seen with the membranes prepared from non-infected Sf9 cells. Furthermore, the incorporation of label into this peak was completely inhibited by the presence of 500 mM-D-Glucose during tile photolabelling procedure, showing the stereoselectivity of the labelling. These evidences clearly show that human glucose transporter expressed in insect cells exhibits native-like biological activity, and that photolabelling with [$^3$H] cytochalasin B can be a convenient means for analysing the biological activity of the transport protein expressed in insect cells.

• 생명과학회지
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• 제17권6호통권86호
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• pp.859-866
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• 2007

본 연구는 임신횐쥐에서 운동이 혈중 인슐린과 렙틴 농도, 그리고 골격근의 GLUT-4와 VAMP-2단백질 발현에 변화를 조사하기 위하여 수행되었다. 본 연구에서 비임신 횐쥐에 비해 임신 횐쥐에서 혈중 인슐린 농도가 유의하게 증가되었고, 렙틴 농도는 유의하게 감소하는 것으로 나타났다. 임신횐쥐에게 달리기 운동을 적용한 결과 임신으로 증가된 인슐린 농도를 유의하게 감소시키면서 렙틴 농도의 감소를 억제시키는 것으로 나타났다. 골격근에서 GLUT-4와 VAMP-2 단백질 발현량을 조사한 결과 비임신 횐쥐에 비해 임신 횐쥐에서 이러한 단백질 발현이 유의하게 감소되었지만, 임신 중 달리기운동을 경험한 횐쥐에서 GLUT-4와 VAMP-2 발현 모두 유의하게 증가되는 것으로 나타났다. 이와 잘이 임신으로 인한 혈중 인슐린 및 렙틴의 변화가 골격근에서 당을 근조직으로 흡수하는 신호 전달 경로와 수송체의 발현 손상과 연관되어있음을 보여주는 것이다. 하지만 임신 횐쥐에서 달리기 운동은 인슐린과 렙틴 농도의 변화를 완화시킴으로써 골격근의GLUT-4와 VAMP-2발현을 유의하게 증가시키는 것으로 나타났다.