Capacitated and acrosome~reacted spermatozoa were microinjected into the perivitelline space of bovine oocytes matured in vitro. Oocytes obtained from the ovaries of slaughtered heifers and cows were cultured in vitro in the TCM-199 supplemented with 20% FCS for 24 hr at 39$^{\circ}C$ under an atmosphere of 5% CO$_2$ 8% O$_2$. Fresh or frozen spermatozoa were incubated for 2 hr at 39°C under an atmos-phere of 5% CO$_2$, 8% O$_2$ in Ham's F-lO medium containing 0.75% BSA for capacitation, and kept for 30 min in culture medium containing 12 mM of dbcGMP and lOmM of immidazol for acrosome resction. One motile spermatozoon was injected into the perivitelline space of each oocyte. The 2nd polar body and the pronuclei were observed in 9.5% and 5.4% of oocytes, respectively. The rate of cleavage of oocyte over 2-cell stage was 4.1%(10 of 242), These results indicate that the microinjection may be a useful technique to study sperm-oocyte interaction.
This experiment was carried out to investigate ultrastructural changes that occurred in bovine epididymal spermatozoa during incubation in a BO medium supplemented with 5 mM caffeine. No structural changes were observed under electron microscope in the majority of non-incubated sperm(79.8%) keeping the membrane intact. Structural changes were however observed when spermatozoa were cultured in a BO medium supplemented with 5 mM caffeine, which were classified into 4 types, intact(29.4%), vesiculated(45.6%), acrosome lost(17.8%) and degenerated(7.2%) spermatozoa, respectively. These results indicated that : 1) vesiculation of spermatozoa membrane is normal acrosome reaction and acrosome lost of spermatozoa is dead one ; 2) caffeine can induce acrosome reaction of bovine epididymal spermatozoa.
This studies were carried out to investigate the effects of co-culture with cumulus cells, oviduct epithelial cells and uterine endometrium cells on the in-vitro fertilization and cleavage rate of bovine follicular oocytes. The ovaries were obtained from slaughtered Korean native cows. The follicular oocytes surrounded with cumulus cells were recovered by aspirating follicular fluids from the visible follicles of diameter 3~5 mm. The follicular oocytes were cultured in TCM-199 medium containing hormones and 10% FCS for 24~48 hrs in a incubator with 5% CO2 in air at 38.5$^{\circ}C$ and then matured oocytes were again cultured for 12~18 hrs with motile capacitated sperm by preincubation. The results obtained in these experiments were summarized as follows: 1. The in vitro maturatin and fertilization rate of bovine oocytes co-cultured with cumulus cells in TCM-199 medium were 64.0~74.1% and 40.0~58.6% respectively. And in-vitro fertilization rate of cumulus-enclosed oocytes(55.4%) were significantly(p<0.05) higher than cumulus-denuded oocytes(23.1%). 2. The in-vitro maturatin and fertilization rate of bovine oocytes co-cultured with 1$\times$104 cells/ml, 1$\times$106 cells/ml, 1$\times$108 cells/ml and 1$\times$1015 cells/ml oviduct epithelial cells in TCM-199 medium were 59.3% and 40.7%, 64.0% and 48.0%, 58.3% and 37.5%, 52.0% and 32.0%, respectively. 3. The in-vitro maturation and fertilization rate of bovine oocytes co-cultured with 1$\times$104 cells/ml, 1$\times$106 cells/ml, 1$\times$108 cells/ml and 1$\times$1015 cells/ml uterine endometrium cells in TCM-199 medium were 56.0% and 36.0%, 60.7% and 42.9%, 59.3% and 37.0%, 52.0% and 36.0%, respectively. 4. When the in-vitro fertilized oocytes were co-cultured with cumulus cells, oviduct epithelial cells and uterine endometrium cells, the development rate to be blastocyst was 12.2%, 15.6% and 11.7%, respectively and rates were higher than that of control, 2.1%(P<0.05).
Supplementation of maturation medium with additional granulosa cells has beneficial effect on in vitro maturation of bovine follicular oocytes and their subsequent cleavage and development in vitro. However, maturation system using granulosa cells have some disadvantages that collection of granulosa cells is cumbersome and metabolic activity of the cells is variable according to ovarian cycle or follicular size. We hypothesized that bovine immsture oocytes matured without granulosa cell coculture can fertilize and develop normally if the medium volume per oocyte is reduced during in vitro maturation. Immature oocytes were matured for 24 hours in a TCM199 containing 10% fetal calf serum, anterior pitultary hormone (0.02 AU /ml Antrinⓡ) and estradiol with or without granulosa cells in vitro. In Group 1, 35 to 40 oocytes were matured in a well of 4-well plastic dish containing 500 $\mu$l of maturation medium and granulosa cells, and 9 to 10 oocytes were matured in a 50-$\mu$l drop of maturation medium without granulosa cells in Group 2. After maturation, oocytes were coincubated with sperm for 30 hours in a modified Tyrode's medium (IVF). Inseminated oocytes were cultured in a microdrop (30 $\mu$l) of a synthetic oviduct fluld medium (SOFM) containing BSA, Minimum Essential Medium essential and non-essential amino acids for 9 days. As a preliminary experiment, we investigated the beneficial effect of granulosa cells during maturation on subsequent cleavage and development using the same type of culturedishes (4-well dish). Granulosa cells could not increase embryo cleavage after fertilization but significantly improved (p<0.05) embryo development to expanding blastocyst (Table1 and 2). In Group 1, 68 and 80% of inseminated oocytes have cleaved at 30 hours and 2 days after IVF, respectively, which is similar (p>0.05) to the result of Group 2 (69% at 30 hours and 78% at 2 days after IVF). The oocytes in Group 2 showed 21 and 11% of developmental rates to expanding and hatching blastocysts, respectively, which was not significantly different (p>0.05) from those (20 and 10%, respectively) of oocytes in Group 1. In conclusion, it has been clarified that a microdrop culture system without granulosa cells for in vitro maturation can support bovine embryonic development to blastocyst in vitro as readily as a granulosa cell coculture system.
The objectives of this study were to investigate 1) the effects of Selenium(Se), Vitamin E (Vit. E) or recombinant Bovine Somatotropin(rBST) administration on fresh and frozen/thawed semen characteristics and 2) the effect of taurine on frozen/thawed semen characteristics in Hanwoo sires Hanwoo sires were randomly assigned to five groups (1. control, 2. rBST, 0.09mg/kg body weight (BW), 3. Vito E 1,500IU/kg BW, 4. Se 0.l mg/kg BW, 5. Vit. E 1,500IU plus Se 0.1 mg/kg BW). The administration of Se, Vit. E and rBST for each experimental group were given 6 times at 15 days interval by intramuscular injection. The administration of Se, Vit. E or rBST in Hanwoo sires didn't affect semen volume and pH values, but sperm viability was significantly increased comparing to the control group. Also, frozen/thawed semen analysis showed that the sperm viability increased, but any other effects were not found in total sperm :lumber, motility and abnormality among treatments. The addition of taurine in semen freezing extender had a beneficial effects on frozen/thawecl semen characteristics in all groups. The administrations of rBST, Vit. E and Se did not affect the sperm capacitation and acrosome reaction, either the ratio of F pattern(uncapacitated and acrosome intact sperm) or AR pattern(capacitated and acrosome-reacted sperm), but the ratio of B patten(capacitated and acrosome intact sperm) of treatment groups was significantly higher than that of control group, These results indicated that the viability, motility and quality of semen in Hanwoo sires were slightly increased by the injection of rBST, Vit. E and Se, and the addition of taurine in semen freezing extender were also increased the semen characteristics after thawing.
Iron is required for cell viability but is toxic in excess. While the iron-mediated malfunction of testicular cells is well appreciated, the underlying mechanism(s) of this effect and its relationship with fertility are poorly understood. Ferritin is a ubiquitous intracellular protein that controls iron storage, ferroxidase activity, immune response, and stress response in cells. Ferritin light chain protein (FTL) is the light subunit of the Ferritin. Previously, we had identified the FTL in bovine spermatozoa following capacitation. In present study, to investigate the role of Ferritin in sperm function, mice spermatozoa were incubated with multiple doses (1, 10 and $100{\mu}M$) of sodium nitroprusside (SNP), an iron donor. SNP was increased Ferritin levels in a dose-dependent manner. The Ferritin was detected on the acrosome in spermatozoa by immunocytochemistry. Short-term exposure of spermatozoa to SNP increased tyrosine phosphorylation and the acrosome reaction (AR). Finally, SNP affected a significant decrease in the rate of fertilization as well as blastocyst formation during early embryonic development. On the basis of these results, we propose that the effects of Ferritin on the AR may reduce overall sperm function leads to poor fertility in males and compromised embryonic development.
This study was conducted to improve the in vitro maturation(JVM), in vitro fertilization (IVF) and in vitro developmental capacity of oocytes derived from slaughtered Korean native cattle. The recoverd oocytes, obtained from a local slaughter house, were used completely surrounded by at least 3 layers of cumulus cells in combination with a homogeneous cytoplasmic pigmentation. In vitro maturation was induced in TCM-199 or Ham's F-10 supplemented with LH(1O $\mu$g/rnl), FSH(35 $\mu$g/ml), estradiol-17$\beta$(1 $\mu$g/ml) at 39$^{\circ}C$ under 5% $CO_2$ in air for 24 hours. Sperm from caudal epididyrnis and previously matured cumulus-oocytes complexes were cultured for 24 hours in 100 $\mu$l droplets of fertilization media under paraffin oil. The zygotes were cultured with media(TCM-199 with bovine oviductal epithelial cells or CRlaa) for 7 to 10 days. The cleavage rate of IVM-IVF oocytes was significantly (P<0.05) higher following maturation using Ham's F-10 (59.9%) than TCM-199 (51.6%). Development to the blastocysts among cleaved embryos was not signficantly different between maturation media: Ham's F-10 (16.0%) and TCM-199(11.9%). However, the hatching rate was affected significantly (P<0.05) on rnaturation media as 62.9% in Ham's F-10, compared with 41.2% in TCM-199. The cleavage rate of IVM-IVF oocytes was significantly (P<0.05) higher following IVF using m-TALP medium (80.1%) than BO medium (51.6%). The percentage of in vitro developed blastocysts among cleaved embryos was not signficantly different between fertimization media: BO (11.7%) and m-TALP (17.6%). The cleavage and the developmental rate to the blastocysts after IVF in m-TALP or condition medium(CM) with or without oviduct epithelial cell monolayer(OECM) was similar(80.1% and 17.6% in m-TALP, 83.8% and 19.4% in M-TALP with OECM. 82.9% and 18.9% in CM, 87.6% and 16.0% in CM with OECM, respectively). The percentage of in vitro developed blastocysts among cleaved embryos was significantly (P<0.05) higher in TCM-199 medium co-cul tured with bovine oviduatal epithelial cell monolayers(35.2%) than CRlaa medium(1.9%). These results stggest that the most transferable IVF embryos could be produced from Ham's F-10, m-TALP and TCM-199 medium with bovine oviductal epithelial cell monolayers for IVM, IVF and IVC, respectively.
This study was conducted to examine the effect of sustained release recombinant bovine somatotropin(SR-rBST) with different dosage(0, 0.03mg/kg body weight/14 day, 0.06mg/kg body weight/14 day, 0.09mg/kg body weight/14 day) on the economical traits of the semen characteristics and sexual behaviors and blood chemical values with sixteen Holstein dairy young bulls in Dairy Cattle Improvement Center of National Livestock Co-operatives Federation. Sensual testings of collected semens of Holstein young bulls were not different among treatments (p>0.05). Ejaculated semen volumes of control, SR-rBST 0.03mg, 0.06mg and 0.09mg groups were 5.6ml, 5.6ml, 6.0ml and 6.7m, respectively, but the result of SR-rBST 0.09mg group significantly increased semen volume(P<0.05). In sperm concentration, SR-rBST 0.06mg and 0.09mg groups significantly increased the total number of sperms than the other groups(P<0.05). In otherwise, SR-rBST treatments did not affect on pH, osmotic pressure, anti forzen rate, abnormality and motility of collected semen during whole experimental period. Reaction time(RT), sexual aggressiveness(SA) and tactile stimulation(TS) were not different among treatments. The libido scores(LS) of control, 0.03mg, 0.06mg and 0.09mg groups were 68.0, 80.5, 73.9 and 80.8, respectively, and LS were significantly improved by SR-rBST administration(P<0.05). The effect of SR-rBST on scrotal circumference measurement that is important factor to determine the ability of semen production, was not different among treatments. These studies indicates that SR-rBST treatments favourably affect on semen quality and sexual libido in Holstein young bull.
Fernandez, Maria Elena;Goszczynski, Daniel Estanislao;Prando, Alberto Jose;Peral-Garcia, Pilar;Baldo, Andres;Giovambattista, Guillermo;Liron, Juan Pedro
Journal of Animal Science and Technology
/
v.56
no.5
/
pp.17.1-17.4
/
2014
Puberty is a stage of sexual development determined by the interaction of many loci and environmental factors. Identification of genes contributing to genetic variation in this character can assist with selection for early pubertal bulls, improving genetic progress in livestock breeding. Thyroid hormones play an important role in sexual development and spermatogenic function. The objective of this study was to evaluate the association between single nucleotide polymorphisms (SNPs) located in thyroglobulin(TG) gene with age of puberty in Angus bulls. Four SNPs were genotyped in 273 animals using SEQUENOM technology and the association between markers and puberty age was analyzed. Results showed a significant association (P < 0.05) between these markers and puberty age estimated at a sperm concentration of 50 million and a progressive motility of 10%. This is the first report of an association of TG polymorphisms with age of puberty in bulls, and results suggest the importance of thyroidal regulation in bovine sexual development and arrival to puberty.
This study was carried out to cryopreserve and to investigate characteristics of semen in Hanwoo. Semen was obtained from bulls selected by Daekwanryeong Branch station. Semen was collected each morning of the experiment, placed in water jacketed tubes at 37$^{\circ}C$, and trans-ported to the research laboratory within 10 minutes. Semen was extended with Egg yolk-glycerol extender to contain 50${\times}$10$^{6}$ sperm/ml. Semen was cooled over a 6h period in water jacketed tubes from about 25 to 5$^{\circ}C$, Egg yolk-glycerol extender was added in one step at 5$^{\circ}C$. Semen was aspirated into 0.5ml straws, which were sealed with powder. Egg yolk-glycerol extender, which is used in Hanwoo sperm frozen and stored, semen from 13 Hanwoo bulls collected, the postthawed percentages of motile sperm were 65.7%. In semen characteristics of Hanwoo bulls, number of bulls volume are 5.7 ml and total cell count are 975${\times}$10$^{6}$ m1 ejaculate.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.